正交試驗法優選參葛顆粒的水提工藝

單 鑫，徐 丹，涂清波，陳 璟

（南京中醫藥大學翰林學院，江蘇 泰州 225300）

參葛顆粒由葛根、黨參、五味子、枸杞子、甘草5味藥組成，諸藥合用，具有養陰清熱、化瘀通絡的功效，對絡脈不和、酒毒傷中所引起的酒精性肝損傷有較好的養護作用[1-2]。

水提藥物甘草中的主要有效成分是甘草苷、甘草酸銨；枸杞多糖是枸杞子中的有效成分，同時，醇提藥渣中也含有多糖類成分[3-4]。本研究選取甘草酸銨、甘草苷及水提浸出物得率作為考察指標，采用L9（34）正交試驗法優選參葛顆粒的水提工藝，以擴大其適用范圍。

1 試驗材料

1.1 儀器

WATERS Alliance-017（2998PDA，美國Waters公司），HH-420型水浴鍋（上海力辰邦西公司），FA1104N電子天平（上海天平儀器廠），MS-105DU型電子天平（Mettler Toledo），Milli-Q超純水系統（Millipore），KQ-500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

甘草、枸杞子（安徽豐原銅陵中藥飲片有限公司），甘草苷、甘草酸銨（中國食品藥品檢定研究院），甲醇、乙腈（美國Merk公司），超純水（試驗室自制），其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 水提工藝設計

按照L9（34）正交表設計水提工藝，以加水量（A）、提取次數（B）、提取時間（C）、浸泡時間（D）為考察因素，進行2味飲片的回流提取工藝優選，選取甘草苷、甘草酸銨、水溶性浸出物為指標進行測定，各因素水平如表1所示。

表1 水提工藝因素水平

2.2 樣品處理方法

稱取枸杞子10 g、甘草10 g，加入相應配方量按最佳醇提工藝提取后的藥渣，共9份，分別以相應的因素水平進行回流提取，水提液過濾，濃縮成浸膏，備用。

2.3 甘草苷、甘草酸銨含量測定

色譜條件為色譜柱：Tnature C18柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），流動相為流動相A（乙腈）、流動相B（0.05%磷酸水），梯度洗脫，如表2所示。流速：1.0 mL/min，檢測波長：250 nm，柱溫：30 ℃，進樣量：10 μL。

表2 流動相梯度洗脫程序

稱取樣品浸膏適量（相當于甘草飲片0.2 g），精密稱定，置于250 mL錐形瓶中，精密量取70%乙醇100 mL加入，稱重，回流30 min，冷卻，稱重，用70%乙醇補足失重，搖勻，過濾，收取濾液，即得供試品溶液。

2.4 水提浸出物得率測定

取各水提正交樣品浸膏（相當于生藥飲片2 g），精密稱定，置于干燥恒重的蒸發皿中，置于105 ℃烘箱中，干燥3 h取出，置于干燥器中，冷卻30 min，放涼，精密稱重，計算水提浸出物得率。

2.5 正交試驗結果與分析

對于9份樣品中測得的甘草苷、甘草酸銨、水提浸出物得率，采用綜合評分法評價，綜合評分=0.5（Amax－Ai）+0.3（Bmax－Bi）+0.2（Cmax－Ci）+100。

Ai為甘草苷質量，Amax為各組中甘草苷質量最大值；Bi為甘草酸銨質量，Bmax為各組中甘草酸銨質量最大值；Ci為浸出物得率，Cmax為各組中浸出物得率最大值，結果如表3～4所示。

表3 L9（34）正交試驗結果

表4 方差分析結果

方差分析結果表明，試驗各因素對所選指標的影響依次為：C（提取次數）＞B（提取時間）＞A（加水量）＞D（浸泡時間）；確定參葛顆粒水提最佳工藝為：A2B2C2D2，加入飲片總量的12倍水，浸泡0.5 h，提取2次，每次1.0 h。

2.6 最佳水提工藝驗證

稱取配方量10倍的枸杞子、甘草飲片3份，等比例加入醇提藥渣，依照上述優選的水提工藝進行驗證，取樣測定浸膏中甘草苷、甘草酸銨及浸出物得率。每份樣品中甘草苷質量分別為30.38、31.24、30.44 mg，甘草酸銨質量分別為108.71、110.22、110.95 mg，浸出物得率分別為22.32%、22.98%、23.48%。結果表明，優選工藝穩定可行。

3 討論

3.1 提取工藝選擇

參葛顆粒由5味藥物組成，以水溶性成分為主，如枸杞子的主要化學成分為枸杞多糖、甜菜堿、類胡蘿卜素、維生素C等，甘草的主要有效成分為三萜皂苷類、黃酮類、香豆素類、生物堿、有機酸、多糖等，本試驗選擇回流提取法[5-7]。

3.2 評價指標選擇

因醇提藥渣中多糖含量較大，對計算枸杞多糖轉移率的干擾較大，本試驗選取的甘草苷、甘草酸銨是甘草的主要有效成分，與《中國藥典》2020年版指標一致，從原料到制劑全面控制制劑質量，有助于提高臨床用藥的安全性及有效性[8-9]。