益腎止血顆粒對Dextran 誘發(fā)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙的影響

丁云錄，劉艷華，鄒 迪，張洪寶，崔成姬，張守琳

（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021）

益腎止血顆粒功效為滋陰補(bǔ)腎、健脾利濕、活血化瘀，是長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腎病科張守琳教授的經(jīng)驗方，自1996 年應(yīng)用其治療IgA 腎病二十余年，可有效減輕患者臨床癥狀。本研究觀察益腎止血顆粒對微循環(huán)障礙模型大鼠的療效，以期為臨床用藥提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 動物，Wistar 大鼠，SPF 級，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，分籠飼養(yǎng)，室溫（21±2）℃，相對濕度50%～60%，通風(fēng)良好，室內(nèi)12 h 明暗自動切換，自由攝食、飲水。動物合格證號：SCXK-（吉）2018-0007，購于長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司。藥品，益腎止血顆粒（黃芪、枸杞子、女貞子、生地黃、旱蓮草、大薊、小薊、大黃、梔子、白茅根、槐花、益母草、牡丹皮、赤芍、當(dāng)歸等），長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)藥研究中心提供。腎炎康復(fù)片，國藥準(zhǔn)字Z10940034，規(guī)格：每片0.48 g，每瓶45 片，批號：1P17419，天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司。戊巴比妥鈉，規(guī)格：每瓶500 mg，批號：WXBB6772V，美國Sigma公司產(chǎn)品。試劑，高分子右旋糖酐（Dextran，MW,500,000），批號：17-0320-01，瑞典Pharmacia Fine Chemicals AB Uppsala。儀器，BI-2000 醫(yī)學(xué)圖像分析儀，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法 動物分組及給藥，隨機(jī)將50 只大鼠分成對照組，陽性對照組（腎炎康復(fù)片10.8 g/kg）和益腎止血顆粒13.5、6.75、3.4 g/kg 3 個劑量組。試驗共分5 組，每組10 只。受試藥物用蒸餾水配制成混懸液，大鼠ig 體積為10 mL/kg，對照組給予等體積的蒸餾水。模型制備及指標(biāo)檢測[1-4]，灌胃給藥1 h 后，戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔注射麻醉，于腹正中線2 cm 切口，把大鼠近盲腸段腸系膜鋪于盛有恒定37 ℃臺氏液的有機(jī)玻璃灌流盒內(nèi)，通過微循環(huán)顯微鏡和微圖像計算機(jī)處理裝置觀察記錄腸系膜注射Dextran 0、5、15、30、45、60 min 的微動脈流速、微靜脈流速、微動脈血管口徑、微靜脈血管口徑、毛細(xì)血管開放數(shù)和微靜脈血流狀態(tài)的變化，以10% Dextran 6 mL/kg 舌靜脈給藥，制備急性微循環(huán)障礙模型。血液流態(tài)的測定，采用血液流態(tài)的加權(quán)積分法：線流、線粒流（1、2 態(tài)）0 分；粒線流（3 態(tài)）為0.2 分；粒流（4 態(tài)）為0.8 分；粒緩流（5 態(tài)）為1.6 分；粒擺流（6 態(tài)）為4.0 分；全停滯（7 態(tài)）為6.0 分。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 試驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，統(tǒng)計學(xué)處理方法采用組間t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動脈流速、微靜脈流速的影響 注射Dextran 后5 min 血流速度開始下降，并隨時間延長逐漸減慢，微動脈流速、微靜脈流速變化規(guī)律一致。益腎止血顆粒高劑量組動脈、靜脈血流速度在注射Dextran 后5、15、30、45、60 min時，與對照組比較均有顯著差異性（P＜0.01或P＜0.05）。并且，益腎止血顆粒高劑量組動脈血流速度在注射Dextran 后45 min 時，與腎炎康復(fù)片組比較有顯著差異性（P＜0.05）。益腎止血顆粒中劑量組動脈、靜脈血流速度在注射Dextran 后30、45、60 min 時，與對照組比較均有顯著差異性（分別為P＜0.01 或P＜0.05）。益腎止血顆粒低劑量組動脈、靜脈血流速度在注射Dextran 后45、60 min 時，與對照組比較均有顯著差異性（P＜0.01 或P＜0.05）。說明益腎止血顆粒高，中和低三個劑量組均能增快微血管血流速度。見表1，表2。

2.2 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動脈口徑、微靜脈口徑的影響 注射Dextran 后30、45、60 min，益腎止血顆粒高劑量組、中劑量組微動脈、微靜脈血管口徑與對照組比較均有顯著差異性（P＜0.01 或P＜0.05）；注射Dextran 后45、60 min 時益腎止血顆粒低劑量組微動脈血管口徑與對照組比較均有顯著差異性（P＜0.05）。說明益腎止血顆粒能顯著改善微血管痙攣狀態(tài)。見表3，表4。

2.3 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管開放數(shù)的影響 注射Dextran 后45、60 min，益腎止血顆粒高劑量組毛細(xì)血管開放數(shù)與對照組比較均有顯著差異性（為P＜0.05）；注射Dextran 后60 min，益腎止血顆粒中劑量組、低劑量組毛細(xì)血管開放數(shù)與對照組比較均有顯著差異性（P＜0.05），說明益腎止血顆粒能顯著增加毛細(xì)血管開放數(shù)。見表5。

2.4 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管內(nèi)血液流態(tài)的影響 注射Dextran 5 min 后，微靜脈血流有線流或線粒流轉(zhuǎn)變?yōu)榱＞€流或粒流，紅細(xì)胞聚集，血漿與血細(xì)胞分離，可見白細(xì)胞貼壁翻滾現(xiàn)象，并逐漸加重至60 min。各給藥組出現(xiàn)以上現(xiàn)象均在注射Dextran 15 min 后。說明藥物對微循環(huán)障礙時的血液流態(tài)具有改善作用。益腎止血顆粒高劑量組、中劑量組在注射Dextran 后15、30、45、60 min，可以明顯改善微循環(huán)血液流態(tài)，與對照組比較均有顯著差異性（P＜0.01 或P＜0.05）。益腎止血顆粒低劑量組在注射Dextran 后15、45 min，可以明顯改善微循環(huán)血液流態(tài)，與對照組比較有顯著差異性（P＜0.05）。說明益腎止血顆粒能明顯改善血液流態(tài)。見表6。

表1 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動脈流速的影響（，n =10） μm/s

表1 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動脈流速的影響（，n =10） μm/s

注：與對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01；與腎炎康復(fù)片比較，△P ＜0.05

表2 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流速的影響（，n =10） μm/s

表2 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流速的影響（，n =10） μm/s

注：與對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表3 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動脈口徑的影響（，n =10） μm

表3 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動脈口徑的影響（，n =10） μm

注：與對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表4 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈口徑的影響（，n =10） μm

表4 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈口徑的影響（，n =10） μm

注：與對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表5 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管開放數(shù)的影響（，n =10） 條

表5 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管開放數(shù)的影響（，n =10） 條

注：與對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表6 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流態(tài)的影響（，n =10）

表6 益腎止血顆粒對大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流態(tài)的影響（，n =10）

注：與對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

3 討論

益腎止血顆粒提出以脾腎虧虛為本，濕熱瘀阻為標(biāo)，滋陰補(bǔ)腎、健脾利濕、活血化瘀為治療慢性腎炎血尿的根本治療原則。開發(fā)中藥復(fù)方新藥益腎止血顆粒，可以滿足臨床對治療慢性腎炎血尿的品種的需求[5-6]。益腎止血顆粒由黃芪、枸杞子、女貞子、生地黃、旱蓮草、大薊、小薊、大黃、梔子、白茅根、槐花、益母草、牡丹皮、赤芍、當(dāng)歸等組方，諸藥合用共奏滋陰補(bǔ)腎、健脾利濕，活血化瘀功效。引發(fā)慢性腎炎血尿的常見疾病有急性腎小球腎炎、慢性腎小球腎炎、隱匿性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎和紫癜性腎炎等。其中IgA 腎病是原發(fā)性腎小球疾病中呈現(xiàn)單純性血尿的常見病理類型，約占40%～50%[7-8]。我國慢性腎臟病患病率為10%，原發(fā)性腎小球疾病患病率約為5%，其中IgA 腎病患病率可達(dá)到2.4%～3%[9-10]。

本實驗采用舌靜脈注射Dextran 造成大鼠腸系膜微循環(huán)血瘀模型的方法，觀察大鼠腸系膜微動脈流速、微靜脈流速、微動脈血管口徑、微靜脈血管口徑、毛細(xì)血管開放數(shù)和微靜脈血流狀態(tài)，實驗結(jié)果表明益腎止血顆粒可以明顯地改善大鼠腸系膜微循環(huán)障礙，為深入研究益腎止血顆粒的藥理學(xué)作用提供了實驗依據(jù)。