中藥-益生菌制劑對海蘭褐蛋雞免疫機能的影響

王 聰，靳 昌，郭小會

(1.甘肅畜牧工程職業技術學院，甘肅 武威 733006；2.甘肅省武威市涼州區四壩鎮人民政府)

近年來，由于抗生素作為飼料添加劑的濫用導致了藥物殘留、耐藥性等問題，尋找抗生素替代品已經成為研究的熱點。益生菌可以直接飼喂動物并通過調節動物腸道微生態平衡達到預防疾病、促進動物生長和提高飼料利用率的活性微生物或其培養物，又稱微生態制劑或飼用微生物添加劑。中草藥飼料添加劑是以中草藥及植物提取成分的活性物質為原料加工調制而成，其具有天然、毒副作用小、不易產生耐藥性和種類繁多而被廣泛用于動物生產中。由于中草藥添加劑和微生態制劑均具有綠色無污染、無殘留等特點，是替代抗生素的首選添加劑。因此，在畜牧生產中被廣泛應用。研究結果表明，日糧中添加中藥-益生菌在一定程度上可提高蛋雞生產性能和蛋品質，并且能提高機體免疫機能。但中藥和益生菌的配伍種類較多，具體哪類中藥和益生菌配伍對蛋雞方面的研究較少，且最適宜的添加量還在研究中。因此，本文以參苓白術散加味(人參、茯苓、白術、山藥、薏苡仁、砂仁、桔梗、甘草)為組方中藥，枯草芽孢桿菌作為菌種進行配比，研究其對海蘭褐蛋雞免疫機能的影響，并找到適宜的比例，以期為中藥-益生菌制劑的研制及其在養雞生產中的推廣應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 藥物來源 中藥購自甘肅傲農飼料科技有限公司；益生菌購自武威市牛滿加藥業有限責任公司。

1.1.2 主要儀器 EX-TE-10型多功能中藥提取罐；BMR系列中式發酵罐。

1.2 試驗方法

1.2.1 復方中藥制劑的制備 采用中草藥煮法。取黨參、白術、山藥各15 g，茯苓10 g，薏苡仁9 g，砂仁6 g，桔梗5 g，甘草6 g，清洗、除雜，加4 倍量水浸泡 2 h，煎煮 1 h，用雙層紗布過濾，藥渣再加 2 倍量水煎煮 30 min，再過濾，去除藥渣，合并 2 次藥液，用文火濃縮至生藥含量為 1 g/mL，高壓滅菌，4 ℃保存備用。

1.2.2 復方中藥制劑的制備 枯草芽孢桿菌作為菌種。

1.2.3 中藥-益生菌制劑的制備 將上述復方中藥與益生菌制劑按照 1∶1 混合即得中藥-益生菌制劑。

1.3 試驗設計

選擇185日齡商品代海蘭褐蛋雞800羽(甘肅華寶農牧科技有限公司種雞場)，隨機分為4組，每組2個重復，每個重復 100 只，A 組為對照組，僅飼喂玉米-豆粕型基礎日糧；B組為復方中藥組，在飼喂基礎日糧的基礎上添加 0.5%復方中藥；C 組為益生菌制劑組，在飼喂基礎日糧的基礎上添加0.3%益生菌制劑；D 組為中藥-益生菌制劑組，在飼喂基礎日糧的基礎上添加 0.3%中藥-益生菌復合制劑。預試期14 d，正試期35 d。

1.4 試驗日糧與飼養管理

試驗采用玉米-豆粕型基礎日糧，其日糧原料組成及營養水平見表1。試驗雞在密閉式雞舍內三層階梯式籠養，每3只雞1籠，自由采食、飲水，每日喂料3次，光照16 h，溫度18～23℃，其他管理措施按雞場常規管理進行。各處理統一飼喂基礎日糧，預試期結束時統計各組生產性能，經分析無顯著差異開始正式試驗。

表1 基礎日糧組成及營養水平(風干基礎) %

1.5 測定指標和方法

1.5.1 血清免疫球蛋白的測定 預試期和正試期結束后每個重復分別選擇平均體重相近的健康海蘭褐蛋雞2只，翅下靜脈采血5 mL，室溫靜止30 min后離心(3 500 r/min，10 min)制備血漿，分裝離心管中，—20℃保存。用ELISA試劑盒測定血清中IgA、IgG和IgM(試劑盒購于北京方程生物有限公司)。

1.5.2 免疫器官指數的測定 試驗期結束，每重復取2只體重相近的蛋雞頸部放血屠宰后剖取胸腺、脾臟和法氏囊，分別稱重，并計算器官絕對重量和指數。

胸腺指數=胸腺濕重/體重×100

脾臟指數=脾臟濕重/體重×100

法氏囊指數=法氏囊濕重/體重×100

1.6 統計分析

試驗數據采用 Microsoft Excel 軟件整理，SPSS18.0統計軟件進行單因素方差分析，并進行LSD 法多重比較，試驗數據以(平均值±標準差)表示。

2 結果與分析

2.1 不同處理組對蛋雞血清免疫球蛋白的影響

由表2可見，D組的IgA和IgG含量顯著高于A、B、C組(P<0.01)，B和C組IgA含量顯著高于A組(P<0.05)，但B和C組間差異不顯著(P>0.05)；C組IgG含量顯著高于A和B組(P<0.05)，但A和B組間差異不顯著(P>0.05)；B、C和D組IgM含量顯著高于A組(P<0.05)，但B、C和D組間差異不顯著(P>0.05)。由此可知，D組對海蘭褐蛋雞血清免疫球蛋白含量均有所提高，可提高機體免疫功能。

表2 中藥-益生菌制劑對海蘭褐蛋雞血清免疫球蛋白的影響 g/L

2.2 不同處理組對蛋雞免疫器官重量和免疫指數的影響

由表3可知，D組脾臟重顯著高于A、B和C組(P<0.05)，且A、B和C組間差異不顯著(P>0.05)；D組法氏囊重和胸腺重極顯著高于A、B和C組(P<0.01)。D組脾臟指數顯著高于其他三組(P<0.05)，法氏囊指數和胸腺指數極顯著高于其他三組(P<0.01)。由此可知，D組可在一定程度上提高蛋雞的免疫機能。

表3 中藥-益生菌制劑對海蘭褐蛋雞免疫器官重量和免疫器官指數的影響

3 結果與討論

3.1 中藥-益生菌制劑對蛋雞血清免疫球蛋白的影響

中草藥和益生菌添加劑均屬于一種綠色新型飼料添加劑，可替代抗生素使用，能提高動物的生產性能，增強機體免疫力，并且能減少動物的應激反應。師寧寧等用中藥散劑與枯草芽孢桿菌合生元飼喂蛋雞，可具有改善蛋雞生產性能，提高蛋雞蛋品質的作用；中草藥添加劑還可減少蛋雞和肉雞的熱應激，提高經濟效益的作用。血清免疫球蛋白是反映動物體液免疫功能的指標。本研究表明，與對照組相比，試驗組的IgA、IgG和IgM含量均在一定程度上有所提高，但復合中藥-益生菌組的免疫球蛋白指標含量均比其他組高，這說明復合中藥-益生菌能顯著提高蛋雞的體液免疫功能。范秋麗等人研究結果表明，添加枯草芽孢桿菌組的IgA、IgG和IgM含量均高于其他各組，可替代抗生素改善腸道健康，同時可提高機體的免疫機能；郭軍蕊等在蛋雞日糧中添加不同濃度枯草芽孢桿菌，結果表明添加枯草芽孢桿菌組的IgA、IgG和IgM含量顯著升高(P<0.05)。這與本試驗益生菌組的IgA、IgG和IgM含量均比對照組高的結果一致。黨參、白術、山藥、茯苓、薏苡仁、砂仁、桔梗和甘草均具有健脾益肺功能。劉海峰將黃芪、黨參、當歸等飼喂肉雞，結果表明復方中藥制劑可提高肉雞的免疫性能并能減少應激；同時中藥制劑也能提高海蘭褐蛋雞的免疫機能。中藥和益生菌均能提高蛋雞的生產性能和免疫機能，本試驗中枯草芽孢桿菌調節腸道菌群，促進消化，與中草藥可協同共同激活免疫細胞，增強機體免疫力。據報道，白術多糖和枯草芽孢桿菌具有協同作用，可提高對育成期蛋雞的血清免疫指標，故與本試驗中草藥-益生菌組效果最好一致。目前對于復合中藥-益生菌的種類方面研究報道較少，還需進一步研究，從而找到最適配方。

3.2 中藥-益生菌制劑對蛋雞免疫器官重量和免疫器官指數的影響

胸腺、法氏囊和脾臟是動物的免疫器官。免疫器官的重量在一定程度上可以反映免疫器官內淋巴細胞的數量，從而間接了解體內淋巴細胞總體水平對細胞免疫和體液免疫的促進作用。免疫器官的重量越大，機體免疫機能越高，重量減小，則機體的免疫狀況越差。免疫器官指數可以反映免疫器官的發育和免疫細胞的功能狀況，間接反映了機體免疫水平。本試驗研究結果表明，3個試驗組的免疫器官重量和免疫器官指數均比對照組高，這說明無論是中草藥組還是益生菌組都可以提高機體的免疫水平，且中草藥-益生菌組聯合效果更好。枯草芽孢桿菌是一種無毒、無殘留、無耐藥性的綠色新型添加劑，具有增強動物機體免疫力、抵抗疾病，同時可改善動物腸道健康等作用。研究結果表明，與對照組相比，日糧中添加枯草芽孢桿菌組可提高機體免疫器官指數(P<0.01)。中藥具有毒副作用小、殘留量低、來源廣泛、價格低廉等優點，現被用來替代抗生素而廣泛應用，可防治疾病，增加機體抵抗力。陳雁南等研究結果表明，添加不同水平的中草藥對早期免疫器官的發育有促進作用，脾臟重及其指數、法氏囊重及其指數顯著提高(P<0.05)；本試驗所選用的中草藥黨參可增強機體免疫力。王鐵崗等研究潞黨參煎劑和左旋咪唑對蛋雞禽流感抗體效價和免疫器官指數的影響，結果表明，潞黨參可提高免疫器官指數，促進免疫器官的發育。不論是枯草芽孢桿菌還是中草藥都具有提高機體免疫力之功效，故兩者協同效果更好。

4 結論

本試驗復合中草藥-益生菌組可提高機體的IgA、IgG和IgM含量，并可促進免疫器官發育，兩者協同效果比單獨使用效果好。