高效液相色譜法考察鹽酸達克羅寧在常用溶劑中的穩定性

龔 亞，李 敏，樊 莉，曹 健

鹽酸達克羅寧為起效迅速、作用久、不良反應小、安全系數高的局部麻醉藥[1-3]，臨床主要用于黏膜的表面麻醉、皮膚鎮痛和止癢等。現行版軍隊制劑和醫院制劑規范均收載了鹽酸達克羅寧乳膏[4-5]，有研究表明，鹽酸達克羅寧乳膏在配制過程中鹽酸達克羅寧與輔料存在絡合情況[6-7]，但未有研究報道其在常用溶劑中的穩定性。通過檢索近20年相關文獻，涉及鹽酸達克羅寧含量測定的39篇文獻中，常用5種溶劑制備試驗溶液，以甲醇、乙腈、乙醇、水、磷酸鹽緩沖液為溶劑的文獻數量分別為10、1、6、11和11篇。預實驗中發現鹽酸達克羅寧在甲醇中穩定性差，文獻中仍存在以甲醇為溶劑的情況，且缺乏相關的系統性探究。本實驗選取甲醇、乙腈、無水乙醇、水、不同pH值的0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液、鹽酸達克羅寧乳膏測定中的流動相為反應體系，測定鹽酸達克羅寧的含量變化情況，考察其在這6類常用溶劑中的穩定性，為質量標準研究提供參考[8-9]。鹽酸達克羅寧化學結構式，見圖1。

圖1 鹽酸達克羅寧化學結構式

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 安捷倫1260型HPLC儀（檢測器為G7114A VWD，操作工作站為Chemstation，美國安捷倫）；PHS-3C型精密pH計（上海雷磁）；精密電子天平（EX225DZH OHAUS美國，ME235S Sartorius德國）。

對照品鹽酸達克羅寧（批號：100423-201102，供HPLC法測定，按C18H27NO2·HCl計，含量99.8%）購自中檢院。原料藥鹽酸達克羅寧（批號16110501）購自揚子江藥業。甲醇、乙腈均為色譜級，購自霍尼韋爾；磷酸二氫鉀、無水乙醇、磷酸均為分析純，購自重慶川東化工；水為純化水。

1.2 HPLC測定方法[4]采用菲羅門luna色譜柱（填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，序列號為00G-4252-E0，250 mm×4.6 mm，5μm），測定波長選擇282 nm，以0.02 mol/L KH2PO4溶液（H3PO4調pH至3.0）為A相、乙腈為B相，以A∶B=55∶45(V/V)分析測定，流速設定為1.0 ml/min，取10μl進樣。

1.3 實驗溶液的制備 分別以流動相、甲醇、乙腈、無水乙醇、不同pH值的0.02 mol/L KH2PO4溶液（pH1.0～6.0）、純化水這6類溶劑制備鹽酸達克羅寧試驗溶液，使各溶液每1 ml中約含0.2 mg的鹽酸達克羅寧。各實驗用的儲存溶液均密塞，以封口膜封口后立即冷藏（2～10℃）保存，每次分析前均需放至室溫。

1.4 系統適用性考察試驗 取“1.3實驗溶液的制備” 項下流動相溶解的鹽酸達克羅寧溶液，按“1.2 HPLC測定方法”項，取10μl進樣，記錄鹽酸達克羅寧圖譜。

1.5 不同溶劑中鹽酸達克羅寧穩定性考察 以“1.3實驗溶液的制備”項下方法制備6類常用溶劑的鹽酸達克羅寧原料藥溶液，按“1.2 HPLC測定方法”項分別于0、2、4、6、8、10、12 h時連續進樣，分別計算平均峰面積，考察鹽酸達克羅寧峰面積變化情況。要求與零點比較，峰面積變化不＞2%（峰面積百分比=測試點峰面積/零點峰面積×100%），否則說明在該溶劑中不穩定。

1.6 鹽酸達克羅寧對照品在流動相中的長期穩定性考察[8-12]取“1.3實驗溶液的制備”項下流動相溶解的鹽酸達克羅寧對照品溶液，按“1.2 HPLC測定方法”項在保存的0、1、4、7、10、14、21、28、35 d時進樣，同時記錄當天新鮮配制的對照品溶液峰面積值，以當天新鮮配制的對照品溶液計算對照品儲存溶液的標示量?；谙率龉竭M行計算：

式中，AN和CN表示測定當天新鮮配制對照品溶液的峰面積和濃度；AT和CT表示測定當天對照品儲存溶液的峰面積和濃度。要求對照品溶液外觀性狀無異?，F象，且與新鮮配制的一致；色譜圖中均未出現雜質峰；每個分析測試點，對照品儲存溶液的標示量與0 d的差異≤2.0%。

2 結果

2.1 系統適用性考察試驗結果 鹽酸達克羅寧圖譜見圖2，鹽酸達克羅寧出峰不存在干擾，理論塔板數符合要求，陰性樣品溶液無相同色譜峰，連續進樣5次，R SD≤2%，符合要求。

圖2 系統適用性HPLC圖

2.2 不同溶劑中鹽酸達克羅寧穩定性考察結果室溫下，鹽酸達克羅寧在不同溶劑中的含量隨時間變化情況見圖3，由圖可以看出鹽酸達克羅寧在甲醇中8 h、無水乙醇中6 h，其降解＞2%，不穩定；在流動相、乙腈、純化水、不同pH值的0.02 mol/L K2PO4溶液（pH1.0～6.0）這4類溶劑中12 h的變化量≤2%，均穩定?？疾旖Y果表明，在方法學建立時，建議以酸性的流動相進行樣品制備，從而保證鹽酸達克羅寧的穩定性。

圖3 鹽酸達克羅寧在不同溶劑中的穩定性

2.3 鹽酸達克羅寧對照品在流動相中的長期穩定性考察結果 鹽酸達克羅寧對照品溶液在冷藏（2～10℃）條件下密封儲存35 d，對照品儲存溶液外觀與新鮮配制的一致，未出現渾濁、沉淀等異?，F象；色譜中均未出現雜質峰，每個分析測試點，對照品溶液的含量變化見圖4。結合含量標準要求，在冷藏（2～10℃）條件下，鹽酸達克羅寧對照品儲存溶液效期可定義為35 d。

圖4 鹽酸達克羅寧對照品溶液穩定性

3 討論

不同溶劑中鹽酸達克羅寧穩定性考察項下，以甲醇、乙腈、無水乙醇為溶劑時，原有流動相比例（水相∶有機相=55∶45）不能完成測定，出現雜質峰干擾主成分的測定?！吨袊幍洹?020年版四部[13]規定，流動相的各組分比例、色譜柱（除填充劑種類不可改變外）允許改變，以滿足測定要求。調整流動相比例時，最小比例的組分X可在70%～130%或X±2%內調整（兩者之間選擇最大值）。根據前述要求，甲醇、乙腈和無水乙醇為溶劑的情況下，分別以流動相比例（水相∶有機相）60∶40、60∶40、65∶35可完成測定，測得鹽酸達克羅寧含量的變化情況，其中以無水乙醇為溶劑時，鹽酸達克羅寧12 h降解量＞4%，測定時采用安捷倫EC色譜柱（填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，699975-902，50 mm×4.6 mm，2.7μm）可排除干擾。

實驗中以純化水為溶劑的情況下，鹽酸達克羅寧溶解性差，需超聲溶解。在測定過程中，偶有基線不平的干擾，導致主峰峰型差，無法正常積分。通過探究發現，以水為溶劑時，在保留時間58 min左右出現扁平的雜峰，推測該峰是干擾的主要原因。因此在實驗過程中保證60 min以上的洗脫時間，即可避免干擾。

通過實驗發現，鹽酸達克羅寧在甲醇、無水乙醇中不穩定，在乙腈、純化水、不同pH值的0.02 mol/L KH2PO4溶液（pH 1.0～6.0）、0.02 mol/L KH2PO4溶液（H3PO4調pH至3.0）-乙腈（V/V，55∶45）中穩定，建議以酸性的流動相進行樣品制備，從而保證鹽酸達克羅寧的穩定性。