自體免疫多細胞聯合化療治療多發性骨髓瘤患者的臨床效果

歐陽賢鳳，羅萍（通信作者），鄔珊，胡飛，于繼海，李金鳳，徐旭升，郭瑛，黃雄，朱文鳳

江西省九江市第一人民醫院 （江西九江 332000）

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是臨床常見的血液系統惡性腫瘤，好發于老年人群，主要臨床表現為血鈣增高、貧血、骨痛及腎功能損傷，即“CRAB 癥狀”[1]。近年來，隨著我國人口老齡化速度的加快，MM 發病率不斷上升。臨床治療MM 患者的傳統方法包括化療、靶向治療、造血干細胞移植等，但療效均不理想，患者的中位生存期僅為3年[2]。隨著惡性腫瘤自體免疫細胞治療研究的廣泛開展，樹突狀細胞（dendritic cell，DC）、細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine-induced killer，CIK，）、自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）分別在MM 患者的治療中取得了一定療效[3]。本研究在傳統治療基礎上聯合DC-CIK-NK 自體免疫多細胞治療MM 患者，預期目的是提高患者的無進展生存期（progression free survival，PFS）及總生存期（overall survival，OS），改善患者的生命質量，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月至2018年6月我院血液科收治的MM初診患者42例，按隨機原則分為兩組，每組21例。試驗組男11例，女 10例；平均年齡（68.84±9.72）歲；Duris-Salmon 分型，Ⅰ～Ⅱ型12例，Ⅲ型9例；R-ISS 分型，Ⅰ～Ⅱ型10例，Ⅲ型11例；平均血紅蛋白（hemoglobin，Hb）水平為（76.96±5.21）g/L。對照組男10例，女 11例；平均年齡（68.50±9.45）歲；Duris-Salmon 分型，Ⅰ～Ⅱ型13例，Ⅲ型8例；R-ISS 分型，Ⅰ～Ⅱ型7例，Ⅲ型14例；平均Hb 水平為（77.04±5.47）g/L。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

診斷標準：完成基本檢查；骨髓單克隆漿細胞比值≥10%或活檢提示漿細胞瘤；血清或尿液中出現單克隆球蛋白；表現有“CRAB 癥狀”[4]。納入標準：通過血液檢查、尿液檢查、骨髓檢查、影像學檢查等確診為MM；具有完整行為能力并同意簽署知情同意書。排除標準： 對本研究化療藥物不耐受的患者；合并嚴重心腦血管或神經系統疾病的患者；曾接受過骨髓移植或二次治療的患者；依從性差或中途退出的患者。

1.2 方法

對照組采用TMP 方案（沙利度胺+美法侖+地塞米松）化療：沙利度胺片（常州制藥廠有限公司，國藥準字H32026130，規格50 mg）口服，首周50 mg/d，每周增量50 mg，最大劑量為200 mg/d；美法侖（愛克蘭， Heumann Pharma GmbH，注冊證號 H20040125，規格 2 mg）口服，0.15 mg/kg，d1-4；地塞米松硫酸鈉注射液（辰欣藥業股份有限公司，國藥準字H37021969，規格1 ml∶5 mg）靜脈滴注，40 mg/d，d1-2、d4-5、d8-11，6周為1個療程。

試驗組在對照組基礎上聯合DC-CIK-NK 自體免疫多細胞療法。（1）細胞株腫瘤抗原提取液制備流程：復蘇凍存多發性骨髓瘤細胞株，進行細胞培養（傳代不超過25代）；24 h 后吸出培養基，再用細胞勺刮取腫瘤細胞，離心去上清后，用無菌0.9%氯化鈉注射液重懸；然后將腫瘤細胞置于-86 ℃冰箱，反復凍融10次，12 000 r/min 離心5 min，去上清，過濾除菌；測定細菌、真菌、內毒素、支原體及蛋白濃度，按蛋白濃度以培養液配成5 mg /ml 作為抗原提取液，-20 ℃保存，質檢合格后待用。（2）DC 的培養：將外周血單個核細胞鋪入6孔板，置于37 ℃、5% CO2培養箱中孵育2 h 后，輕輕晃動，取懸浮細胞待用；用培養基洗板2次后，加入培養基繼續培養；第3天加入DC 培養基，第5天加入腫瘤抗原提取液，誘導10～15 h 加入細胞因子（如抗CD3單克隆抗體、白細胞介素-2和干擾素-γ 等）；第8天開始連續2 d 回輸，共4次。（3）CIK 的培養：將DC 培養得到的部分懸浮細胞密度調整為1×106個/ml，加入干擾素，置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養24 h，然后加入細胞因子（如抗CD3單克隆抗體、白細胞介素-2 和干擾素-γ等），繼續培養，每3 天半量換液，并補加相應細胞因子和自體血漿；12 d 后開始回輸，連續2 d，共回輸4 次。（4） NK 的培養：將DC 培養得到的部分懸浮細胞密度調整為1 ×106個/ml，加入抗CD3單抗，培養3 d 后，更換含細胞因子的培養基，置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養，每3天半量換液，并補加相應細胞因子及自體血漿；14 d 后開始回輸，連續2 d，共回輸4次。（5）回輸：質量檢控合格的細胞，用5%患者自體血漿重懸，將重懸液注入100～250 ml 0.9%氯化鈉注射液中，混勻，用于第1次回輸，同時取1 ml 回輸液置于滅菌1.5 ml 離心管中，封口做標識，4 ℃存放3個月備查；剩余細胞在10～17 d 內回輸完。

1.3 觀察指標

（1）治療4個療程后，比較兩組治療總有效率：參考國 際 骨 髓 瘤 工 作 組（International Myeloma Working Group，IMWG）標準，治療效果分為完全緩解、非常好的部分緩解、部分緩解、疾病穩定、疾病進展，總有效率=（完全緩解例數+非常好的部分緩解例數）/總例數×100%。（2）隨訪2年，記錄兩組PFS 與OS：PFS 為患者接受治療至最后一次隨訪結束時，發現疾病進展或死亡的時間；OS 為分組至最后一次隨訪結束或死亡的時間。

1.4 統計學處理

采用SPSS 21.0統計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療總有效率比較

試驗組治療總有效率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組治療總有效率比較

2.2 兩組PFS 與OS 比較

隨訪2年，試驗組PFS 與OS 均長于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組PFS 與OS 比較（個月，±s）

表2 兩組PFS 與OS 比較（個月，±s）

注：PFS 為無進展生存期，OS 為總生存期

組別 例數 PFS OS試驗組 21 23.44±0.95 24.02±0.99對照組 21 20.87±2.42 21.09±2.18 t 4.524 5.591 P＜0.05 ＜0.05

3 討論

目前，臨床已將自體細胞免疫療法列入MM 的治療原則，該療法可調節腫瘤微環境中T 細胞的組成及比例，從而識別并殺死癌細胞。

DC 是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞，它能高效地攝取、加工、處理和遞呈抗原給殺傷腫瘤的效應細胞，利用腫瘤抗原沖擊DC 的過繼細胞免疫治療具有強大的抗腫瘤效應，已被用于多種實體腫瘤的治療；CIK 具有增殖能力強、殺瘤活性高、殺瘤譜廣及非主要組織相容性復合體限制性殺瘤等特點，具有廣泛殺傷自體、異體及耐藥癌細胞的作用[5]； NK 可通過識別癌細胞表達的NK 表面分子配體，而對癌細胞產生殺傷作用[6]。DC-CIK-NK 自體免疫多細胞療法可發揮DC 的傳輸抗原信息能力、CIK 的特異性殺傷和非MHC 限制性殺傷能力、NK 的識別惡性轉化細胞能力。DC-CIK-NK 自體免疫多細胞療法的治療機制如下：首先，經輔助細胞（如DC、單核細胞、巨噬細胞等）活化的NK 細胞進入患者體內，到達效應部位，在其他活化信號的作用下成為效應細胞，發揮快速殺傷癌細胞的特點；其次，適度聯合放、化療可以使癌細胞上的NK 細胞活化受體的配體表達開啟，增加癌細胞對NK 細胞殺傷的敏感性；另外，NK 和CIK 的抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用也有助于提高臨床療效。本研究結果顯示，試驗組治療總有效率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；隨訪2年，試驗組PFS 及OS 均長于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，自體免疫多細胞聯合化療有助于提高MM患者的治療效果，延長其生存期。