固相萃取-高效液相色譜-串聯質譜法測定貝類中6種除草劑

◎ 王 堯，劉倩倩，劉修辰，王鵬功

（1.中國檢驗認證集團山東檢測有限公司，山東 青島 266000；2.中國檢驗認證集團山東有限公司，山東 青島 266000）

農藥除草劑的大規模使用在提高了農作物產量的同時，也對其他生物產生了一定量的危害。農田中噴灑的農藥，僅有10%～30%作用在作物上，其余進入空氣中，或者隨水循環進入江河湖海，很多國內外研究表明海水中存在除草劑[1-2]。貝類為過濾性生物，而除草劑具有親脂性，所以貝類對除草劑有富集作用，除草劑在貝類體內的積累對貝類的食用安全性產生一定的風險。因此，貝類中不同種類除草劑分析方法的研究具有現實意義。

本研究將貝類樣品用乙酸乙酯-二氯甲烷提取后，經弗羅里硅土固相萃取柱凈化，C18色譜柱分離，采用電噴霧正離子源（ESI+）電離，經多反應監測模式（MRM）進行定性和定量分析。對6中除草劑的分析方法、檢出限、線性、回收率進行研究，以期為貝類中除草劑的檢測和食用風險評價提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Utra 3000型高效色譜儀，TSQ Quantiva型三重四極桿質譜儀，賽默飛世爾科技公司生產；弗羅里硅土固相萃取柱（1 g/6 mL），德國Simon公司生產；高速離心機，賽默飛世爾科技公司生產；旋蒸蒸發儀，德國Heidolph公司生產；氮吹儀，南京海能儀器有限公司生產；超純水制備儀，賽默飛世爾科技公司生產。

混合標準儲備液：氟噠嗪草酯（99.6%）、嘧菌腙（1 000 mg·L-1）、磺草唑胺（1 000 mg·L-1）、丙嗪嘧磺隆（100 mg·L-1）、雙唑草腈（1 000 mg·L-1）及吡唑特（98.8%）用乙腈配制成濃度為10 mg·L-1的混合標準儲備溶液，4 ℃避光保存，使用時用乙腈稀釋至所需要的質量濃度。

乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷、乙腈均為色譜純，美國Merck公司生產；實驗用水為超純水

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜條件

C18反相色譜柱：（10 mm×2 mm，3 μm），柱溫：40 ℃；進樣量：2 μL；流速：0.2 mL·min-1。流動相：A（水+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸銨），B（99%的乙腈水溶液+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸銨），從A∶B（9∶1）的混合液到A∶B（1∶9）的混合液，進行10 min濃度均配之后，保持10 min。

1.2.2 質譜條件

電噴霧正離子源（ESI+）；多反應監測（MRM）掃描；噴霧電壓3 500 V；毛細管溫度350 ℃，鞘氣240 kPa，碰撞氣0.2 Pa，6種除草劑質譜參數見表1。

表1 質譜參數表

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品制備

取可食用部分，充分攪碎，混勻，-18 ℃保存。

1.3.2 提取

稱取混勻的樣品5.00 g，置于50 mL離心管中，加入25 mL乙酸乙酯-二氯甲烷（1∶1）溶液。渦旋1 min。超聲提取20 min。以4 000 r·min-1的速度離心10 min。取上清液，減壓濃縮至盡干。加入2 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1），待凈化。

1.3.3 凈化

將1.3.2待凈化液轉入用5 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1）溶液活化過的弗羅里硅土固相萃取柱，用15 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1）溶液分3次洗脫，洗脫液收集到濃縮瓶中，于40 ℃水浴下旋蒸濃縮至干，用1 mL乙腈復溶，供高效液相色譜-串聯質譜分析。空白溶液參照上述處理步驟得到空白基質溶液。

2 結果與分析

2.1 色譜圖

50 μg·L-1的混合標準溶液的總離子流圖和提取離子流圖見圖1。

2.2 工作曲線及檢出限

配置1 μg·L-1、10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1和500 μg·L-1的混合標準溶液進行測定，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制6種除草劑的工作曲線。在1～500 μg·L-1的線性范圍內，線性方程及相關性系數R2結果詳見表2。各除草劑的檢出限見表2。

2.3 回收率測定

取某市場采購的牡蠣樣品，按照1.3方法進行測定。對牡蠣樣品進行10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1的3個水平添加。各水平添加回收率詳見表3。六種除草劑的添加回收率為75.4%～115.0%，本方法具有一定可靠性。

圖1 混合標準溶液的色譜圖

表2 線性參數及檢測限表

表3 回收率試驗結果表

3 結論

本研究建立的固相萃取-高效液相色譜-串聯質譜法測定貝類樣品中氟噠嗪草酯、嘧菌腙、磺草唑胺、丙嗪嘧磺隆、雙唑草腈及吡唑特6種除草劑的方法，預處理所需要的有機溶劑用量少，質譜分析基質干擾少，方法檢出限低，線性關系良好，對貝類中除草劑含量的測定有重要的意義。