氣相色譜法測(cè)定乳康顆粒中乙酸辛酯的含量

劉 勇，閆高穎,張必榮,張 瓊，呂慧鋒*，杜夢(mèng)嵐

(1.陜西省藥品和疫苗檢查中心，陜西 西安 710065；2.陜西天谷藥業(yè)有限公司，陜西 漢中 723100；3.西安千禾藥業(yè)股份有限公司，陜西 西安 710075)

乳康顆粒是西安千禾藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的獨(dú)家劑型，由牡蠣、瓜蔞、海藻、黃芪、天冬、夏枯草、三棱、玄參、白術(shù)、莪術(shù)、丹參、乳香、沒藥、浙貝母、雞內(nèi)金(炒)15味中藥組方而成，具有疏肝解郁，理氣止痛，活血破瘀，消積化痰，軟堅(jiān)散結(jié)，補(bǔ)氣健脾的作用[1]，中醫(yī)臨床上主要用于治療女性乳腺增生[2-3]。現(xiàn)行《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ0926 2006-2011Z-2013》中收載了天冬、丹參、乳香、沒藥和黃芪的薄層色譜法(TLC)鑒別以及丹參素鈉的高效液相色譜(HPLC)測(cè)定含量方法。李冬梅[4]等研究了乳康顆粒中浙貝母的TLC鑒別方法，并對(duì)乳香的鑒別方法進(jìn)行了改進(jìn)，同時(shí)增加了對(duì)丹參中有效成分丹酚酸B的含量測(cè)定的研究。由于乳康顆粒中還含有莪術(shù)、乳香、沒藥等揮發(fā)性成分，對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量有很大的影響，為了進(jìn)一步提升乳康顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，全面控制其成品的質(zhì)量，作者參照相關(guān)文獻(xiàn)[5-11]，增加了對(duì)乳香中有效成分乙酸辛酯含量測(cè)定的研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 原料、試劑與儀器

乳香：陜西興盛德藥業(yè)有限責(zé)任公司，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)宋藝君副教授鑒定為橄欖科植物乳香樹(BoswelliaCarteriiBirdw)的樹脂，為埃塞俄比亞原乳香；乙酸辛酯對(duì)照品:批號(hào)111671-201704，中國(guó)食品藥品檢定研究院；乳康顆粒：批號(hào)2020101，2020102，2020103，2020301，2020401，2020402，西安千禾藥業(yè)股份有限公司。

其他試劑均為分析純，市售。

氣相色譜儀：GC-2010Pro，日本島津公司；十萬分之一電子天平：AT201，Mettler Toledo公司；數(shù)控超聲波清洗儀：KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取乙酸辛酯對(duì)照品適量，配制乙酸辛酯對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為146.21 μg/mL)，將其依次稀釋制成質(zhì)量濃度分別為29.24、36.55、58.49、73.11 μg/mL的溶液，待用。

1.3 供試品溶液的制備

1.3.1 正己烷超聲法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用正己烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，待用。

1.3.2 乙酸乙酯超聲法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，待用。

1.3.3 無水乙醇超聲法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g，(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，待用。

1.3.4 正己烷索氏提取法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置索氏提取器中加入正己烷適量，提取約3 h(至無色)，提取液揮干溶劑，殘?jiān)诱和槿芙獠⒍ㄈ葜?5 mL容量瓶中，搖勻，濾過，待用。

1.3.5 乙酸乙酯索氏提取法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置索氏提取器中加入乙酸乙酯適量，提取約3 h(至無色)，提取液揮干溶劑，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙獠⒍ㄈ葜?5 mL容量瓶中，搖勻，濾過，待用。

1.3.6 無水乙醇索氏提取法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置索氏提取器中加入無水乙醇適量，提取約3 h(至無色)，提取液揮干溶劑，殘?jiān)訜o水乙醇溶解并定容置25 mL容量瓶中，搖勻，濾過，待用。

1.4 陰性樣品溶液制備

取除乳香外的各味藥材，按照處方比例和制法以及供試品溶液的制備方法，自行制備不含乳香的陰性樣品溶液。

1.5 色譜條件

色譜柱：安捷倫DB-WAX(30 mm×0.32 mm×0.50 μm)；氣體流量：氮?dú)猓?0.0 mL/min；氫氣，50.0 mL/min；空氣，500.0 mL/min；進(jìn)樣體積：1 μL，分流進(jìn)樣，分流比為10∶1；檢測(cè)器：FID(氫火焰離子化檢測(cè)器)，氣化室溫度：290 ℃；色譜柱溫度：初始溫度為50 ℃，維持1 min，以10 ℃/min的速率升至200 ℃，保持8 min；檢測(cè)器溫度：300 ℃。

1.6 乙酸辛酯的含量測(cè)定[5-11]

取1.3制備的供試品溶液，按照1.5色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算乙酸辛酯含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取效果比較

將1.3提取方法所制樣品分別按照1.5色譜條件進(jìn)行測(cè)定，正己烷超聲樣品中乙酸辛酯的含量為0.191 mg/g，正己烷索氏提取樣品中乙酸辛酯的含量為0.193 mg/g，兩者無明顯差異；其余乙酸乙酯超聲、無水乙醇超聲、乙酯索氏提取、無水乙醇索氏提取樣品中乙酸辛酯的含量，分別為0.122、0.105、0.146、0.128 mg/g。

2.2 超聲提取時(shí)間和溶劑用量的確定

按正己烷超聲方法制備樣品，分別加入正己烷25、50 mL，超聲處理30、45、60 min。結(jié)果顯示超聲時(shí)間和溶劑用量對(duì)乙酸辛酯含量的影響不顯著，隨著時(shí)間和溶劑用量的增加，乙酸辛酯含量無明顯增加，故選定25 mL超聲處理30 min。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液，按照1.5色譜條件進(jìn)行測(cè)定，色譜圖見圖1。

t/min圖1 樣品色譜圖

由圖1可知，供試品溶液在與對(duì)照品溶液在保留時(shí)間一致的位置有相同的色譜峰且分離度良好，陰性樣品無干擾，表明該法的專屬性良好。

2.4 線性關(guān)系考察

色譜條件同1.5，對(duì)照品溶液的制備同1.2。將1.2制備的不同質(zhì)量濃度的溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)照峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。

ρ(乙酸辛酯)/(μg·mL-1)圖2 乙酸辛酯線性曲線圖

由圖2可知，ρ(乙酸辛酯)=29.24～146.21 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的乳康顆粒樣品4.3 g，共9份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入乙酸辛酯對(duì)照品溶液5、10、15 mL各3份，加正己烷稀釋成25 mL，稱定質(zhì)量按照1.3方法制成加樣回收供試液，依照1.5色譜條件測(cè)定，并按照公式(1)計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

(1)

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

回收率要求為90%～110%，重復(fù)性要求RSD<3%。由表1可知，3個(gè)水平9個(gè)樣品的回收率及平均值均在要求范圍內(nèi)，平均回收率為104.4%；RSD為2.8%，符合規(guī)定要求。因此，該方法的準(zhǔn)確度和重復(fù)性良好。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

色譜條件同1.5，精密量取ρ(對(duì)照品)=73.11 μg/mL溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，見表2。

表2 測(cè)定方法的精密度

由表2可知，乙酸辛酯的峰面積RSD為0.4%，表明色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)精密度良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

按照1.3方法處理制備6份供試品溶液，依照1.5色譜條件測(cè)定，并計(jì)算w(乙酸辛酯)，見表3。

表3 測(cè)定方法的重復(fù)性

由表3可知，w(乙酸辛酯)平均值為0.191 mg/g，RSD為2.9%。因此，該方法的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試品，按照1.3方法處理，在儀器連續(xù)運(yùn)行的情況下分別在0、1、2、6、10、18、24 h依次測(cè)定，見表4。

表4 測(cè)定方法的穩(wěn)定性

由表4可知，w(乙酸辛酯)的RSD為2.4%，表明該成份在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品的含量測(cè)定

將收集到的6批乳康顆粒樣品(規(guī)格：3.0 g/袋)，按1.5色譜條件測(cè)定,見表5。

表5 樣品中w(乙酸辛酯)的測(cè)定

由表5可知，6批樣品的w(乙酸辛酯)=0.191 3～0.265 3 mg/g，故可將乳康顆粒中乙酸辛酯限度定為每袋不少于0.50 mg。

2.10 檢測(cè)限和定量限

將1.2方法制備的對(duì)照品溶液進(jìn)行稀釋，依照1.5色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以基線噪音的3倍計(jì)算，乙酸辛酯的檢測(cè)限為0.146 22 μg/mL；以基線噪音的10倍計(jì)算，乙酸辛酯的定量限為0.438 66 μg/mL。

3 結(jié) 論

乳香具有很強(qiáng)的活血、行氣、止痛之功效[7]，其作為乳康顆粒組方中的主要成分既入血分，又入氣分，能行血中氣滯，化瘀止痛，還能宣通臟腑氣血，通達(dá)經(jīng)絡(luò)[2-3]，對(duì)乳康顆粒的功效起著至關(guān)重要的作用；現(xiàn)行生產(chǎn)工藝中乳香需和沒藥、雞內(nèi)金、浙貝母混合粉碎成細(xì)粉，混合細(xì)粉再和濃縮濾液混勻后進(jìn)行減壓干燥，因乳香、沒藥中含有大量的揮發(fā)油，若干燥溫度及干燥時(shí)間控制不嚴(yán)格極易造成有效成分的損失，因此，選擇乳香中乙酸辛酯作為乳康顆粒的定量指標(biāo)進(jìn)行控制，能很好地反映出產(chǎn)品質(zhì)量的控制過程。

經(jīng)過方法學(xué)考察，結(jié)果表明，乳康顆粒中乙酸辛酯的含量測(cè)定方法穩(wěn)定可靠，簡(jiǎn)便可行，重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，可用于乳康顆粒的質(zhì)量控制。