狍子銅綠假單胞菌感染病理學診斷

王運盛，國欣欣，趙素芬，朱云蕓，李祥翔，范晰琳，普天春*，張成林，*

（1.北京動物園，北京100044；2.圈養野生動物技術北京市重點實驗室，北京100044）

狍子（roe deer）又名狍，為偶蹄獸、鹿科的小型鹿類。狍子具有食量少、耐寒、抵抗力強等特點。近年來，狍子作為特種養殖動物，數量不斷增加。狍子深受游客喜歡，我國動物園圈養狍子數量也逐年增多。雖然狍子抗病力較強，但隨著飼養量的增加，常見多發病也隨之增多[1]。北京動物園獸醫院收檢死亡狍子1例。該動物生前因外傷致下頜部大面積感染，經治療無效死亡；死后進行致病微生物培養及鑒定，該狍子感染銅綠假單胞菌。本研究采用組織病理學方法觀察其主要器官組織病理學變化，以期為狍子疾病診斷和治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 病料來源

病死狍子1只。

1.2 試驗方法

1.2.1 剖檢及病理組織學檢查

剖檢發病死亡的狍子，觀察其病理變化。采集心、肝、脾、肺、腎、腸、胰腺等組織，迅速投入10%的福爾馬林溶液，進行病理切片前處理。

1.2.2 H.E.染色

石蠟切片分別經二甲苯脫蠟，無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度復水，下行至雙蒸水中，蘇木精染色10 min，1%鹽酸酒精分色數秒，水洗返藍15 min；再依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水，伊紅染色1 min，95%乙醇洗滌，再經無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。切片放置于37℃溫箱內過夜烘干后鏡檢。光學顯微鏡下觀察組織病理學變化情況。

1.2.3 細菌的分離、培養及鑒定

無菌取狍子肺臟，分別接種于沙門氏菌顯色培養基（LA4470）、血液瓊脂培養基（LA7150）、沙氏葡萄糖瓊脂培養基（LA9640）、麥康凱培養基（M8560）、Baird-parker培養基（LA3690）、營養瓊脂培養基（N8290）、結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養基（LA0320），37℃培養24 h，觀察培養結果。試驗所用培養基購自北京索萊寶科技有限公司。

2 結果與分析

2.1 狍子血液生化指標檢測結果（見表1）

狍子死亡前1周進行外周血生化常規檢測。

由表1可知，白細胞計數、淋巴細胞比率降低，中性粒細胞比率升高，提示狍子生前發生細菌感染。

2.2 狍子臨床剖檢病理變化（見圖1）

由圖1可知，死亡狍子消瘦、口腔內大面積潰爛（圖1a）。心肌呈暗紅色、心外膜有明顯壞死、呈雪花狀、心內膜淤血、有散在出血斑（圖1b）。肺組織觸感硬實、右肺間葉呈肝變表現、右肺隔葉有壞死區（圖1c）、壞死區切面可見化膿灶（圖1d）。肝腫大、顏色不均、表面散在出血點（圖1e）。胰腺顏色為暗紅、腫大（圖1f）。脾臟皺縮（圖1g）。腎腫大，皮髓質交界清晰、出血，腎被膜出血斑與白色壞死區相交織（圖1h）。

2.3 狍子細菌分離培養及鑒定結果（見圖2）

血平板中可見大量菌落，菌落呈灰色、圓形、表面光滑、邊緣規則，直徑3~3.5 mm左右，呈β溶血。麥康凱培養基可見菌落呈透明、圓形、表面光滑、邊緣規則，直徑3 mm左右。

由圖2可知，革蘭氏染色鏡檢為陰性桿菌。結果顯示為銅綠假單胞菌。

2.4 狍子病理學觀察結果（見圖3）

肝：低倍鏡下觀察，肝細胞呈條索狀排列、淤血。高倍鏡下觀察，肝竇內紅細胞聚集、肝細胞出現不同程度腫脹、顆粒變性；肝細胞間隙內巨噬細胞、淋巴細胞增多（圖3a）。

腎：低倍鏡下觀察，集合管大面積出血；集合管上皮細胞壞死脫落、聚集于集合管腔內。高倍鏡下觀察，遠曲小管和近曲小管部分上皮細胞顆粒變性、高度腫脹且脫離基底膜；部分脫落的上皮細胞發生壞死崩解，僅殘存細胞輪廓；腎小球毛細血管充血、出血，腎小囊可見脫落的上皮細胞（圖3b）。

脾：低倍鏡下觀察，被膜增生、脾小梁增生明顯、白髓比例增加、紅髓比例減少。高倍鏡下，紅髓細胞間隙增寬、呈水腫樣病變、漿細胞和巨噬細胞增多（圖3c）。

胰腺：低倍鏡下觀察，胰腺結構松散、淤血、出血。高倍鏡下觀察，胰腺水腫、胰腺泡形態不一、胰腺泡壞死、壞死區域纖維化、伴有大量淋巴細胞浸潤（圖3d）。

肺：低倍鏡下觀察，肺組織大面積壞死、出血、間質增寬；病變嚴重區域肺泡內可見大量紅染物質、病變相對輕微處肺組織代償性肺氣腫、肺泡腔顯著增寬。高倍鏡下觀察，肺泡內紅染物質為漿液性，含有多量紅細胞、肺泡壁上皮細胞、炎性細胞以及細胞脆片（圖3e）。

肺組織脈管炎明顯，壞死肺組織內可見大量多核巨細胞；漿細胞、巨噬細胞浸潤（圖3f）。

心臟：低倍鏡下觀察，心肌纖維水腫、排列松散、部分區域心肌細胞呈液化性壞死。高倍鏡下可見心肌細胞顆粒變性、肌細胞間有大量紅細胞、炎性細胞浸潤（圖3g）。

口腔：低倍鏡下觀察口腔內原有組織結構破壞、口腔內組織大面積出血、炎性細胞大面積浸潤、血管大面積增生。高倍鏡下可見壞死組織內纖維化明顯，多核巨細胞、漿細胞、淋巴細胞浸潤（圖3h）。

3 診斷

經臨床剖檢特征觀察、細菌的分離、培養、鑒定以及組織病理學觀察，死亡狍子由于口腔外傷導致潰爛，銅綠假單胞菌感染，并擴散至全身，肺、腎等重要臟器發生明顯的膿毒敗血癥癥狀，且各重要組織臟器發生炎性壞死，為典型的細菌感染引發全身性菌血癥死亡病例。

4 討論

銅綠假單胞菌為假單胞菌屬，革蘭氏染色呈陰性。首先由Gersard于1882年從傷口膿液中分離得到[3]。該菌廣泛存在于自然界中，如土壤、水和空氣中，作為人畜共患病原菌，可引起人與動物發病。由于銅綠假單胞菌為條件致病菌，健康機體很少感染發病。銅綠假單胞菌引起的疾病常出現在燒傷、外科創傷、術后的免疫力低下宿主。當機體免疫力降低時，其體內的銅綠假單胞菌容易生長繁殖，引發感染[4-8]。

臨床上，銅綠假單胞菌的感染常見于禽類、反芻動物[9-13]。近年來，有水貂感染銅綠假單胞菌的文獻報道[14-18]；水產養殖中，該病原造成的影響也越來越顯著[19-21]。而在野生動物研究領域，銅綠假單胞菌引起疾病的報道相對較少，曾有朱鹮、大熊貓、袋鼠等發生感染的報道[22-25]。銅綠假單胞菌是呼吸系統疾病常見的致病菌之一，關于該菌的文獻研究多集中于呼吸系統，對該菌引發其他臟器的病變描述相對少見[17]。在本病例中，狍子由于口腔外傷導致口腔潰爛，銅綠假單胞菌引起繼發感染，并最終導致菌血癥，依靠其致死毒素、腸毒素、溶血毒素等引發死亡[26]，經病理學診斷發現銅綠假單胞菌除引起肺部病變外，在狍子的腎、心、胰腺等組織均可觀察到此菌造成的組織器官損傷。

5 結論

本研究系統報道1例狍子因感染銅綠假單胞菌，致機體菌血癥最終死亡的病例。通過血液生理生化試驗、病原菌分離培養及分子生物學技術確診致病病因，結合臨床病理變化及系統病理學觀察，全面闡述狍子銅綠假單胞菌病的發生、發展及轉歸機制，可為圈養野生動物菌血癥的病理學診斷提供參考。