Hns對牡蠣機體超顯微結構的影響研究

邵躍

（錦州市科學技術研究院，遼寧 錦州 121000）

海洋污損生物主要類群包括藻類、水螅、龍介蟲、藤壺和海鞘等，具有代表意義的有牡蠣、紫貽貝等，它們會吸附在船舶、網箱、海底各種管道上，給生產和生活帶來一定的經濟損失[1]。

Hns（一種從植物中提取的毒性物質，其毒性和機理暫不清楚，暫稱Hns）對生物的不同組織細胞都有一定的毒害作用。一定濃度的Hns對生物脅迫一定時間后，會造成細胞核腫脹、核膜消失或脫落、線粒體腫脹、線粒體含量增多等亞顯微結構的病理變化[2]，嚴重時核膜消失，核降解，線粒體內脊崩解，細胞膜系統空泡化，溶酶體增多，而后減少。這樣的變化會隨著試驗時間的延長而加劇，直到細胞枯萎死亡，說明Hns對牡蠣等海洋污損生物具有一定的防污作用。現通過研究Hns對牡蠣機體的超顯微結構的影響，以了解Hns的毒性，進而確定Hns是否可成為新型低毒高效的防污試劑。

1 研究方法

1.1 試驗材料

（1）生物。牡蠣，購自大連黃海海區黑石礁水產養殖場，殼長（8.0±0.5）cm，殼寬（6.0±0.5）cm，殼高（3.0±0.5）cm，洗去殼外污物。選取10枚大小均等的牡蠣在10 L水缸中馴化72 h，曝氣，每天更換1/2新鮮海水。

（2）儀器。電子顯微鏡。

（3）藥品。Hns（粗提物，由大連大學生物工程學院提供，母液10.000 g/L）。

1.2 試驗方法

將牡蠣在ρ（Hns）為32 mg/L的海水中暫養7 d，以備實驗用。取材時將貝殼打開，取外列鰓的中段，用生理鹽水反復清洗后，放入2.5%的戊二醛（0.1 mol/L的磷酸緩沖液配制，pH值7.2）中，4℃冰箱固定12 h；后于0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值7.2）中用超聲波清洗器震蕩0.5 min，用0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值7.2）反復沖洗3次，每次15 min；再放入1%鋨酸中固定12 h，而后用0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值7.2）反復沖洗3次，每次15 min。乙醇脫水，醋酸異戊酯置換，DX-1臨界點干燥器干燥，IB-3離子濺射儀噴鉑，掃描電鏡觀察并拍照。

2 結果與分析

2.1 生物表面超顯微結構對比分析

在ρ（Hns）32 mg/L脅迫一周后，牡蠣的鰓絲發生脫落，牡蠣鰓表面的變化見圖1（a）（b）（c）（d）（e）（f）。由圖1可見，鰓絲脫落最終導致牡蠣的鰓微結構發生變化，使呼吸功能大大降低，進而說明Hns對牡蠣等海洋污損生物具有一定的防治作用。

圖1 Hns對鰓的影響

2.2 生物內部超顯微結構對比分析

在 ρ（Hns）32 mg/L脅迫一周后，牡蠣鰓組織細胞的亞顯微結構發生了病理變化，如核膜腫脹、線粒體腫脹、內脊消失、溶酶體含量增多，細胞器邊緣模糊變化，牡蠣鰓內部的變化見圖2（a）（b）。

圖2 Hns對鰓內部的影響

由圖2可見，細胞核核膜出現了消失趨勢，細胞核開始崩解，這樣的病理變化會導致機體趨于死亡，手動刺激牡蠣的外殼，如發現外殼無閉殼現象，可判斷為死亡。在 ρ（Hns）32 mg/L脅迫一周后，牡蠣肝胰腺內部的變化如圖3（a）（b）。

圖3 Hns對肝胰腺內部的影響

肝胰腺是貝類消化、代謝、解毒的主要組織器官。由圖3可見，在一定的ρ（Hns）、一定時間的脅迫下，牡蠣肝胰腺組織結構發生了一定的病理變化。細胞核邊際模糊，核膜破碎，細胞核開始分解，染色質顏色加深且分布不均勻，核降解，線粒體腫脹破碎。由此可知，Hns對牡蠣肝胰腺內部具有一定的影響。