黃芪多糖、澤瀉提取物對(duì)非酒精性脂肪肝的作用機(jī)制

戴唯嘉，劉勁翀，王羅武，肖薦林，杜穎瑜，彭文佳

摘要：目的：探討不同濃度梯度下黃芪多糖、澤瀉提取物（以下簡(jiǎn)稱黃澤湯） 對(duì)非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD） 的作用機(jī)制。方法：挑選雄性 SPF 級(jí) SD 大鼠50只，體重 180～200 g，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為對(duì)照組、模型組、600、 300、150 mg/kg 黃澤湯組。以灌胃方式給予藥物治療，對(duì)照組以等體積純凈水灌胃，模型組以 0.9 % NaCl 10 mg/kg 灌胃。每日 2 次，持續(xù) 4 周。檢測(cè)大鼠血清生化指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果：與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清 AST、ALT 水平和肝臟指數(shù)均顯著性升高（P < 0.01） ，與模型組比較，中、高劑量組與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05） ;AST、ALT 水平均顯著性降低（P < 0.05） ;與對(duì)照組比較，模型組大鼠 TG 和 LDL 水平均顯著性升高（P < 0.05） ，HDL 水平則顯著性降低（P < 0.05） 。與模型組比較，高劑量組對(duì)其改變特別顯著（P < 0.05） ，TG 和 LDL 均顯著性降低（P < 0.05） ，HDL 則顯著性升高（P < 0.05） 。結(jié)論：不同濃度梯度下黃澤湯對(duì)NAFLD的血脂有一點(diǎn)作用，結(jié)果顯示濃度越高療效越佳。

關(guān)鍵詞：黃澤湯;大鼠;非酒精性脂肪肝（NAFLD）

非酒精性脂肪性肝病是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯牟±砭C合征，包括單純性脂肪肝及由其演變的脂肪性肝炎和肝硬化。據(jù)報(bào)道， NAFLD全球發(fā)病率6～35 %， 其中20 %將發(fā)展成為肝硬化[1]。此外，NAFLD是隱源性肝硬化的主要原因， 也是肝移植的第二大原因，因此，本文就黃芪多糖、澤瀉提取物（以下簡(jiǎn)稱黃澤湯） 的不同濃度梯度對(duì)NAFLD的作用機(jī)制，為臨床上NAFLD的治療提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性 SPF 級(jí) SD 大鼠，體重 180～200 g， 由昭衍（蘇州） 新藥研究中心有限公司提供;飼養(yǎng)于湖南長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物飼養(yǎng)于動(dòng)物房通風(fēng)鼠籠中，環(huán)境溫度控制在 20～22℃，濕度為50 %，12 h∶12 h光亮和光暗循環(huán)。 SD 大鼠共分為5組，每組10只，分別為對(duì)照組、模型組、600 mg/kg 黃澤湯組、 300 mg/kg 黃澤湯組、150 mg/kg 黃澤湯組。

1.2 藥物及試劑

黃芪多糖、澤瀉提取物由長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院中醫(yī)學(xué)院研究中心提供。黃澤湯的制備：將中藥黃芪多糖、澤瀉飲片成粗粉，分別用雙蒸水、50 %甲醇和純甲醇煎煮，提取液濃縮回收，制備為黃澤水浸膏、50 %甲醇浸膏和黃澤湯甲醇浸膏。 用含5 %乙醇和7 % 聚丙烯醋酸纖維素鈉溶液作為黃澤湯增溶劑溶解浸膏，制得濃度均相當(dāng)于每毫升1.0 g黃澤湯的3種提取物混懸液，備用。三酰甘油（TG） 檢測(cè)試劑盒、高密度脂蛋白（HDL） 檢測(cè)試劑盒、低密度脂蛋白（LDL） 檢測(cè)試劑盒、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT） 檢測(cè)試劑盒、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST） 檢測(cè)試劑盒，BS-180型全自動(dòng)生化分析。離心機(jī)，水浴加熱池，AA63/UV1800型紫外可見分光光度。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型建立

SD 大鼠喂以高脂飼料（10 %豬油+ 2 %膽固醇+88 %標(biāo)準(zhǔn)飼料） 及飲水，連續(xù)喂食8周。包括空白對(duì)照組及黃澤湯處理組（設(shè)置 600、300、150 mg/ kg 黃澤湯分別為高、中、低劑量給藥組） 。 以灌胃方式給予藥物治療，每日 2 次，持續(xù) 4 周。對(duì)照組以等體積純凈水灌胃，模型組以 0.9 % NaCl 10 mg/kg 灌胃。每日 2 次，持續(xù)4周。

1.3.2 大鼠血清制備

實(shí)驗(yàn)給藥最后一天，全體大鼠連續(xù)禁止飲食12 h。稱量大鼠體重，以 1 %戊巴比妥鈉（40 mg/kg） 腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取新鮮血液 10 mL，4℃、3000 r/min 離心 1 min，取上清用于常規(guī)生化指標(biāo)測(cè)定。

1.3.3 血清生化指標(biāo)檢測(cè)

采集血清按照試劑盒說明書進(jìn)行含量測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用 SPSS 23. 0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)用 x±s 表示，單因素方差分析和 LSD 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較， 以 P < 0. 05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度下黃澤湯對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠ALT、AST指標(biāo)的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清 AST、ALT 水平和肝臟指數(shù)均顯著性升高（P < 0.01） ，與模型組比較，中、高劑量組與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05） ;AST、ALT 水平均顯著性降低（P < 0.05） ，結(jié)果見表1。

2.2 不同濃度下黃澤湯對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠TG、LDL、HDL指標(biāo)的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠 TG 和 LDL 水平均顯著性升高（P < 0.05） ，HDL 水平則顯著性降低（P < 0.05） 。與模型組比較，高劑量組對(duì)其改變特別顯著（P < 0.05） ，TG 和 LDL 均顯著性降低（P < 0.05） ，HDL 則顯著性升高（P < 0.05） 。結(jié)果見表2。

3 討論

黃芪多糖是豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根經(jīng)提取、濃縮、純化而成的水溶性雜多糖，淡黃色，粉末細(xì)膩，均勻無雜質(zhì)，具引濕性。黃芪多糖可作為免疫促進(jìn)劑或調(diào)節(jié)劑，同時(shí)具有抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗輻射、抗應(yīng)激、抗氧化等作用。澤瀉為澤瀉科植物澤瀉的干燥塊莖。澤瀉性味甘淡寒，歸腎、膀胱經(jīng)，可利濕清熱、化濁降脂[2]。澤瀉主要化學(xué)成分有三萜類化合物、倍半萜類化合物、二萜類化合物及生物堿黃酮大黃素淀粉蛋白質(zhì)氨基酸等。

NAFLD是指無過量酗酒史而出現(xiàn)以肝臟細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征，主要包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝炎相關(guān)性肝硬化。隨著社會(huì)生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改善，其發(fā)病率逐年升高且呈低齡化趨勢(shì)。中醫(yī)認(rèn)為病位在肝，病機(jī)特點(diǎn)以脾胃虛弱、肝郁氣滯、肝郁脾虛、腎精虧虛等為主，辨證以健脾化濕，疏肝健脾，化痰祛瘀等為治則[3]。

王斌[4]通過對(duì)應(yīng)用異功澤瀉湯治療的52例非酒精性脂肪性肝炎患者及水飛薊賓膠囊治療的48例患者進(jìn)行對(duì)照觀察，發(fā)現(xiàn)異功澤瀉湯在降低血脂、改善肝功能等方面均優(yōu)于水飛薊賓膠囊，澤瀉可抑制外源性TG、TC的吸收，影響內(nèi)源性TC代謝及抑制TG肝內(nèi)合成，從而改善肝臟的脂肪代謝。孫曉紅[5]通過對(duì)34例使用澤瀉飲合京三棱丸治療的非酒精性脂肪肝進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，澤瀉飲合京三棱丸能有效改善TC、TG的水平，治療脂肪肝臨床療效顯著。姜國(guó)賢等[6]報(bào)道了32例口服調(diào)肝降脂（青蒿、柴胡、山楂、茯苓、澤瀉、法半夏、白芍、肉豆蔻、韭菜汁等） 中藥治療非酒精性脂肪肝的臨床研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)澤瀉通過抑制外源性三酰甘油在肝內(nèi)的合成，影響與膽固醇代謝有關(guān)的酶及抑制肝內(nèi)三酰甘油合成等藥理數(shù)用而發(fā)揮抗脂肪肝效果。本文系統(tǒng)性地研究闡明了不同濃度梯度下黃澤湯對(duì)非酒精性脂肪肝的作用機(jī)制。但是本研究仍然存在不足，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證黃澤瀉對(duì)肝細(xì)胞脂肪蓄積的緩解作用及其機(jī)制，因?yàn)橹拘罘e是肝損傷的根本原因。

參考文獻(xiàn)

[1]牙程玉，毛德文，王挺帥，等.非酒精性脂肪性肝病中西醫(yī)研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2021，31（2）：5.

[2]王建平，傅旭春.澤瀉的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].浙江醫(yī)學(xué)，2012，34（14）：3.

[3]劉冬.非酒精性脂肪性肝病相關(guān)代謝紊亂遺傳易感性研究進(jìn)展[J]. 中華實(shí)用診斷與治療雜志，2016，30（11）：3.

[4]王斌，曹燕平，張紅旭，等.水飛薊賓治療非酒精性脂肪性肝炎臨床療效觀察[J].中國(guó)肝臟病雜志：電子版，2011，3（2）：4.

[5]孫曉紅，張旖晴，劉濤，等.四合湯加減治療非酒精性脂肪肝的療效及機(jī)制研究[J].世界中醫(yī)藥，2019（3）：5.

[6]姜國(guó)賢，喻國(guó)華，余傳友.調(diào)肝降脂法治療非酒精性脂肪肝32例[J].陜西中醫(yī)，2010（5）：3.