不同溫度下冷凝集素試驗對ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗結果的影響

劉力銘

（平頂山市第一人民醫院，河南 平頂山 467000）

輸血是臨床上一項重要的搶救和治療措施，當血紅蛋白＜60 g·L-1時，機體代償機能難以維持正常血壓水平，會引發機體活動障礙，此時需輸血治療[1-2]。為保證輸血有效性、安全性，臨床常通過ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗進行配血[3]。冷凝集素屬自身抗體，正常生理情況下，不會促進紅細胞凝集，但研究證實，在低溫條件下，紅細胞由于自身特性會出現凝集現象，尤其在4℃時紅細胞明顯凝集[4]。高滴度冷凝集素會對交叉配血試驗結果造成影響，從而降低輸血治療效果，因此，在進行交叉配血時，需盡可能避免冷凝集素影響，提高配血成功率，保證用血安全[5]。本研究選取我院2019年2月至2020年4月間收治的需緊急輸血患者248例，探討不同溫度下冷凝集素試驗對ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗結果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院收治的需緊急輸血患者248例（2019年2月～2020年4月）作為研究對象，其中女123例，男125例；年齡18～76歲，平均年齡56.68±8.14歲；體質量45.6～77.8 kg，平均體質量61.15±7.67 kg。

納入標準：患者及其家屬知情、自愿并簽署同意書；血紅蛋白＜60 g·L-1；年齡≥18歲；無輸血史、藥物過敏史、遺傳病史。

排除標準：伴有免疫系統疾病、肝功能損傷及艾滋病、結核病、乙肝等傳染性疾病；血型為Rh（-）。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

血型血清學離心機（生產廠家：長春博研科學儀器有限責任公司，型號：TD-3A），全自動血庫系統（生產廠家：煙臺艾德康生物科技有限公司，型號：AIS-EN70），恒溫水浴箱（生產廠家：常州市國旺儀器制造有限公司，型號：HHW-420.600.），顯微鏡（生產廠家：日本奧林巴斯公司，型號：BX53）。

凝聚胺試劑購于合肥天一生物技術研究所，抗A抗B血型定型試劑購于上海信帆生物科技有限公司，RhD血型定型試劑購于蘇州蘇大賽爾免疫生物技術有限公司。所有儀器與試劑均進行嚴格質控，按照使用說明書進行操作。

1.2.2 ABO血型正反定型

抽取患者靜脈血2 mL，于37℃離心后取血清加入1 mL抗凝血劑，使用生理鹽水洗滌血液樣本內的紅細胞3次，將經過洗滌的溶液制成濃度為2%的紅細胞懸液。取10支試管，分別加入生理鹽水0.2 mL，接著向第1支試管加入0.2 mL血清，直至對半稀釋到第9支，最后與第10支進行比較。向10支試管各加入0.2 mL紅細胞懸液，混合均勻后分別放置在20 ℃、37 ℃溫度下，靜置12 h后觀察結果。

1.2.3 電子交叉配血

血型鑒定：吸取內含EDTA-K2抗凝劑的患者血液樣本2 mL，以3000 r·min-1離心5min后置于全自動血庫系統進行血型檢測。

電子交叉配血：首先檢測血液樣本中的不規則抗體，若結果呈陰性，根據血型鑒定結果，對血型匹配一致性進行判斷，若結果呈陽性，需確定抗體性質，后判斷血型匹配一致性。分別在20 ℃、37 ℃進行交叉配血，查看凝集反應是否出現并記錄結果。

1.2.4 血清學交叉配血

以試管法復查RhD血型與ABO血型，再采用1.2.3中血型鑒定方法與血液標本進行主側、次側交叉配血。

1.2.5 冷凝集素試驗

向血清標本中加入O型健康人群紅細胞或同型血，分別放置在4 ℃、31 ℃、37 ℃溫度下，記錄紅細胞凝集情況。

1.2.6 交叉配血試驗

于37℃溫度下，使用鹽水法、凝聚胺配血法處理患者血液樣本，主側、次側均出現凝集現象，代表配血不符，以24 ℃生理鹽水洗滌紅細胞3次，制成濃度為2%的紅細胞懸液，再次進行交叉配血，觀察結果。

1.3 統計學分析

所有數據采用SPSS22.0軟件進行分析，計量資料以均數±標準差（±SD）表示，行t檢驗；計數資料以例或率（n（%））表示，行χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清學交叉配血與電子交叉配血結果比較

248例需緊急輸血患者血液樣本，血清學交叉配血、電子交叉配血主側相合率無明顯差異（P＞0.05），次側相合率差異顯著（P＜0.05），見表1。

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2.2 不同溫度下ABO血型鑒定結果

ABO血型，在不同溫度下的鑒定結果（表2）。

表2 不同溫度下ABO血型鑒定結果比較

2.3 不同溫度下電子交叉配血結果

20℃時電子交叉配血出現凝集例數多于30 ℃（P＜0.05），見表3。

表3 不同溫度下電子交叉配血結果（n（%），n=248）

2.4 冷凝集素試驗結果

向血清標本中加入O型健康人群紅細胞或同型血，分別放置在4℃、31℃、37℃溫度下，4℃溫度下出現明顯紅細胞凝集現象，31℃溫度下可見紅細胞凝集，而溫度升至37℃時，紅細胞凝集現象消失。

2.5 交叉配血試驗結果

于37℃溫度下，以鹽水法、凝聚胺配血法進行交叉配血，主側、次側均出現凝集現象，后用經過處理的血清采取相同方法進行交叉配血，主側、次側未出現凝集現象，將血液樣本放置在載玻片，利用顯微鏡觀察到紅細胞彌漫、散在排列，交叉配血成功。

3 討論

輸血為臨床重要治療手段，為避免發生溶血、免疫排斥等不良反應，輸血前需對供血者、受血者的血型進行配對[6-7]。現階段，在臨床配血時通常經ABO血型正反定型匹配后方允許輸血，保證輸血安全性[8]。但正反定型結果受到眾多因素影響，冷凝集素是其中之一[9]。隨著電子技術進步，電子交叉配血試驗在臨床逐漸得到應用，其具有便捷、高效、準確等優勢，能降低試劑庫存量，減少工作量，由計算機系統選擇與受血者相匹配的血型，還能減少人工操作失誤[10-11]。本研究對248例需緊急輸血患者血液樣本進行研究發現，冷凝集素引發的交叉配合不合，主要為次側不合，可在加溫后消除。溫度是影響冷凝集素活性的關鍵，有關文獻報道，溫度＜31℃時，冷凝集素作用于紅細胞抗原，出現紅細胞凝集現象，隨著溫度上升，冷凝集素活力消失[12]。本研究還發現，ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗結果受到溫度影響。要避免冷凝集素的影響，在ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗時需注意以下幾點：（1）春冬季節溫度較低，易出現高效價冷凝集素，可將血液樣本放置在37℃恒溫水浴箱中，后再行檢測，若提高溫度后，血型正反定型仍不相符或仍發生凝集反應，需排除其他因素引發的凝集反應；（2）ABO血型正反定型不符時，應進一步選擇合適定型方法，如鹽水法、凝聚胺配血法；（3）對于需輸血治療的患者，應首先確定冷凝集素的效價，保證輸入同型血液，同時注意輸血速度緩慢、血液溫度適宜，以保證輸血有效性、安全性[13-15]。

綜上所述，在低溫條件下，冷凝集素可促進紅細胞凝集，影響輸血科ABO血型正反定型與電子交叉配血試驗結果，為保證輸血安全，應選擇科學合理鑒別方式，避免漏檢、誤檢。