稀土氯化鑭增強卵巢癌順鉑耐藥細胞敏感性的蛋白表達分析及分子機制研究

辛佳凌 劉絲蓀

1.新余市人民醫(yī)院,江西 新余 338025；2.南昌大學第一附屬醫(yī)院,江西 南昌 336000

卵巢癌的死亡率在婦科惡性腫瘤中居于首位，嚴重威脅著女性的生命健康[1]。順鉑DDP在卵巢癌的治療中具有重要作用，但長期使用會產(chǎn)生耐藥性，是腫瘤復發(fā)的原因之一[2]。有研究發(fā)現(xiàn)稀土氯化鑭對腫瘤具有較高的親和性，與順鉑共同作用，逆轉順鉑的耐藥性以增強順鉑對腫瘤細胞的殺傷作用[3]。本文對氯化鑭增強卵巢癌順鉑耐藥細胞敏感性的相關分子機制進行探討，報道如下。

1 資料與方法

1.1方法

1.1.1細胞培養(yǎng) 將COC1、COC1/DDP(均購自上海奧陸生物科技有限公司)細胞復蘇后懸浮于含10%胎牛血清培養(yǎng)基中，37℃、90%濕度、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞，重懸并調(diào)整為1×104/mL，培養(yǎng)24h。

1.1.2MTT法檢測增殖抑制率 上述細胞，加入0、2、3、4μmol/L氯化鑭(購自美國sigma公司)培養(yǎng)48h，同時用IC50濃度的DDP聯(lián)合上述濃度氯化鑭培養(yǎng)COC1與COC1/DDP細胞48h。每個濃度設置3個復孔，48h后采用MTT(購自上海碧云天生物工程有限公司)試劑盒測定吸光度值，計算細胞增殖抑制率，細胞增殖抑制率=(1-實驗組OD/對照組OD值)×100%。

1.1.3蛋白凝膠電泳檢測蛋白表達情況 取對數(shù)期COC1/DDP細胞，制備成濃度為1×106/mL的單細胞懸液，將其分為空白對照組(正常培養(yǎng))、氯化鑭組(添加4μmol/L氯化鑭)、順鉑組(添加23.08μg/ml順鉑)與氯化鑭+順鉑組(添加4μmol/L氯化鑭+23.08μg/ml順鉑)，每個濃度設置3個復孔，培養(yǎng)48h，離心取沉淀，PBS洗滌，裂解30min，收集細胞于1.5mLEP管，離心取上清液，采用BCA蛋白定量法測定蛋白濃度進行蛋白凝膠電泳，采用凝膠成像系統(tǒng)分析蛋白表達量。

2 結 果

2.1不同濃度氯化鑭對細胞增殖抑制率的影響 增加DDP前后，氯化鑭對細胞的增殖抑制率均隨濃度的增加而增強，增加DDP后藥物對細胞的抑制率明顯升高(均P<0.05)。見表1。

表1 不同濃度氯化鑭對細胞增殖抑制率的影響

2.2氯化鑭對COC1/DDP細胞蛋白表達情況的影響 氯化鑭與DDP均能下調(diào)ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達，且氯化鑭+DDP組下調(diào)程度最大，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 氯化鑭對ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達情況的影響

3 討 論

卵巢癌具有侵襲性強、進展迅速與預后差等特點，在臨床上被發(fā)現(xiàn)時常常已是晚期，以鉑類為基礎的化療方案是其治療的標準方案。然而長久使用化療藥物，癌細胞容易出現(xiàn)耐藥性，其亦是化療對患者生命期延長作用不如人意的原因之一。近年來癌細胞耐藥性成為腫瘤學研究的熱點之一。

本研究結果顯示，增加DDP前后，氯化鑭對細胞的增殖抑制率均隨濃度的增加而增強，增加DDP后藥物對細胞的抑制率明顯升高；氯化鑭與DDP均能下調(diào)ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達，且氯化鑭+DDP組下調(diào)程度最大。其機制可能為ERCC1是調(diào)控信號通路中的重要限速酶之一，可以通過催化DNA鏈間交聯(lián)的修復，使得DNA損傷得以修復，從而造成鉑類耐藥；Ki67是細胞增殖相關核抗原與惡性腫瘤細胞的轉移復發(fā)均有著密切聯(lián)系；CDK6是細胞周期的重要調(diào)控因子，能促進細胞周期正向推進，并能促進細胞增殖，抑制細胞凋亡，與腫瘤的發(fā)生進展密切相關；c-Cbl是一種泛素連接酶，能降解多種蛋白質(zhì)。

綜上所述，稀土氯化鑭可下調(diào)ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達，從而提高卵巢癌細胞對順鉑的敏感性。