纖溶酶原激活物抑制劑－1基因多態(tài)性在惡性腫瘤合并靜脈血栓栓塞癥患者中的表達(dá)

賀小艷，夏春勇，滕金鳳，丁 玲

靜脈血栓栓塞癥 （venous thromboembolism，VTE）包括深靜脈血栓栓塞（deep venous thromboembolism，DVT）和肺栓塞（pulmonary thromboembolism，PE）。自19世紀(jì)50年代開始，越來越多的研究認(rèn)為纖溶系統(tǒng)基因突變與VTE的發(fā)病相關(guān)，其中血漿纖溶酶原激活抑制劑－1（plasminogen activator inhibitor－1，PAI－1）基因4G/5G的多態(tài)性會(huì)引起纖維蛋白溶解異常，與靜脈血栓形成密切相關(guān)［1］。國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明［2］，PAI－1 4G/5G啟動(dòng)子區(qū)域純合4G/4G基因的遺傳會(huì)導(dǎo)致纖維蛋白溶解障礙以及血栓形成。有研究表明，癌癥和靜脈血栓的形成具有很大的相關(guān)性，并且合并有靜脈血栓栓塞癥的癌癥患者預(yù)后更差［3］。因此，筆者選取惡性腫瘤合并VTE患者作為研究對(duì)象，同時(shí)選取同期在該院接受治療的惡性腫瘤患者作為對(duì)照進(jìn)行研究，利用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）測(cè)定PAI－1基因表達(dá)，并進(jìn)行比較分析，探討PAI－1基因在惡性腫瘤患者靜脈血栓發(fā)生的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2019年9月—2020年8月筆者醫(yī)院收治的32例確診為惡性腫瘤合并VTE患者作為研究組，其中肺癌10例、胰腺癌3例、宮頸癌3例、卵巢癌2例、食管癌2例、乳腺癌2例、前列腺癌2例、肝癌1例、結(jié)直腸癌1例、其他腫瘤6例；合并轉(zhuǎn)移22例，未轉(zhuǎn)移10例。選擇同期35例惡性腫瘤患者作為對(duì)照組，其中肺癌13例、食管癌3例、乳腺癌3例、肝癌3例、胰腺癌2例、前列腺癌2例、結(jié)直腸癌2例、卵巢癌1例、宮頸癌1例、其他腫瘤5例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移21例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)惡性腫瘤患者經(jīng)病理學(xué)或者細(xì)胞學(xué)檢測(cè)確診；VTE診斷標(biāo)準(zhǔn)按照美國胸科醫(yī)師學(xué)會(huì)2016年《靜脈血栓栓塞癥治療指南》［4］。該研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.3 主要儀器多通道熒光定量分析儀（型號(hào)：Fascan 48S），西安天隆科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 方法采集患者外周靜脈血2 ml于EDTA抗凝管中，送至醫(yī)院藥物基因檢測(cè)室進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)方法：將200μl血樣加入1 ml樣本萃取液中，上下顛倒離心管10次或振蕩，使血樣與樣本萃取液混勻；靜置10 min后，用高速離心機(jī)12000轉(zhuǎn)/min（7500 g離心力）離心3 min，富集得到“米粒樣”白細(xì)胞；加入400μl細(xì)胞保存液，振蕩混勻；取1μl白細(xì)胞樣本加入探針試劑中，離心約15 s，使白細(xì)胞樣本聚于探針試劑管底部。最后在熒光檢測(cè)儀上通過熒光原位雜交技術(shù)（FISH）完成檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。研究組和對(duì)照組之間的基因型和等位基因分布采用χ2檢驗(yàn)比較；采用χ2檢驗(yàn)基因型分布是否符合Hardy－Weinberg遺傳平衡法則。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PAI-1基因4G/5G基因型的總體分布PAI－1 4G/5G基因分布頻率，經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，預(yù)測(cè)例數(shù)與實(shí)際例數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.8698），符合Hardy－Weinberg遺傳平衡，表明所選取的樣本具有群體代表性。見表1、表2。

表1 PAI-1基因4G/5G基因型分布

表2 PAI-1 4G/5G基因分布Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)

2.2 2組PAI-1基因型比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，2組3種基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0198）；2組等位基因4G和5G頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0038）。見表3。

表3 2組PAI-1 4G/5G基因型及等位基因頻率分布［例（%）］

2.3 2組出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移的PAI-1 4G/5G基因型比較研究組出現(xiàn)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移的頻率與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0359）。對(duì)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移患者的PAI－1 4G/5G基因型比較，結(jié)果顯示，2組出現(xiàn)轉(zhuǎn)移患者的PAI－1 4G/5G基因型與同組未轉(zhuǎn)移患者比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表4 2組出現(xiàn)轉(zhuǎn)移PAI-1 4G/5G基因型頻率分布［例（%）］

3 討論

靜脈血栓栓塞癥（VTE）是一種多基因遺傳病。目前，已經(jīng)有多個(gè)基因被證明與VTE風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，如ABO基因，F(xiàn)II G20210A基因，F(xiàn)V Leiden，PAI-1 4G/5G，MTHFR C677T/A1298C，EPCR6936A/G等［4］。PAI-1屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族的成員，通過抑制組織型纖溶酶原激活劑-1（tissue-type plasminogen activator，t-PA）和尿激酶型纖溶酶原激活物（urokinase-typeplasminogen activator，u-PA），發(fā)揮著溶解血凝塊的作用［5］。PAI-1除了抑制血管內(nèi)纖維蛋白溶解之外，還參與細(xì)胞黏附、遷移的調(diào)控［6］。近年來，在靜脈血栓的相關(guān)研究中，PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)域4G/5G插入/缺失的多態(tài)性最為熱門。有研究發(fā)現(xiàn)，4G等位基因能夠結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活子，增強(qiáng)mRNA轉(zhuǎn)錄并提高PAI-1水平；與此相反，5G基因能夠結(jié)合阻遏蛋白，從而減少mRNA轉(zhuǎn)錄和降低PAI-1水平［7］。PAI-1純合子4G/4G基因型與PAI-1水平升高相關(guān)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)低纖維蛋白溶解狀態(tài)，從而增加靜脈血栓的形成風(fēng)險(xiǎn)［8］。該研究結(jié)果顯示研究組4G/4G基因型10例占31.25%，對(duì)照組4G/4G型4例占11.43%，4G4G基因多態(tài)性與靜脈血栓形成有顯著相關(guān)性。研究組5G/5G基因型6例占18.75%，對(duì)照組5G/5G型17例占48.57%，5G5G基因多態(tài)性與靜脈血栓形成有顯著相關(guān)性。有研究分析了u-PA、PAI-1基因的4G/5G多態(tài)性與接受輔助內(nèi)分泌治療的node-陰性、hr-陽性/her2-陰性特定乳腺癌患者的經(jīng)典預(yù)后因素之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)u-PA，PAI-1腫瘤組織水平低者生存率高，基因型4G5G和5G5G較基因型4G4G者生存率高，同樣提出u-PA和PAI-1腫瘤組織水平以及PAI-1基因的4G/5G多態(tài)性對(duì)乳腺癌患者預(yù)后評(píng)估具有重要意義的［9］。對(duì)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移患者的PAI-1 4G/5G基因型比較結(jié)果顯示，研究組、對(duì)照組出現(xiàn)轉(zhuǎn)移患者的PAI-1 4G/5G基因型與同組未轉(zhuǎn)移患者比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

PAI-1 4G4G可作為惡性腫瘤發(fā)生VTE的高危因素之一，可以在腫瘤患者發(fā)生血栓的預(yù)防、治療中發(fā)揮重要作用。由于該研究為單中心研究，且樣本量有限，未針對(duì)轉(zhuǎn)移嚴(yán)格設(shè)定納排標(biāo)準(zhǔn)，尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步深入研究。