白癜風(fēng)患者外周血CD4+T細(xì)胞與性激素水平的關(guān)系

康樂，耿菁

寶雞市中心醫(yī)院皮膚科，陜西 寶雞 721000

白癜風(fēng)屬于后天獲得性皮膚病，主要以色素脫失斑為主要臨床表現(xiàn)，目前該病發(fā)病機制與病因仍不明確。有學(xué)者認(rèn)為，白癜風(fēng)患者通常伴有其他免疫性疾病，認(rèn)為白癜風(fēng)的發(fā)病與患者自身免疫功能有一定關(guān)系[1]。免疫性疾病與人體T細(xì)胞功能失衡有著一定關(guān)系，T細(xì)胞在人體中主要起到識別、傳遞及處理抗原的作用，讓人體各類細(xì)胞因子之間維持平衡，保持生理功能的正常運轉(zhuǎn)維持自身免疫功能。有研究指出，T細(xì)胞與白癜風(fēng)患者皮膚黑色素的破壞有著密切關(guān)系，且細(xì)胞免疫因素在白癜風(fēng)的發(fā)病中可能起到相關(guān)作用，主要表現(xiàn)為患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化，如比例失調(diào)等[2]。有研究指出，CD4+T在白癜風(fēng)疾病中扮演重要角色，患者發(fā)病后該細(xì)胞會發(fā)生明顯變化，而免疫性疾病患者自身性激素水平亦會因此顯著改變[3-4]。臨床有關(guān)CD4+T 及性激素與白癜風(fēng)的關(guān)系研究雖有，但關(guān)于兩者的相關(guān)性研究較少。本文旨在分析白癜風(fēng)患者外周血CD4+T 和性激素水平的變化及兩者間的相關(guān)性，以期為該病患者的診斷及治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析寶雞市中心醫(yī)院皮膚科2016 年10 月至2019 年7 月收治的62 例白癜風(fēng)患者(觀察組)的臨床資料。 納入標(biāo)準(zhǔn)：①資料完整；②年齡已滿18 歲；③三個月內(nèi)未系統(tǒng)服用過糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑與免疫調(diào)節(jié)劑。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病與其他免疫性疾病者；②心、肝、腎存在嚴(yán)重疾病或功能異常者；③患有精神抑郁類疾病者或長期服用此類藥物者。另選取60 例同期體檢正常人群作為對照組。觀察組中男性32例，女性30例；年齡22～68 歲，中位年齡35.8 歲；病程1～11 年，中位病程4.3 年。按照中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會皮膚性病專業(yè)委員會色素病學(xué)組修定的《白癜風(fēng)診療共識(2018版)》中標(biāo)準(zhǔn)[5]，將觀察組患者分為進(jìn)展期28例，穩(wěn)定期34例；尋常型白癜風(fēng)48例(局限性16例、肢端性14 例、散發(fā)性15例、泛發(fā)性3例)，節(jié)段型14例。對照組中男性30 例，女性30 例；年齡23～69 歲，中位年齡36.2 歲。兩組受檢者的性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 觀察指標(biāo) (1)比較觀察組和對照組受檢者的CD4+T水平與性激素水平；(2)比較觀察組不同性別、不同疾病時期與疾病類型患者的外周血CD4+T細(xì)胞和性激素水平；(3)分析CD4+T與性激素各項指標(biāo)的相關(guān)性。

1.3 檢測方法 (1)樣本采集方法：采集所有入選對象清晨空腹靜脈血3.0～4.0 mL 于采血管后混勻，共抽取2管。(2)CD4+T細(xì)胞檢測方法：向樣本中加入20 μL的CD4+T抗體，完成后再度加入50 μL的抗凝全血，蓋上管蓋充分振蕩混勻，室溫環(huán)境下避光進(jìn)行孵育15 min。完成以上步驟后，向管中加入450 μL的溶血素，再度進(jìn)行振蕩混勻，完成后室溫避光孵育15 min待檢。使用流式細(xì)胞儀(品牌：美國貝克曼庫爾特)與配套試劑盒檢測CD4+T細(xì)胞比例，操作時嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行。(3)性激素檢測方法：常溫環(huán)境下自然凝固后離心分離，將分離獲得的血清，放置于-20℃的環(huán)境中保存，采用美國BECKMANCOULTER 公司的Uni CelDx I800 Access 免疫分析系統(tǒng)與配套試劑盒，以堿性磷酸酶標(biāo)記抗體于抗原，磁性微粒子作為載體，Lumi-Phos 530 作為發(fā)光底物，使用化學(xué)發(fā)光法對促黃體生成激素(luteinizing hormone，LH)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)、睪酮(testosterone，T)、泌乳素(prolactin，PRL)、孕 酮(progesterone，Pg)、雌二醇(estradiol，E2)進(jìn)行檢測，操作時均按照說明書步驟進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0與GraphPad軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，計量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用獨立樣本t檢驗，CD4+T與性激素各項指標(biāo)相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，相關(guān)性散點圖采用GraphPad軟件繪制；以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者的CD4+T 水平比較 觀察組患者的CD4+T水平為(36.09±8.55)%，明顯低于對照組的(39.22±1.93)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.767，P＜0.05)。

2.2 觀察組不同疾病時期和不同疾病類型患者的CD4+T 水平比較 觀察組中進(jìn)展期患者的CD4+T水平為(27.68±2.77)%，明顯低于穩(wěn)定期的(43.02±4.41)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=15.985，P＜0.05)。尋常型白癜風(fēng)患者的CD4+T水平為(33.02±7.13)%，明顯低于節(jié)段型的(46.61±2.41)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.983，P＜0.05)。

2.3 兩組受檢者不同性別的性激素水平比較 觀察組與對照組男性的LH、FSH、T、PRL水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；但觀察組患者的Pg、E2水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。觀察組與對照組女性的LH、FSH、T、PRL水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；但觀察組患者的Pg、E2水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

2.4 觀察組不同疾病時期和不同疾病類型男性和女性患者的性激素水平比較 觀察組男性患者中，進(jìn)展期13例，穩(wěn)定期19例；尋常型23例，節(jié)段型9例。進(jìn)展期和穩(wěn)定期，以及尋常型和節(jié)段型患者的各項性激素水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。觀察組女性患者中進(jìn)展期15例，穩(wěn)定期15例；尋常型25例，節(jié)段型5例。進(jìn)展期和穩(wěn)定期患者的LH、FSH、T、PRL 水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但進(jìn)展期女性患者的Pg、E2 水平明顯高于穩(wěn)定期，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；尋常型和節(jié)段型女性患者的各項性激素水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表4。

表1 兩組受檢者男性性激素水平比較()

表1 兩組受檢者男性性激素水平比較()

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)32 30 LH(mIU/mL)4.42±1.03 4.09±0.86 1.365 0.177 FSH(mIU/mL)6.75±1.79 6.68±1.66 0.159 0.874 T(ng/mL)3.75±0.80 3.99±0.72 1.239 0.220 PRL(ng/mL)9.26±1.44 9.18±1.37 0.224 0.824 Pg(ng/mL)0.93±0.25 0.55±0.10 7.761 0.001 E2(pg/mL)45.67±7.09 33.82±6.73 6.740 0.001

表2 兩組受檢者女性性激素水平比較()

表2 兩組受檢者女性性激素水平比較()

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)32 30 LH(mIU/mL)15.93±3.68 15.88±3.70 0.052 0.958 FSH(mIU/mL)46.93±8.74 47.13±8.82 0.088 0.93 T(ng/mL)0.40±0.09 0.43±0.10 1.221 0.227 PRL(ng/mL)10.22±3.05 10.15±2.82 0.092 0.927 Pg(ng/mL)10.28±1.82 7.02±1.05 8.498 0.001 E2(pg/mL)88.26±15.71 38.23±5.20 16.559 0.001

表3 觀察組不同疾病時期和不同疾病類型男性患者的性激素水平比較()

表3 觀察組不同疾病時期和不同疾病類型男性患者的性激素水平比較()

組別進(jìn)展期穩(wěn)定期t值P值尋常型節(jié)段型t值P值例數(shù)13 19 23 9 LH(mIU/mL)4.47±1.04 4.38±1.05 0.226 0.823 4.46±1.05 4.30±1.04 0.403 0.690 FSH(mIU/mL)6.67±1.79 6.81±1.83 0.208 0.837 6.67±1.81 6.96±1.83 0.401 0.691 T(ng/mL)3.73±0.79 3.76±0.83 0.111 0.912 3.78±0.80 3.67±0.83 0.364 0.718 PRL(ng/mL)9.32±1.43 9.22±1.48 0.204 0.840 9.22±1.44 9.67±1.57 0.260 0.797 Pg(ng/mL)0.92±0.56 0.94±0.25 0.296 0.769 0.94±0.25 0.90±0.26 0.442 0.662 E2(pg/mL)45.29±7.11 45.93±7.26 0.250 0.805 45.88±7.05 45.12±7.59 0.269 0.790

2.5 CD4+T 與性激素各項指標(biāo)的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CD4+T 與LH、FSH、T呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，與PRL、Pg、E2 呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，見圖1～圖6。

表4 觀察組不同疾病時期和不同疾病類型女性患者的性激素水平比較

表4 觀察組不同疾病時期和不同疾病類型女性患者的性激素水平比較

組別進(jìn)展期穩(wěn)定期t值P值尋常型節(jié)段型t值P值例數(shù)15 15 25 5 LH(mIU/mL)15.03±2.42 13.23±2.75 1.899 0.068 14.05±2.60 14.52±3.50 0.348 0.730 FSH(mIU/mL)46.62±3.14 42.95±6.32 2.013 0.054 45.42±4.27 41.64±8.68 1.501 0.144 T(ng/mL)0.41±0.08 0.39±0.96 0.413 0.683 0.40±0.09 0.40±0.10 0.000 1.000 PRL(ng/mL)11.94±2.51 10.10±2.54 1.997 0.056 10.66±2.74 12.84±1.03 1.740 0.093 Pg(ng/mL)11.23±1.62 9.33±1.51 3.341 0.002 10.26±1.69 10.36±2.61 0.106 0.916 E2(pg/mL)101.04±8.30 75.48±9.62 7.791 0.001 87.92±14.70 89.96±2.11 0.261 0.796

圖1 CD4+T與LH相關(guān)性散點圖

圖2 CD4+T與FSH相關(guān)性散點圖

圖3 CD4+T與T相關(guān)性散點圖

圖4 CD4+T與PRL相關(guān)性散點圖

圖5 CD4+T與Pg相關(guān)性散點圖

圖6 CD4+T與E2相關(guān)性散點圖

3 討論

白癜風(fēng)患者常見表現(xiàn)為后天色素脫失，受累于黏膜與毛發(fā)。根據(jù)統(tǒng)計，在全球范圍內(nèi)該病發(fā)病率為1%～2%，在我國發(fā)病率為0.1%～2.7%，患者通常在兒童或青少年時期發(fā)病[6-7]。白癜風(fēng)疾病雖不會對人體健康造成明顯影響，但患病后皮膚外觀會發(fā)生改變，對人的心理狀態(tài)造成影響，甚至影響患者正常的社會交往，所以在患病后多數(shù)患者希望疾病的發(fā)展得到減緩，甚至于將該病治愈[8-9]。白癜風(fēng)疾病病因至今仍不明確，無法做到針對性治療，臨床治愈率較低。目前關(guān)于白癜風(fēng)發(fā)病機制的研究討論較多，主要集中于人體免疫、黑色素細(xì)胞破壞、微量元素、遺傳、神經(jīng)化學(xué)因子等方面，但確切機制依舊不明。而近幾年有學(xué)者提出，性激素作為神經(jīng)內(nèi)分泌激素的一種，不僅對機體免疫系統(tǒng)可造成影響與免疫性疾病也有著一定關(guān)系[10]。CD4+T 細(xì)胞作為人體免疫功能的代表性指標(biāo)，臨床中有關(guān)其與白癜風(fēng)的研究較多，可臨床中關(guān)于白癜風(fēng)患者CD4+T水平與性激素水平相關(guān)性研究較少，對此進(jìn)行研究可為臨床中該病患者的治療與發(fā)病機制的探討提供相應(yīng)幫助。

CD4+T 細(xì)胞主要以維持機體正常免疫功能為主，當(dāng)T 淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量與功能發(fā)生異常時，人體就可出現(xiàn)免疫功能紊亂及一系列病理變化[11]。目前國內(nèi)有關(guān)于白癜風(fēng)患者外周血CD4+T 細(xì)胞研究結(jié)果偏少。但國外研究分析顯示：白癜風(fēng)患者人體外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)顯著低于正常人[12]。CD4+T是一類不均一的細(xì)胞體，具有促進(jìn)T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞增殖與分化的雙重作用。研究指出，白癜風(fēng)患者外周血中CD4+T 可出現(xiàn)明顯減少趨勢[13]。本研究中白癜風(fēng)患者CD4+T淋巴細(xì)胞明顯降低，表明白癜風(fēng)患者細(xì)胞免疫功能為抑制狀態(tài)，這主要是白癜風(fēng)疾病導(dǎo)致體內(nèi)T 淋巴細(xì)胞激活，進(jìn)而導(dǎo)致具有抗原與接受信號傳導(dǎo)能力的CD4+T 細(xì)胞被刺激分泌降低有關(guān)，這與CZARNOWICKI 等[12]研究結(jié)果相一致。本研究中觀察組性激素Pg、E2 指標(biāo)水平與健康人群存在顯著差異；男性白癜風(fēng)患者與正常對照組男性對象，進(jìn)展期與穩(wěn)定期女性性激素Pg、E2 指標(biāo)存在明顯差異。究其原因：性激素在人體中以游離狀態(tài)被動擴(kuò)散進(jìn)入人體細(xì)胞中，在與特異性受體結(jié)合后，導(dǎo)致激素-受體復(fù)合物形成引起受體構(gòu)象改變。Pg、E2 不同性別者會存在明顯的不同，國外曾有報道白癜風(fēng)患者采用性激素藥物治療后有效的結(jié)論[14-15]。但本研究白癜風(fēng)患者男性、女性年齡分布幅度較大，且該研究為回顧性分析并未考慮患者是否患有其他會影響性激素水平的相關(guān)疾病，如生殖系統(tǒng)疾病、婦科疾病。所以該結(jié)果可能存在一定偏倚臨床中還需后續(xù)進(jìn)一步分析研究。本研究結(jié)果還顯示：CD4+T 與LH、FSH、T 呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，表明CD4+T 的升高會導(dǎo)致LH、FSH、T 的升高；反之則下降；與PRL、Pg、E2 呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明PRL、Pg、E2 會隨著CD4+T 的增高而下降，下降而增高。同時也表明CD4+T 與性激素之間可相互影響，作用于人體免疫與激素平衡功能。但CD4+T與性激素之間是何種相互機制下影響，且是否為導(dǎo)致白癜風(fēng)患者發(fā)病的因素臨床中并無研究，后續(xù)需進(jìn)一步分析研究。

綜上所述，白癜風(fēng)患者細(xì)胞免疫狀況存在明顯異常，且不同疾病程度患者免疫狀態(tài)亦不相同。白癜風(fēng)患者性激素指標(biāo)Pg、E2 之間存在明顯差異，其中不同疾病程度女性Pg、E2 水平存在明顯差異，CD4+T 與性激素各項指標(biāo)間存在顯著相關(guān)關(guān)系，但其是否相互影響以致白癜風(fēng)患者發(fā)病還需臨床進(jìn)一步研究證實。