二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇和卡鉑治療對復發(fā)性卵巢上皮癌患者血清蛋白激酶B及胸苷激酶1水平的影響

高麗峰，苗晶，劉楠，張鴻清，王志華

(張家口市第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 張家口 075000)

卵巢癌在女性中是一種常見的婦科惡心腫瘤，其發(fā)病率在婦科惡心腫瘤中排第三，其死亡率居首位[1]。據(jù)統(tǒng)計[2]，有40%～60%的卵巢癌患者存在復發(fā)情況，且僅有20%的患者生存期超過5年，卵巢癌的易復發(fā)特性也是造成患者預后較差的主要因素。目前，臨床對于復發(fā)性卵巢癌尚無標準治療方案，主要以手術和化療為主[3]，尤其化療在卵巢癌患者中的臨床功效得到了充分肯定。復發(fā)性卵巢癌主要分為化療敏感型和化療耐受型。化療敏感型患者通常給予卡鉑聯(lián)合紫杉醇治療，有效率可達70%[4]，而對于化療耐受型患者目前還沒有統(tǒng)一治療方案，卡鉑、紫杉醇及其他二線化療藥(拓撲替康、吉西他濱)均沒有明顯的效果，其有效率僅為20%[5]。但不管是化療敏感型還是耐受型，臨床上都是采取以鉑類藥物為基礎的化療方案。二甲雙胍作為一種化療輔助藥被用于臨床，其在哺乳動物中具有抗腫瘤療效，且不良反應較少[6]。研究[7-8]發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可以通過對肝糖原異生的抑制，降低血液循環(huán)中葡萄糖和胰島素水平，讓腫瘤生長因子水平降低從而間接的抑制腫瘤生長，還可以直接通過對腺苷酸活化激酶(amp-activated protein kinase，AMPK)通路進行調(diào)控來實現(xiàn)抗腫瘤效應。然而，目前對于復發(fā)性卵巢癌，二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇和卡鉑治療的相關報道較少。血清蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)和胸苷激酶1(thymidine kinase 1，TK1)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關[9-10]。本研究通過二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇和卡鉑對復發(fā)性卵巢上皮癌患者進行治療，并對患者PKB和TK1水平進行檢測，以期為臨床用二甲雙胍治療復發(fā)性卵巢上皮癌提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇張家口市第一醫(yī)院2018年10月至2020年10月收治的120例復發(fā)性卵巢上皮癌患者作為研究對象。按照治療方案不同將患者分為對照組和觀察組，每組各60例。對照組中，年齡33～62歲，平均(45.12±2.55)歲；初次發(fā)病到復發(fā)時間2～5年，平均(3.44±0.88)年；腫瘤類型：粘液型腺癌患者11例，宮內(nèi)膜樣癌15例，漿液性腺癌患者34例；病理分期：Ⅲ a期患者21例、Ⅲ b期患者20例、Ⅳ期患者19例。觀察組中，年齡31～64歲，平均(41.12±2.79)歲；初次發(fā)病到復發(fā)時間2～6年，平均(3.76±0.79)年；腫瘤類型：粘液型腺癌患者16例，宮內(nèi)膜樣癌19例，漿液性腺癌患者25例；病理分期：Ⅲ a期患者20例、Ⅲ b期患者17例、Ⅳ期患者23例。兩組患者年齡、距初次發(fā)病時間、腫瘤類型、病理分期等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。納入標準：(1)患者均符合卵巢上皮癌診斷標準[11]；(2)患者通過影像學及腫瘤標記物檢測確定為腫瘤復發(fā)；(3)患者理解能力及語言交流無障礙；(4)無手術及化療禁忌證。排除標準：(1)存在嚴重心、腎、肝功能障礙疾病；(2)對本治療藥物有強烈過敏史患者；(3)在孕產(chǎn)期或哺乳期患者；(4)有嚴重內(nèi)科疾病或其他惡性腫瘤。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 對照組給予紫杉醇(辰欣藥業(yè)股份有限公司)和卡鉑(山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司)進行經(jīng)典化療。紫杉醇用量為175 mg/m2，持續(xù)靜脈滴注，持續(xù)3 h。卡鉑用量為400 mg/m2，化療前先用5%葡萄糖溶液(250～500 mL)進行稀釋，采用靜脈滴注，持續(xù)1 h以上。觀察組在對照組經(jīng)典化療基礎上聯(lián)合二甲雙胍(中美上海施貴寶制藥有限公司)治療，二甲雙胍采取口服，患者在餐后立即服用，0.25 g/次，3次/d，化療期結束后停藥。以上兩組患者化療每3周重復1次，21 d為1個療程，兩組患者均治療3個療程。

1.2.2 指標檢測 (1)通過醫(yī)院抽血化驗檢測治療前及治療3個療程后體中腫瘤標志物糖類抗原125(carbohydrate antigen125，CA125)：根據(jù)CA125水平變化來評估療效，患者臨床癥狀全部消失，CA125下降到35 KU/L以內(nèi)為完全緩解；患者臨床癥狀部分消失，CA125下降50%為部分緩解；患者臨床癥狀輕微改善，CA125下降<50%為穩(wěn)定；患者臨床癥狀無明顯改善，CA125上升50%為進展。總有效率=(完全緩解+部分緩解)/總患者例數(shù)×100%。(2)免疫組化EnVision二步染色法檢測患者治療前及治療3個療程后組織中PKB陽性表達水平：采用人PKB免疫組化試劑盒(上海吉雅生物科技有限公司)進行檢測。在光學顯微鏡下對每張切片隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)100個細胞。按陽性細胞數(shù)占總細胞數(shù)的百分比進行評分：陽性細胞比例≤10% 為1分，10%～50% 為2分，50%～75% 為3分；≥75% 為4分，計算5個視野平均分。按陽性細胞染色強度評分：細胞無顯色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2 分、黃褐色為3分，計算5個視野平均分。以上兩項平均積分乘積≥4分為陽性，PKB陽性率=PKB陽性患者/總患者例數(shù)×100%。(3)化學免疫法檢測患者治療前及治療3個療程后血清中TK1水平：空腹靜脈采血5 mL，離心分離血清，采用TK1檢測試劑盒(深圳華瑞同康生物技術有限公司)進行檢測，通過深圳華瑞同康CIS-2 型化學發(fā)光數(shù)字成像分析儀進行結果測定。(4)治療期間患者不良反應(白細胞減少、腹瀉、嘔吐、神經(jīng)毒性)總發(fā)生率[12]。(5)治療結束后，對患者生活質(zhì)量進行卡氏(Karnofsky，KPS)評分[13]，KPS評分每上升10分代表改善，減少10分以內(nèi)代表穩(wěn)定，減少10分以上則為下降。總改善率=改善/總例數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 兩組患者治療后總有效率對比

治療3個療程后，觀察組總有效率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者治療后總有效比較[n(%)]

2.2 兩組患者治療前后PKB及TK1表達水平比較

治療前，兩組患者PKB陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，兩組患者PKB陽性率較治療前降低(P<0.05)，且觀察組低于對照組(P<0.05)，見表2。PKB陽性率與TK1水平呈正相關(r=0.451，P<0.05)。

表2 兩組患者治療前后PKB及TK1表達水平比較

2.3 兩組患者治療期間不良反應總發(fā)生率比較

治療期間，觀察組患者不良反應總發(fā)生率低于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 兩組患者治療期間不良反應總發(fā)生率比較[n(%)]

2.4 治療后兩組患者KPS總改善率比較

治療后，觀察組患者KPS總改善率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 治療后兩組患者KPS總改善率比較[n(%)]

3 討論

卵巢癌是女性中常見的一種惡性腫瘤，臨床上有75%的卵巢癌患者在發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)是晚期，晚期卵巢癌患者在治療后極易出現(xiàn)復發(fā)[14]。化療是復發(fā)性卵巢癌患者最常見的治療方式，但化療期間會出現(xiàn)很大的變異性，尤其是耐受性的產(chǎn)生。二甲雙胍是一種治療2 型糖尿病的一線藥物，耐受性良好[15]。研究[16-18]表明，在胃癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌患者中，二甲雙胍與化療藥物進行聯(lián)合應用可以提高化療的效果。

本研究發(fā)現(xiàn)，通過應用二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇和卡鉑，復發(fā)性卵巢上皮癌患者的臨床總療效高于對照組。肖新益等[19]認為，紫杉醇聯(lián)合卡鉑可以有效治療復發(fā)性卵巢上皮癌，使其卵巢癌標志物CA125降低；Tseng等[20]在體外實驗中已經(jīng)證實了二甲雙胍可以增強卵巢癌耐藥細胞對紫杉醇及鉑類藥物的敏感性。而本研究中所使用的二甲雙胍在體內(nèi)可能也存在這樣的功效，與紫杉醇和卡鉑起到了協(xié)同作用，增強了患者對紫杉醇及卡鉑的敏感性，讓化療效果得到了提升。PKB是一種與腫瘤發(fā)生和耐藥性密切相關的酶，可以促進卵巢癌細胞中端粒酶的活化來參與腫瘤細胞的周期調(diào)控，導致腫瘤細胞存活時間延長[21]。TK1是一種限速酶，主要調(diào)控DNA合成速率，其含量水平的動態(tài)變化可反映體內(nèi)腫瘤細胞的增殖速度[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，在增加二甲雙胍治療后，復發(fā)性卵巢上皮癌中PKB陽性表達率及TK1水平低于對照組，且PKB陽性表達率與TK1水平呈正相關，說明二甲雙胍可以有效抑制PKB和TK1水平。Iorio等[23]在分子水平上證明了二甲雙胍的抗腫瘤作用，其可以通過調(diào)控小分子RNA(MicroRNA ，miRNA)來抑制腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移。在復發(fā)性卵巢上皮癌患者中，二甲雙胍可能通過上調(diào)miR-200c的表達，讓其靶基因PKB表達受到抑制，造成了患者PKB陽性表達率降低，同時也有效抑制了卵巢癌細胞增殖，這與Jiali等[24]在乳腺癌中的研究結果相似。由于目前對TK1表達的上游調(diào)控以及其與卵巢上皮癌發(fā)病機制的相關研究較少，只能推測二甲雙胍也可能是通過某一未知的miRNA對TK1的合成進行了干擾，導致其水平下降，將卵巢癌細胞周期阻斷在S期，抑制了卵巢癌細胞增殖，后續(xù)還需通過實驗去進一步證明。本研究還對兩組患者治療期間不良反應和生活質(zhì)量改善情況進行了對比，結果發(fā)現(xiàn)，在增加二甲雙胍治療后患者不良反應總發(fā)生率無明顯增加，且患者生活質(zhì)量得到了改善，說明二甲雙胍不會增加化療的毒副作用，有利于患者恢復。由于本研究樣本有限，各個醫(yī)院醫(yī)療水平不盡相同，后續(xù)還需進一步加大樣本量進行重復試驗，并在基因轉(zhuǎn)錄水平進行研究，找到影響PKB和TK1水平內(nèi)在機制，使結果更具有普遍性和說服力。

綜上所述，二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇和卡鉑治療可提高復發(fā)性卵巢上皮癌患者臨床總療效，降低患者PKB陽性表達率及TK1水平，并且不會增加化療期間不良反應的發(fā)生率，為臨床進一步治療復發(fā)性卵巢上皮癌奠定了一定的基礎。