HIV感染急性期及慢性期T淋巴細胞對HBV反應能力的比較研究

朱志強，宋 兵，姜太一，汪 雯，張 愚

由于HIV與HBV具有相同的傳播途徑，HIV合并HBV感染比較常見。目前HIV合并HBV感染對HIV疾病進程的影響報道不一[1-2]，有些研究認為合并HBV感染對HIV疾病的進程沒有影響，有些報道認為合并HBV感染促進了HIV疾病的進程。但一般報道均認為HIV合并HBV感染對HBV疾病進程影響較大[3]，HIV合并HBV感染的患者肝硬化和肝癌的發生率明顯增加[3]。因此了解HIV與HBV共感染的特點及尋找相應的預防措施有重要意義。

研究發現HIV感染者的HBV的合并感染率明顯高于非HIV感染人群，可能是HIV和HBV具有相同的傳播途徑導致的。因為HIV感染急性期沒有特異的臨床表現，急性期感染者難以獲得，因此絕大多數都是針對HIV感染慢性期患者進行的研究和報道[4]。本團隊在北京市科委的支持下，從2006年開始建立了HIV感染的急性期隊列，團隊前期對HIV感染急性期人群的研究表明， HIV感染急性期患者的HBV合并感染率明顯低于HIV感染慢性期的患者。由此推測可能隨著HIV疾病的進展，HIV感染者的免疫力明顯下降，對HBV的免疫反應及清除能力明顯降低。雖然很多科學家及臨床工作者均推測在HIV感染急性期對HBV的清除能力要高于HIV感染慢性期，但關于HIV感染急性期及慢性期T淋巴細胞對HBV的反應能力的比較尚無報道。因此，本研究通過入組HIV感染急性期及慢性期合并HBV感染的患者，對比分析2種不同時期HIV感染T細胞對HBV反應能力的差異。

1 對象與方法

1.1 對象 患者來自2006年起首都醫科大學附屬北京佑安醫院建立的男男同性HIV感染急性期及慢性期的大隊列患者[5-7]。HIV感染急性期的定義參照Fiebig分期[5-7]，HIV感染慢性期的患者為HIV感染確診半年以上的患者。所有的患者均為HBsAg、HBeAg及HBcAb 3項陽性并能檢測到HBV DNA水平的患者。其中，HIV感染急性期合并HBV感染者10例，年齡為31（19～59）歲，HIV感染慢性期合并HBV感染者15例，年齡為32（22～60）歲。另外，選取與其年齡相匹配的健康者15例作為正常對照，年齡為32（21～55）歲。所有患者均未經過抗病毒治療，未合并嚴重的機會性感染，無惡病質。本研究已獲得醫院倫理委員會批準，患者及家屬簽署知情同意書。

1.2 HIV RNA檢測 HIV載量檢測采用羅氏cobas TaqMan病毒載量檢測系統進行病毒載量檢測。

1.3 HBV DNA檢測 血清中HBV DNA的檢測利用羅氏檢測試劑盒進行。

1.4 CD4+T細胞計數檢測 利用BD公司CD4+T細胞計數檢測試劑盒進行檢測，通過BD FACSCalibur全自動雙激光四色流式細胞儀進行獲取和分析。

1.5 體外刺激培養 1×106外周血單個核細胞在含有10%的胎牛血清的10 ml 1640培養基中進行培養，用1 mg/ml的HBsAg重疊肽（來自牛津大學）進行刺激培養72 h后收集細胞，CD3-PerCP、 IFN-γ-PE、CD8-FITC和CD4-APC染色后進行上機分析。

1.6 統計學處理 使用SPSS 25.0軟件對數據進行統計學分析，計量資料符合正態分布，用±s表示，符合非正態分布用中位數和四分位數間距表示，組間比較采用t檢驗或U檢驗，相關性分析采用Spearman相關性分析來進行。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HBV DNA水平與HIV載量及CD4+T細胞計數之間的相關性分析 對入組患者HBV DNA水平與HIV載量進行分析，發現HBV DNA水平與HIV RNA水平呈明顯的正相關（r=0.502，P=0.011，圖1A），HBV DNA水平與CD4+T細胞計數呈負相關（r=-0.409，P=0.042，圖1B）。

圖1 HBV DNA水平與HIV載量和CD4+ T細胞計數的相關性分析Figure 1 Correlation analysis of HBV DNA level with HIV viral load and CD4+ T cell count level

2.2 HIV感染急性期及慢性期CD4+T細胞及CD8+T細胞分泌IFN-γ能力的比較 研究對比分析了刺激后CD4+T細胞（圖2A）及CD8+T細胞（圖2B）分泌IFN-γ的能力，發現HIV感染急性期患者經HBsAg重疊肽刺激后CD4+T細胞及CD8+T細胞分泌IFN-γ的能力（分別為9.1%±3.9%及4.4%±1.8%）明顯高于HIV感染慢性期的患者（分別為5.7%±2.5%及2.7%±1.4%）。

圖2 HBsAg重疊肽刺激后，CD4+ T及CD8+ T細胞分泌IFN-γ在正常對照、HIV感染急性期患者及HIV感染慢性期患者之間的比較Figure 2 Comparison of IFN- secreted by CD4+ T and CD8+ T cells after stimulation by HBsAg overlapping peptide among normal persons,HIV patients at acute and chronic stages

3 討 論

本研究發現，在HIV感染過程中，HIV合并HBV感染的患者，HBV DNA水平與HIV RNA水平呈正相關，而與CD4+T細胞計數呈負相關。HIV RNA水平及CD4+T細胞計數是反映HIV疾病進展的兩個最重要的指標，本研究結果表明在HIV感染中，隨著疾病的進展，機體對HBV的清除能力逐漸降低。這可能是HIV合并HBV感染的患者，HBV疾病進展速度較快的原因。很多人設想在HIV疾病進展過程中機體對HBV的清除能力是降低的，本研究利用已有的隊列和標本對此進行了證實。因此對合并HBV感染的HIV感染者早發現及早治療可能有效抑制HBV疾病的進展。但也有研究報道， HIV感染極晚期的患者機體B細胞反應能力非常低下，通過檢測抗原和抗體的水平不能很好地反映HBV感染情況，須要進一步檢測HBV DNA的水平來進行評價[8]。

健康成人急性HBV感染后大部分能夠自愈，而嬰幼兒急性HBV感染后，因其免疫力低下不能有效清除病毒而成為慢性HBV攜帶者。我國通過對新生兒接種乙型肝炎疫苗來控制乙型肝炎的成效非常顯著。HIV感染者中，合并慢性HBV感染率明顯高于非HIV感染者。在本研究中利用HBsAg重疊肽刺激發現，與急性期感染者相比，HIV感染慢性期患者CD4+T細胞及CD8+T細胞產生IFN-γ的能力較低，表明隨著HIV疾病的進展，機體對HBV的清除能力逐漸降低。HIV感染人群隨著疾病的進展，HBV合并感染率增加，感染率增加是因HIV感染者隨疾病的進展，機體對急性期HBV感染的清除能力降低導致HBV感染進入慢性期，還是因患者隨著機體抗HBV能力的降低，機體潛在的HBV復制增加導致，值得進一步研究。此外，隨著免疫系統的損傷，機體感染HBV后易慢性化，對這類人群接種乙型肝炎疫苗可能會有預防HBV合并感染的作用。

總之，本研究在HIV感染急性期及慢性期隊列的基礎上，發現隨著HIV疾病的進展，HBV DNA水平逐漸升高。CD4+T細胞及CD8+T細胞分泌IFN-γ的能力逐漸降低。但本研究也有一些不足，因為患者難以獲得，受細胞量及流式細胞儀檢測的限制，本研究只檢測了CD4+T細胞及CD8+T細胞分泌IFN-γ的能力，沒有直接檢測細胞對HBV感染細胞的殺傷及清除作用，后期如有相應的標本，進行更詳細的研究將會有助于進一步揭示HIV感染者感染HBV后慢性化的機制。