環介導等溫擴增技術、痰涂片鏡檢法及固體培養法診斷肺結核病的臨床價值

龍璠 張湘

（四川省南充市第五人民醫院檢驗科 南充 637100）

結核病是一種慢性呼吸道傳染性疾病，主要由結核分枝桿菌引起，對人類健康造成較大危害，為三大傳染病之一。臨床控制結核病傳播的關鍵在于早診斷、早治療，但臨床缺乏快速、高效的診斷方法，既往常用的痰涂片染色鏡檢法診斷效能較低，對結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌無法進行有效區分；培養法耗時長，不利于臨床及時制定治療方案[1～2]。臨床診斷方法多樣，但均存在一定弊端，亟需尋找快速、簡便、準確率高的診斷方法，使肺結核病患者能夠盡早確診、盡早治療，控制病情傳播。環介導等溫擴增技術能夠在恒溫條件下擴增，初用于臨床時優勢突出，操作簡單、特異性高，能夠在短時間內獲得診斷結果[3]。鑒于此，本研究就環介導等溫擴增技術、痰涂片鏡檢法及固體培養法診斷肺結核病的臨床價值進行了分析。現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年4月～2020年4月期間于本院就診的182例初診有肺結核可疑癥狀患者，其中男98例，女84例；年齡18～75歲，平均（46.31±10.59）歲。臨床根據《肺結核診斷標準（WS288-2017）》[4]將入選者分為肺結核病組（n=106）與非肺結核病組（n=76），所有入選者依從性均較好。

1.2 研究方法 所有入選者均提供1份痰標本，進行痰涂片鏡檢法、固體培養法及環介導等溫擴增技術檢測。痰涂片鏡檢法采用直接涂片抗酸染色顯微鏡檢測痰標本[5]。固體培養法：在痰標本中加入4倍體積的4%氫氧化鈉溶液，搖勻后靜置，當痰標本液化充分后，采用無菌吸管取3滴分布于羅氏培養基斜面的上、中、下部，將培養基放入培養箱中，設置溫度37℃，之后每周觀察1次，并記錄觀察結果[6]。環介導等溫擴增技術：在痰標本中加入2倍體積的4%氫氧化鈉溶液，搖勻后靜置，當痰標本液化充分后，取1 ml放入1.5 ml離心管，離心10 min，速度為1 300 r/min，去除上清液，沉淀加入1 ml生理鹽水懸浮，采用1 300 r/min的速度離心10 min，洗滌2次，僅保留沉淀物。之后將40μl核酸提取液加入離心管中，搖勻，用超過95℃的沸水浸泡10 min，冷卻至室溫后離心5 min，速度1 300 r/min。取20μl密封液與23μl聚合酶放入0.2 ml反應管，反應體系數目根據檢測樣本數據進行準備，并設置陽性、陰性對照，再在恒溫擴增熒光檢測儀上放置反應管，儀器將自動判斷結果。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，在ABI PRISM 377DNA自動測序儀上對擴增產物進行測序，使用直接測序法，測序結果在NCBI網站進行比對分析。

1.3 觀察指標 以臨床診斷結果為參考，分析環介導等溫擴增技術、痰涂片鏡檢法及固體培養法在肺結核病中的診斷效能，計算靈敏度、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值。臨床診斷結果為肺結核，痰涂片鏡檢法、固體培養法及環介導等溫擴增技術也檢出陽性的即為真陽性；若臨床診斷結果為非肺結核，各方法檢出的陽性即為假陽性。以n表示總例數，a表示真陽性，b表示假陽性，c表示假陰性，d表示真陰性。準確度=（a+d）/n×100%；靈敏度=a/（a+c）×100%；特異度=d/（b+d）×100%；陽性預測值=a/（a+b）×100%，陰性預測值=d/（d+c）×100%。

1.4 統計學處理 數據處理采用SPSS22.0統計學軟件，計數資料以%表示，采用χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

環介導等溫擴增技術靈敏度、準確度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均高于痰涂片鏡檢法，環介導等溫擴增技術靈敏度、準確度、陰性預測值均高于固體培養法，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1～表4。

表1 痰涂片鏡檢法診斷結果（例）

表2 固體培養法診斷結果（例）

表3 環介導等溫擴增技術診斷結果（例）

表4 痰涂片鏡檢法、固體培養法及環介導等溫擴增技術診斷效能對比[例（%）]

3 討論

當前臨床診斷肺結核病主要還是依賴結核桿菌培養與涂片抗酸染色，結核桿菌涂片法檢出率通常為40%左右，診斷效能較差，結核桿菌培養檢出率雖較涂片法更高，但其耗時較長，在早期診斷中效果較差[7]。傳統的診斷方法均存在一定弊端，已無法滿足臨床對于診斷肺結核病的時效需求，需尋找其他更為理想的診斷方法[8]。

本研究結果顯示，環介導等溫擴增技術靈敏度、準確度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均高于痰涂片鏡檢法，靈敏度、準確度、陰性預測值也均高于固體培養法，表明肺結核病診斷中環介導等溫擴增技術診斷價值較高，利于患者早診斷、早治療，在結核病防治機構中應用前景較佳。痰涂片鏡檢法主要是依賴檢驗人員的識別能力從形態學進行鑒別，但菌體在個體發育中以多種形態存在，極易出現誤診、漏診，診斷敏感度較低；固體培養法在進行處理時會對標本中50%～80%的結核菌活性造成損傷，以致陽性檢出率較低[9]。環介導等溫擴增技術對儀器設備要求不高，不需要用復雜、昂貴的檢測設備，能夠快速檢出結核桿菌，在1 h內即可獲得結果[10]。該項技術操作簡單，在1個裝置中就能完成所有反應，且反應裝置為封閉狀態可減少污染。環介導等溫擴增技術針對結核分枝桿菌設置不同的引物，利用鏈置換反應，大量擴增目標DNA，擴增效率較高[11]。環介導等溫擴增技術雖具有方便、快捷等突出優勢，但在臨床操作時仍需注意以下幾點：因該項技術對設備要求不高，基層醫院可進行相關檢測，但需注意對工作人員的培訓，以確保操作過程不要出現差錯；該項技術實驗過程中需進行陰性、陽性對照，為節約成本，應在每日痰標本＞10份的實驗室中開展[12]。