云南大理白族兒童冬季腹瀉病原微生物檢測與分析

忽欣怡，李雲，李學堯，傅思武，聶蕾，劉瑋瑋

（西北民族大學醫學部，甘肅 蘭州 730030）

0 引言

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019 年12 月至2020 年2 月大理地區三甲醫院（主要為大理大學第一附屬醫院）內6 歲以下腹瀉患兒門診糞便標本297 份，其中男性170份，女性127 份；0 ≤x＜1 歲263 份（88.55%），1≤x＜3歲24份（8.08%），3≤x≤6 歲10份（3.37%）。297 份標本中白族兒童有112 份，白族男性63 份，白族女性49 份；0 ≤x＜1 歲104 份（92.86%），1 ≤x＜3 歲6 份（5.36%），3 ≤x ≤6 歲2 份（1.79%）。納入標準：年齡≤6 歲；24h 排便≥3 次，且大便性狀改變（呈稀便、水樣便等）[2]，所有患兒監護人均知情同意并簽署同意書。

1.2 試劑儀器

輪狀病毒/腺病毒抗原檢測試劑盒（乳膠法）（杭州艾博生物醫藥有限公司），血瓊脂平板、麥康凱平板、念珠菌平板（鄭州安圖生物工程股份有限公司），革蘭氏陽性、陰性細菌藥敏卡（法國生物梅里埃公司），牛腦心浸液培養基（天和生物），全自動微生物鑒定儀（型號：VITEK 2 Compact，法國生物梅里埃公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 鏡檢篩查寄生蟲感染。

1.3.2 細菌培養與鑒定

標本于牛腦心浸液培養基內增菌，24h 后分別接種于血平板和麥康凱平板，37℃培養24h 后選擇疑似致病菌的菌落進一步分純（如：血平板有疑似念珠菌的灰白色隆起菌落，可進行格蘭染色確認后接種于念珠菌顯色平板上）。相關操作參照《全國臨床檢驗操作規程》[3]進行。已分離純化的病原菌用全自動微生物鑒定系統VITEK 2 Compact 進行鑒定。

1.3.3 病毒學檢測

輪狀病毒和腸道腺病毒檢測采用金標及乳膠免疫層析法，具體操作步驟嚴格按說明書進行。

1.4 統計學分析

采用SPSS 19.0 軟件，計數資料用百分比（%）表示，檢出率的組間比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大理地區三甲醫院6 歲以下腹瀉患兒檢測情況

297 份標本經病原檢測陽性為107 份，檢出率為36.03%。其中輪狀病毒（HRV）檢出94 例，檢出率最高，達31.65%（94/297），見表1。3 個年齡組中檢出率差異無統計學意義（P＞0.05），不同性別兒童的檢出率比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

綜合以上實驗的結果，設計出生長準有序氮化鎵納米線的兩步生長法：使用2nm/2nm鎳-金雙層薄膜作為催化劑，第一步在850℃生長10s得到有序的但長度較短的納米線，作為有序納米線“幼苗”；第二步將溫度降低到750℃生長200s，得到表面光滑，方向性好的有序納米線。

2.2 白族兒童檢測情況

白族兒童112 份腹瀉標本中經病原檢測陽性為37 份，檢出率為33.04%。其中輪狀病毒（RV）檢出31 例，檢出率最高，達27.68%（31/112），見表3。3 個年齡組中檢出率差異有統計學意義（P＜0.05），不同性別兒童的檢出率比較差異無統計學意義（P＞0.05）見表4。

表1 297 例腹瀉患兒病原微生物檢出率及構成情況（n,%）

表2 297 例腹瀉患兒病原微生物年齡、性別分布（n,%）

表3 112 例白族腹瀉患兒病原微生物檢出率及構成情況（n,%）

表4 112 例白族腹瀉患兒病原微生物年齡、性別分布（n,%）

2.3 白族和其他民族患兒檢測情況

107 例病原陽性標本病原微生物民族分布情況見表5。

表5 107 例病原陽性標本病原微生物民族分布[n(%)]

3 討論

3.1 研究意義

腹瀉病（Diarrhea）是由多種病因引起的以大便次數增多（每天＞3 次）和大便性狀改變（稀便或水樣大便）為主要特征的消化道綜合征。全球每年約有17 億例兒童腹瀉病的發生，每年約有52.5 萬名5歲以下兒童死于腹瀉病，是5 歲以下兒童死亡的第二大原因[4]。2019 年中國營養學會指出中國0～5 歲兒童過去2 周內腹瀉發生率為7.5%，處于較高水平，且受年齡、城鄉、母親教育程度、家庭人均收入等多因素的影響[5]。加之白族的飲食結構與生活習慣與其他地區人群相比有所不同，且經濟相對落后、疾病預防意識淡薄、高原山區氣候多變等，兒童腹瀉發病率高。且目前尚無此方面的研究，臨床缺乏基礎研究數據支撐。因此開展云南大理白族兒童冬季腹瀉病原學監測工作意義重大，可為該地區兒童冬季腹瀉的防控提供數據參考。

3.2 結果分析

3.2.1 大理地區三甲醫院6 歲以下腹瀉患兒檢測情況

本研究顯示，大理地區297 份兒童腹瀉標本病原檢出率為36.03%（107/297），其中病毒占94.39%（101/107），細菌占1.87%（2/107），真菌占2.80%（3/107），輪狀病毒合并豬帶絳蟲感染占0.93%（1/107）。主要集中分布于0～1 歲嬰兒，占85.05%（91/107）。

3.2.2 白族兒童檢測情況

112 份白族兒童腹瀉標本病原檢出率為33.04%，病毒占89.19%（33/37），細菌占2.70%（1/37）,真菌占5.41%（2/37），輪狀病毒合并豬帶絳蟲感染占2.70%（1/37）。說明2019 年12 月至2020 年2 月云南大理白族兒童冬季腹瀉病原微生物以病毒為主（尤其是輪狀病毒HRV，陽性占比83.78%），這與本研究中所有6 歲以下腹瀉兒童病原檢測情況一致，也與上海等地區研究結果一致[6]。據相關統計，全球每年約有45.34 萬5 歲以下兒童死于輪狀病毒感染所致的腹瀉，死亡率約為5.00%[7]。這可能與輪狀病毒主要通過空氣和接觸被污染物進行傳播、傳播速度快、有2～3d 潛伏期，且侵犯人體腸道后易誘發腸道壞死，造成嚴重的水、電解質、酸堿平衡紊亂有關[8]。從年齡分布來看，陽性占比最高為0 ≤x＜1 歲組（83.78%），且3 歲以下患兒陽性占比（94.59%）明顯高于3 歲以上患兒，這可能與3歲以下嬰幼兒從母體獲取的IgG 抗體逐漸消耗殆盡，而特異性IgM 抗體產生不足，免疫功能尚未發育成熟有關。這與國內報道有所不同，朱佩強[9]研究顯示1 ≤x＜3 歲年齡組檢出率最高，造成不同的原因除了地區差異外還可能和本研究樣本量較少致使數據不夠具有代表性有關。而從性別分布來看，白族兒童男女檢出率差異無統計學意義（P=0.939＞0.05），提示白族兒童腹瀉檢出率對于不同性別無差異。

3.2.3 各民族分布情況

從表5 可知，107 例陽性病例中，漢族和白族兒童最多，且所有民族病原陽性占比最高均為輪狀病毒。此外，檢出的所有福氏志賀菌、豬帶絳蟲感染以及大部分的白色念珠菌感染都來自白族兒童，提示可能與白族人群喜食生皮（生豬皮）等飲食習慣有一定關系，值得相關疾病防治時引起注意。

4 結論

云南大理白族兒童冬季腹瀉病原微生物以輪狀病毒為主，此外白色念珠菌、福氏志賀菌、豬帶絳蟲感染也占一定比例，提示可能與飲食習慣等社會因素有關[10-12]。其檢出率與性別無關，但與年齡有關，3 歲以下兒童更容易發生感染性腹瀉，這與嬰幼兒自身免疫功能未完善有關[13-15]。因此，臨床治療應在了解微生物感染類型及分布規律基礎上實行針對性防治，同時家屬和醫護人員也應該重視飲食衛生和習慣在腹瀉防治中的作用。