無創(chuàng)DNA檢測在產(chǎn)前篩查唐氏綜合征中的準(zhǔn)確性探討

文/申時龍，陸勁

唐氏綜合征是一種由染色體數(shù)目異常導(dǎo)致的缺陷性疾病，使得嬰幼兒出生后身體及智力水平低下，影響人口素質(zhì)。隨著我國醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，唐氏綜合征的發(fā)生率顯著下降，但其仍是不可避免的，由于該疾病涉及到基因，患兒出生后再治療基本無效。因此，產(chǎn)前檢查是預(yù)防本病的常見手段。醫(yī)學(xué)界一直在尋找更為安全有效的診斷方式，無創(chuàng)DNA作為產(chǎn)前診斷的一種，通過檢測母體外周血，對胎兒游離的DNA進(jìn)行檢測及分析，檢測其染色體有無異常情況，以便臨床及時作出反應(yīng)[2]。本次研究我院在提取胎兒游離DNA，對其行無創(chuàng)DNA檢測，探討無創(chuàng)DNA檢測的準(zhǔn)確性，具體研究內(nèi)容如下。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料

收集2020年1月至2020年12月時間段來我院行在產(chǎn)前篩查唐氏綜合征篩查的895例孕婦的外周血，產(chǎn)婦經(jīng)過B超檢查確認(rèn)為宮內(nèi)單活胎。年齡21 ~40歲，平均年齡（28.22±4.04）歲；采血時妊娠周期12~24周，平均孕周（18.11±2.20）周。35歲以上妊娠246例，35歲以下妊娠的649例。

1.2 診斷方法

1.2.1 無創(chuàng)DNA檢測

采用EDTA抗凝管取孕婦外周血8~10ml，將其置于4℃環(huán)境中保存，采集后72h內(nèi)分離其血漿，在4℃環(huán)境下低速離心12分鐘，再高速離心10分鐘，置于-70℃環(huán)境中，采用核酸提取cff DNA，嚴(yán)格按照實際說明書操作，采用Qubit定量儀進(jìn)行質(zhì)控后，將樣本置于-70℃環(huán)境中保存。采用生物信息學(xué)分析法篩查胎兒染色體非整倍體的風(fēng)險，篩查出高危孕產(chǎn)婦。試劑盒由北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司提供，采用貝瑞NextSeqCN500測序儀，基于邊合成邊測序技術(shù)(Sequencing-By-Synthesis,SBS)的新型測序方法，通過利用單分子陣列實現(xiàn)在小型芯片(Flow Cell)上進(jìn)行橋式PCR反應(yīng)，通過可逆阻斷技術(shù)可以實現(xiàn)每次只合成一個堿基，并標(biāo)記熒光基團(tuán)，利用相應(yīng)的激光激發(fā)熒光基團(tuán)，捕獲激發(fā)光，從而讀取堿基信息。

1.2.2 染色體核型分析

無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果為高風(fēng)險的產(chǎn)婦，行羊水穿刺術(shù)，在超聲診斷的引導(dǎo)下，取孕18~24周產(chǎn)婦的羊水20ml，對其羊水細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、制片，然后根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制標(biāo)準(zhǔn)對其進(jìn)行染色體核型分析，以此診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 無創(chuàng)DNA檢測高風(fēng)險結(jié)果

895例患者中無創(chuàng)DNA檢測染色體非整倍體高風(fēng)險3例，高風(fēng)險篩查率0.03%，其中21-三體檢出2例，檢出率0.22%；18-三體檢出1例，檢出率0.11%；詳見表1。

表1 無創(chuàng)DNA檢測高風(fēng)險結(jié)果

2.2 羊膜穿刺檢測結(jié)果及跟蹤隨訪結(jié)果

羊膜穿刺檢測結(jié)果顯示3例21-三體檢出2例，18-三,1例。3例確診的產(chǎn)婦進(jìn)行門診咨詢或電話隨訪，最終選擇終止妊娠，其他孕婦進(jìn)行結(jié)局隨訪，未發(fā)現(xiàn)漏檢情況。無創(chuàng)DNA診斷唐氏綜合征的準(zhǔn)確率為100%。

3 討論

唐氏綜合征的主要特征為21號染色體多一條染色體，作為一種遺傳性疾病，患兒會出現(xiàn)身體發(fā)育遲緩及智力低下的情況，喪失生活自理能力，降低出生人口質(zhì)量的同時，增加家庭及社會的負(fù)擔(dān)。針對已經(jīng)出生的唐氏綜合征患兒，臨床尚無有效的治療措施，因此，產(chǎn)前篩查顯得尤為重要，可提高疾病新生人口治療提供科學(xué)依據(jù)及數(shù)據(jù)支持[3]。

為預(yù)防新生兒缺陷，我國近十年來在此方面下了很大功夫，血清學(xué)篩查是臨床常用的篩查方式，但由于人體較為復(fù)雜，較多因素會影響產(chǎn)檢結(jié)果，且孕婦體質(zhì)特殊，導(dǎo)致診斷結(jié)果易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，影響疾病檢出正確率。羊水穿刺術(shù)是其中最為精準(zhǔn)的監(jiān)測方式，但其存在一定風(fēng)險，如增加對胎兒的損傷，甚至增加產(chǎn)婦宮內(nèi)感染及流產(chǎn)等情況的發(fā)生，且此種方式需要較長時間得出診斷結(jié)果，不利于疾病早期診斷。研究顯示，胎兒在母體內(nèi)發(fā)育需要通過臍帶不斷吸收母體營養(yǎng)，此過程中胎兒的遺傳物質(zhì)可在孕期特定時間及分娩后短期存在于母體，無創(chuàng)DNA檢測利用上述機(jī)理，在臨床得以推廣，通過抽取母體外周血，工作人員提取胎兒的遺傳物質(zhì)，并通過基因檢測技術(shù)，獲取胎兒的染色體信息，了解其染色體數(shù)目有無異常情況。此種診斷方式不會給胎兒及孕婦帶來損傷，且近年來文獻(xiàn)報道，其診斷準(zhǔn)確率極高[6]，具有無創(chuàng)及敏感度高的優(yōu)點。本次研究結(jié)果顯示，895例患者中無創(chuàng)DNA檢測染色體非整倍體高風(fēng)險3例，高風(fēng)險篩查率0.03%，其中21-三體檢出2例，檢出率0.22%；18-三體檢出1例，檢出率0.11%；胎兒經(jīng)過羊水穿刺得以證實，21-三體檢出2例，18-三體檢出1例，診斷唐氏綜合征的準(zhǔn)確率為100%。

綜上所述，無創(chuàng)DNA作為一種產(chǎn)前篩查工具，可用于唐氏綜合征的初步篩查中，但對于存在高危風(fēng)險的孕婦，還需要進(jìn)一步行羊水穿刺術(shù)確診[4-7]。