中藥材益母草中水蘇堿含量鑒定分析

陳婷 莫灼康

中藥材益母草中水蘇堿含量鑒定分析

陳婷 莫灼康

目的研究中藥材益母草的水蘇堿成分的含量鑒定。方法應用高效液相色譜法測定中藥材益母草中水蘇堿成分的含量，以Kromasil KR60-5CN為色譜柱，乙腈-甲醇溶液為流動相，以外標法進行檢測，設定柱溫32℃，流速1.5ml/min，檢測波長210nm。結果水蘇堿回歸方程為Y=1206.578X-173.562，水蘇堿進樣量在1.00～25.00μg范圍內具有良好的線性關系，r=0.9954，樣品平均加樣回收率為98.83%(n=9)，RSD為0.95%。結論用高效液相色譜法測定中藥材益母草中水蘇堿含量準確縣可靠，可重復利用，是控制該制劑質量的有效方法。

中藥材;益母草;水蘇堿;含量鑒定

益母草是屬唇型科植物，性味辛、苦，微寒，含有生物堿類、二萜類、黃酮類、苷類、脂肪酸類等化學成分。由于益母草中最為主要活性生物堿是水蘇堿，因此對益母草藥材及制劑的質量控制以水蘇堿為指標。因此本研究應用高效液相色譜法用于水蘇堿的含量測定，以提高益母草藥材定量分析準確度?，F報告如下。

1 研究儀器與材料

Agilengt 1200高效液相色譜系統(美國Agilent公司);722型可見光分光光度計(上海光譜儀器有限公司);G1376A高效液相泵，G1367B自動進樣器，G1365B多波長UV檢測器，G1316A柱溫箱;Hystar色譜工作站;1810-B型石英自動雙重純水蒸餾器(購自西安常儀生化儀器有限公司);HH-6型數顯恒溫水浴鍋(購自上?？德穬x器設備有限公司)。益母草藥材(生產批號20100702)購自廣東省東莞國藥集團藥材有限公司;鹽酸水蘇堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110712-201008);乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純;水為二次重蒸水。

2 試驗方法

2.1 色譜條件的選擇 選擇色譜柱為Kromasil KR60-5CN(250mm×4.6mm，5μm);流動相組成為乙腈:甲醇:水=60∶30:10;以外標法進行檢測，設定柱溫32℃，流速1.5ml/min，檢測波長 210nm，進樣量為 10μl［1］。

2.2 制備對照品溶液 精密稱取鹽酸水蘇堿對照品適量，105℃干燥至恒重，適量水蘇堿置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得0.5mg/ml的對照品溶液，搖勻，備用［2］。

2.3 制備供試品溶液 取本品1g，精密稱定后，置容量瓶中，精密加甲醇50ml，稱定重量，超聲(250W，40kHz)處理30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻濾過，精密量取續濾液25ml，過氧化鋁一活性炭柱(堿性氧化鋁5g，濕法裝柱，上覆層析用40～60目活性炭2g，甲醇預洗)，收集甲醇洗脫液100ml，蒸干后殘渣加流動相適量使之溶解，轉移至10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，以微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得［3］。

2.4 線性關系的分析 精密稱取水蘇堿對照品23.5mg，置20ml容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度搖勻即得貯備液(1.175mg/ml)。取母液配成濃度分別為58.75、117.5、235、352.5、528.75μg/ml的對照品溶液，各取 50μl進樣，進樣量分別進樣 2.0、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0μl。以峰面積常用對數值為縱坐標(Y)，鹽酸水蘇堿進樣量常用對數值為橫坐標(x)，繪制標準曲線，繪制標準曲線，結果水蘇堿回歸方程:Y=1206.578X-173.562，線性范圍:1.00～25.00μg。

2.5 穩定性試驗 取同一批供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h測定水蘇堿含量，結果其RSD值為0.95%。說明供試品溶液在本實驗條件下24h內穩定。

2.6 精密度試驗 取1份對照品溶液，重復進樣5次，測定峰面積，結果其RSD值為1.01%，表明實驗精密度良好。

2.7 重復性試驗 取同一批供試品溶液(批號2008423)5份，分別進樣測定水蘇堿峰含量。結果其RSD值為1.14%，表明重復性良好。

2.8 回收率試驗 精密量取批號為081208的樣品共9份，每份分別精密加入加入鹽酸水蘇堿對照液0.5mg/ml，適量，搖勻，進樣測定，計算鹽酸水蘇堿回收率為98.83%，RSD為0.95%。

2.9 樣品測定 分別精密量取對照品溶液和供試品溶液進樣測定。按外標法以峰面積分別計算得5批口服液樣品中水蘇堿的含量分別為 0.66、0.65、0.70、0.69g/ml。

3 討論

中醫臨床將益母草視為較常用的婦科良藥，具有活血和調經的作用。現代藥理研究可見，益母草中水蘇堿等多種活性生物堿具有抑制血小板聚集、提高心功能、改善心肌缺血、抗凝、增加冠狀動脈血流、抗血栓形成等多種作用，且作用較久。益母草含水蘇堿、益母草堿、益母草啶和益母草寧等多種生物堿。

根據以上的研究方法顯示，采用基于氰基柱的高效液相色譜檢測的方法，定量測定益母草原藥材中水蘇堿的含量是可行的，因此該方法具有潛在的通用性，操作簡便、可行，重復性好。本實驗通過對樣品的研究發現，由于鹽酸水蘇堿的紫外吸收為末端吸收，且其極性較大，故很難以反相HPLC進行測定，有文獻采用強陽離子交換柱獲得了較好的分離。本實驗結果表明用高效液相色譜法測定中藥材益母草中水蘇堿含量準確可靠，重復性好，可作為控制該制劑質量的方法。

［1］張嫻，彭國平.益母草屬化學成分研究進展.天然產物研究與開發，2003，15(2):162-166.

［2］晁志，馬麗玲，周秀佳.等.反向離子對色譜法測定益母草藥材中水蘇堿和益母草堿的含量.第一軍醫大學學報，2009，25:1226-1227.

［3］劉新華，辛宏，朱依諄.等.不僅是“益母”草:益母草的心臟保護作用.生理學報，2007，59(5):578-584.

523018廣東省東莞市人民醫院普濟分院中藥房(陳婷);東莞市人民醫院制劑室(莫灼康);