長沙市芙蓉區犬瘟熱流行調查及分析

孫金梅，張振偉，鐘 浪，楊 飛

（1.吉林農業大學動物醫學院，吉林長春130000；2.西藏農牧學院動物科學學院，西藏林芝860000；3.湖南農業大學東方科技學院，湖南長沙410128）

犬瘟熱（canine distemper，CD）屬于麻疹病毒屬，又稱為犬麻疹病毒，容易造成動物機體多種器官系統相互傳染，是一種高接觸性、致死性的包膜RNA病毒疾病[1]，主要感染犬科[2]、野生食肉動物[3-4]、貓科動物和浣熊科動物[5]等。犬科動物一旦感染，致死率高達30%~80%[6]。犬瘟熱病毒（CDV）分為肺炎型、消化道型、神經型及皮膚型，嚴重威脅寵物犬的健康。

GICA檢測法即膠體金免疫層析法[7]，將抗原或抗體固定在微孔濾膜上，膠體金指示劑作為顯色劑與其直接反應，繼而出現肉眼可見的顏色變化，以達到檢測病原的目的[8-9]。該檢測法具有簡單快捷、低成本、特異性好的優點[10-11]，是現在各類醫院使用最普遍的疾病檢測方法[12]。

ELISA檢測法即酶聯免疫吸附法。該技術將抗原或抗體固定在酶標板表面，使用酶標記物標記抗體或抗原，使其在酶標板表面與檢測樣品發生顯色反應，最后使用酶標儀進行熒光檢測，以達到檢測病原的目的[13]。該檢測法具有操作簡單、低成本、精準度高、特異性好的優點[14]，是實驗室最普遍使用的檢測方法之一[15]。

通過GICA、ELISA兩種檢測方法檢測湖南省長沙市芙蓉區5家寵物醫院所收治的寵物犬犬瘟熱病病發情況，為該地區犬瘟熱的預防及治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

調查時間：2020年3月12日~2020年4月12日。

調查醫院：湖南省長沙市芙蓉區5家寵物醫院，簡稱A、B、C、D、E醫院。各醫院樣品采集情況見表1。

1.2 試驗材料

10 mL真空采血管（EDTA）、一次性采血針，均購自廣州邦標醫療器械有限公司；犬瘟熱/犬副流感病抗原雙聯檢測卡購自上海八通生物科技股份有限公司；犬瘟熱病毒（CDV）ELISA檢測試劑盒購自上海遠研生物科技有限公司；100 mL PBS緩沖液。

100 mL PBS緩沖液的配制：量取90 mL雙蒸水，加入100 mL容量瓶中，稱取0.8 g氯化鈉、0.02 g氯化鉀、0.115 g無水磷酸氫二鈉、0.156 g二水磷酸二氫鈉、0.02 g磷酸二氫鉀加入該容量瓶，定容至100 mL。

血清的制備：將采集到的血液樣品放置于常溫下20~30 min，血液自然凝固析出血清。

1.3 儀器設備

BCD-230SDCY冰箱購自青島海爾股份有限公司；TDZ5-WS離心機購自金壇市鴻科儀器廠；DNM-9602酶標分析儀購自北京普朗新技術有限公司；Milli-Q Advantage A10超純水儀購自默瑞（上海）生物科技有限公司；AR2130電子天平購自金壇市盛藍儀器制造有限公司。

1.4 檢測方法

1.4.1 GICA檢測

使用樣品稀釋液稀釋樣品，再使用滴管將稀釋后的樣品取3~4滴，逐滴滴入指示卡的加樣窗中，反應5~10 min，依據犬瘟熱/犬副流感病抗原雙聯檢測卡的判斷指標判定犬瘟熱感染結果，并記錄。

1.4.2 ELISA檢測

將酶標板各孔標記，設置陰、陽、空白對照組各2孔，使用PBS液對血清樣品進行稀釋，參照犬瘟熱病毒ELISA檢測試劑盒使用說明書依次對稀釋樣品進行加樣→溫育→洗滌→加酶→溫育→洗滌→顯色→終止反應等步驟，在酶標分析儀上使用450 nm的波長測定各孔吸光度，觀察記錄，并分析試驗數據，參照說明書判定結果。

2 結果與分析

2.1 鼻黏液和血液樣品GICA檢測結果（見表1、表2）

表1 鼻黏液樣品GICA檢測結果Tab.1 GICA results of nasal mucus samples

由表1可知，5家寵物醫院206只寵物犬鼻黏液樣品犬瘟熱檢出率為46.60%，其中A醫院檢出率為32.43%，B醫院檢出率為66.07%，C醫院檢出率為54.55%，D醫院檢出率為50.00%，E醫院檢出率為32.79%。

表2 血液樣品GICA檢測結果Tab.2 GICA results of blood samples

由表2可知，5家寵物醫院206只寵物犬血液樣品犬瘟熱檢出率為48.54%，其中A醫院檢出率為32.43%，B醫院檢出率為67.86%，C醫院檢出率為59.09%，D醫院檢出率為53.33%，E醫院檢出率為34.43%。

2.2 鼻黏液和血液樣品ELISA檢測結果（見表3、表4）

由表3可知，5家寵物醫院206只寵物犬鼻黏液樣品犬瘟熱檢出率為49.51%，其中A醫院檢出率為37.84%，B醫院檢出率為67.86%，C醫院檢出率為59.09%，D醫院檢出率為53.33%，E醫院檢出率為34.43%。

表3 鼻黏液樣品ELISA檢測結果Tab.3 ELISA results of nasal mucus samples

由表4可知，5家寵物醫院206只寵物犬血液樣品犬瘟熱檢出率為54.37%，其中A醫院檢出率為40.54%，B醫院檢出率為75.00%，C醫院檢出率為68.18%，D醫院檢出率為53.33%，E醫院檢出率為39.34%。

表4 血液樣品ELISA檢測結果Tab.4 ELISA results of blood samples

2.3 各型犬瘟熱發病及治愈結果（見表5）

表5 各型犬瘟熱發病及治愈結果Tab.5 Incidence and cure results of canine distemper 單位：%

由表5可知，采用ELISA檢測血液樣品，5家寵物醫院206只寵物犬各類型犬瘟熱的檢出率為54.36%、治愈率為74.11%、死亡率為25.89%。其中，肺炎型檢出率為33.93%、消化道型檢出率為48.21%、神經型檢出率為7.14%、皮膚型檢出率為10.71%；肺炎型治愈率為71.05%、消化道型治愈率為87.04%、神經型治愈率為12.50%、皮膚型治愈率為66.67%；肺炎型死亡率為28.95%、消化道型死亡率為12.96%、神經型死亡率為87.50%、皮膚型死亡率為33.33%。

3 討論

犬瘟熱作為一種高致病性傳染性疾病[16]，少數病犬表征明顯（皮膚型），多數通過呼吸道進入肺部，使其發生炎癥（肺炎型），隨后侵染呼吸道相鄰的組織器官，如腸道、肝臟等（消化道型），少數病原還可以感染神經元（神經型）。其中,皮膚型、肺炎型、消化道型的治愈率遠遠高于神經型[17]。

犬瘟熱在美國、澳大利亞[18]、韓國[19]、巴西[20]、不丹[21]、坦桑尼亞[22]及中國[23]等都有不同程度的大流行，多種動物如犬、海獺、貓、獅子、土狼、浣熊等均會被其感染。根據犬瘟熱類型的不同，成年犬科動物一旦感染，致死率可達30%~80%，幼年動物致死率甚至高達80%~90%[24]，是一種寵物犬養殖過程中不可忽視的疾病。盡管近年來在寵物犬上廣泛使用疫苗進行預防，但防治效果卻并不理想。其原因可能是犬瘟熱病毒是一種單鏈RNA病毒，由于RNA單鏈結構并不穩定，導致其很容易發生變異[25]。因此，為了解湖南省長沙市芙蓉區寵物犬的犬瘟熱的流行及治療情況，本研究通過對該地區5家動物醫院進行為期一個月的走訪調查、定點采樣來收集樣品，再以GICA檢測法、ELISA檢測法獲得寵物犬犬瘟熱流行情況。結果表明，ELISA檢出率比GICA檢出率高，與秦鳳英[26]在2014年使用GICA檢測法與ELISA檢測法檢測梅毒特異性抗體的所表現的差異性相同。GICA檢測法表現出更高的靈敏性，與王逸群等[27]在2018年使用GICA檢測法與ELISA檢測法檢測類風濕關節炎患者血清抗環瓜氨酸肽抗體所表現出的靈敏性相同。所以，本研究使用GICA檢測法與ELISA檢測法檢測犬瘟熱病毒的結果是可信的。

利用兩種方法檢測出來的犬瘟熱感染率在48.54%~54.36%，明顯高于趙九州等[28]在2019年調查大熊貓自然保護區（栗子坪）周邊區域的犬瘟熱感染率（4.7%），也明顯高于陳秀[29]在2012年在菏澤地區調查的犬瘟熱流行情況（27.8%），與張昕等[30]在2018年成都地區的犬瘟熱感染率50.71%相似。本研究調查的地點為5家寵物醫院，而一般只有在寵物患病的情況才會送來醫院治療，造成本次調研結果遠遠高于其他地區。本研究所采集的樣品均來源于湖南省長沙市芙蓉區，只有206只寵物犬，其橫向空間不夠廣、數據量不夠多。本研究開展時間正值春季，其檢測結果也與張昕等[30]所統計的春季犬瘟熱病毒的檢出率56.19%相似。所以，本次針對長沙市芙蓉區的犬瘟熱檢測結果具有相當的可信度。本次調研所有患病犬的治愈率為74.11%，致死率為25.89%，遠遠低于白建等[31]在2012年統計犬瘟熱的致死率（93%），與李昊洋[32]于2017年所做的犬瘟熱防疫與治療方案研究結果相似（75%）。出現這種現狀的原因是近年來對犬瘟熱的治療研究更加成熟，李昊洋[32]對該疾病治療方案的不斷探索，才使得該地區治愈率如此高。

4 結論

綜上所述，湖南省長沙市芙蓉區的寵物犬犬瘟熱的病發率以使用ELISA檢測血液樣本為準為54.36%，治愈率為74.11%，死亡率為25.89%。本次調研為該地區此類疾病的流行情況及治愈情況調查提供參考。