多囊卵巢綜合征患者生殖道微生態狀況研究

覃德明，曾 辛，胡雪莉

（江西省婦幼保健院檢驗科，江西 南昌 330006）

女性生殖道是一個相對穩定獨特的生態系統，主要由微生物菌群、解剖結構、粘膜免疫和體內激素調節組成[1]。體內激素的改變會影響子宮內膜和生殖道上皮增生和角化，從而影響生殖道內乳酸桿菌與雜菌的比例。多囊卵巢綜合癥（polycystic ovary syndrome，PCOS）是一種生殖障礙、糖代謝異常伴有高雄激素血癥以及胰島素抵抗相關的疾病。在我國漢族育齡女性的發病率達5.61%[2]，患者主要表現為月經稀發或閉經甚至不孕，還有毛發多、肥胖等。由于PCOS 引起的女性體內激素改變，進一步對生殖道的微環境也產生一定的影響。為探明PCOS 女性與正常女性生殖道微生態的差異，了解血清高濃度睪酮水平對生殖道微生態的影響，本研究采用回顧性分析PCOS 患者與正常育齡女性的生殖道變化情況和不同血清雄激素水平的PCOS 女性生殖道狀況，為PCOS 的臨床診治和病因機制研究提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年1 月～2020 年7 月在江西省婦幼保健院就診并確診為PCOS 的77 例患者作為研究組，年齡19～50 歲，平均年齡（27.73±5.61）歲，選擇同期在該院體檢科體檢并排除PCOS 的育齡女性139 例作為對照組，年齡19～53 歲，平均年齡（29.01±7.11）歲，兩組年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經我院醫學倫理委員會批準。納入標準：①所有患者均符合《多囊卵巢綜合征的診斷和治療專家共識》中的診斷標準：月經稀發、閉經和或不規則子宮出血，且滿足PCOS 分型標準；②所有患者有孕產史。排除標準：①無法正常交流者；②入組前3 個月內使用過雌和或孕激素等藥物史。

1.2 方法

1.2.1 采樣及實驗方法 采樣3 d 內研究對象無生殖道用藥和性生活且月經干凈，由臨床醫生使用一次性無菌棉拭子，用生理鹽水沾濕拭子后采集生殖道1/3 處的分泌物，放入套管內，30 min 內送檢。

1.2.2 高倍鏡檢分析 取干凈稀釋管加稀釋液6～8滴，將標本放入稀釋管后用力擠壓棉簽，洗脫標本，丟棄棉簽。使用一次性小吸管吸取50 μl 洗脫液均勻涂抹在載玻片上，放置干片機干燥和固定，經革蘭染色后濾紙擦干，上自動分析儀掃描并判讀。低倍鏡50 個視野，高倍鏡50 個視野，進行菌群密集度、菌群多樣性、乳酸桿菌比例、加德納菌/普雷沃菌、革蘭陰性菌，革蘭陽性球菌、白細胞、真菌孢子、滴蟲、AV 評分、Nugent 評分和微生態綜合評價分析。

1.2.3 濕片鏡檢 取稀釋管內一滴懸液于載玻片上進行濕片鏡檢，查看滴蟲和真菌孢子等項目并記錄。

1.2.4 干化學 將稀釋管放入自動加樣儀做四聯干化學分析，檢測pH 值、H2O2濃度、白細胞酯酶和唾液酸苷酶。

1.3 結果判斷

1.3.1 多樣性標準 +：1～3 種細菌/油鏡，++：4～6 種細菌/油鏡+++：7～9 種細菌/油鏡；++++：10 種以上細菌/油鏡。密集度標準：+：1～9 個/油鏡；++：10～99 個/油鏡；+++：100 個以上/油鏡；++++：油鏡下觀察細菌聚集成團。革蘭氏陽性大桿菌、陰道加德納菌和普雷沃菌、動彎桿菌、革蘭陽性球菌或鏈球菌、革蘭氏陰性桿菌、革蘭陰性雙球菌、孢子及菌絲均是形態判讀，滴蟲結合濕片結果。

1.3.2 Nugent 評分 BV：Nugent 評分≥7 分；BV 中介：Nugent 評分4～6 分；正常：Nugent 評分0～3 分。

1.3.3 AV 評分 包括LBG 分級、白細胞數、含有中毒顆粒的白細胞比例、背景菌落、基底旁上皮細胞所占比例5 個檢測指標，每個指標的評分可分為正常或輕度（0 分）、中度（1 分）和重度（2 分），各指標得分相加為AV 總得分。AV 評分＜3 分為無AV 體征，評分＞3 分為異常。

1.3.4 pH 值 根據顯色情況判斷pH 值，參考值3.8～4.5，提示陰道處于正常酸性環境；過氧化氫：呈紅色，報告“＞2 μmol/L”，不顯色，報告“＜2 μmol/L”，白細胞酯酶：不顯色，報告“陰性”，顯藍色，報告“陽性”；唾液酸苷酶：不顯色，報告“陰性”，顯紫色，報告“陽性”。

1.3.5 陰道微生態 正常評價標準：菌群密集度：++～+++，菌群多樣性：++～+++，優勢菌：革蘭陽性大桿菌，炎性反應：白細胞0～5/高倍鏡視野，pH 值＜4.5，H2O2≥2 μmol/L。

1.4 觀察指標 依據血清睪酮濃度不同分為正常值組（39 例）和高于參考值組（18 例），比較研究組與對照組、正常值組與高于參考值組生殖道菌群密集度、多樣性、乳酸桿菌比例、加德納菌/普雷沃菌、白細胞、真菌孢子、滴蟲、需氧菌性陰道炎（AV）評分、Nugent 評分）、pH 值和微生態差異。

1.5 統計學分析 使用SPSS 19.0 統計學軟件分析數據，計數資料用（%）表示，比較采用χ2檢驗。計量資料用（）表示，比較采用t檢驗，P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組與對照組生殖道微生態比較 研究組AV評分異常率、白細胞（++～++++）異常率、pH 值（≥4.6）異常率和微生態失衡率高于對照組，乳酸桿菌比例（≥70%）低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；兩組菌群密集度、菌群多樣性、陰道加德納菌/普雷沃菌、真菌、滴蟲和Nugengt 評分比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2 正常值組和高于參考值組生殖道微生態比較睪酮高于參考值組真菌感染率高于正常值組，差異有統計學意義（P＜0.05）；兩組菌群多樣性、菌群密集度、乳酸桿菌比例（≥70%）、陰道加德納菌/普雷沃菌、滴蟲、AV 評分、Nugent 評分、白細胞（++～++++）、pH 值（≥4.6）、微生態失衡情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表1 研究組與對照組生殖道微生態比較[n（%）]

表2 正常值組和高于參考值組生殖道微生態比較[n（%）]

3 討論

多囊卵巢綜合征是育齡女性常見的內分泌性疾病，主要臨床表現有月經稀法、多毛、不孕等癥狀。文獻表明，多囊卵巢綜合征是多基因控制，與遺傳有一定的相關性，且可能受青春期的生理等影響。高胰島素和胰島素抵抗在PCOS 的病理生理中發揮重要作用，兩者作用于卵泡膜細胞，使其不能把雄烯二酮轉化成雌激素，從而導致高雄激素血癥[3]。一般的治療方法主要包括藥物和手術治療[4]，還有改變生活飲食習慣等。

女性生殖道內環境主要受微生物菌群調控，其中優勢菌為乳酸桿菌[5]，通過產生乳酸維持pH 值在3.8～4.5，可抑制其他細菌的數量。當桿菌數量下降時，生殖道的pH 值將升高，利于其他微生物如葡萄球菌、鏈球菌、陰性桿菌等需氧菌生長。而乳酸桿菌數量依賴于上皮細胞內的糖原含量，其受雌激素、孕激素和雄激素的綜合影響[6，7]。當出現白帶增多、有異味、外陰瘙癢等癥狀時應該積極查找病因，通過生殖道微生態可以了解其內環境改變，從而判斷是特異性或非特異性炎癥，針對性采取相應治療。采用生殖道微生態檢測系統從多角度分析[8-10]，可以對細菌性陰道炎（BV）、外陰陰道假絲酵母菌病（VVC）、細胞溶解性陰道病（CV）、滴蟲性陰道炎（TV）、AV 和混合型陰道炎進行綜合檢測，它優于傳統白帶手工濕片鏡檢，通過對低倍鏡和油鏡下的多視野觀察能更有效發現病原菌，特別是對VVC 和BV 有顯著優勢。

女性在患有會引起內分泌激素改變的疾病時，生殖道微生態的失衡率會提高，趙琦等[11]研究顯示，PCOS 女性生殖道微生態失衡率高于健康婦女。楊璐等[12]報道的8160 例非妊娠婦女陰道炎中，細菌性陰道炎最高。俞霞[13]研究發現，PCOS 女性生殖道微生態失衡與性伴侶數、不使用避孕套和使用抗生素等因素相關，反映的是外在因素導致的PCOS 女性微生態失衡原因。本研究結果顯示，PCOS 女性生殖道微生態在需氧菌感染率、白細胞數量、酸堿度失衡和微生態失衡率高于正常女性，以及乳酸桿菌的數量低于正常人。表明PCOS 女性的生殖道內環境受到了體內激素含量影響，特別是胰島素抵抗和高雄激素，雌激素水平降低，影響生殖道內上皮細胞的糖原含量，從而影響乳酸桿菌的比例，增加其他微生物感染風險。同時睪酮值高于參考范圍和處于參考范圍的PCOS 女性生殖道僅VVC 感染率不同，說明高雄激素水平對生殖道的真菌感染情況存在某種關聯性。總之，女性患PCOS 疾病是多種因素導致的，跟遺傳、生活環境和飲食習慣等都息息相關，PCOS 女性體內的內分泌激素改變導致多種臨床表現，也影響生殖道內環境，增加患陰道炎的風險。干預和治療PCOS 患者同時應該積極檢測生殖道微生態情況，全面掌握患者健康狀況，為PCOS 的診療提供一定的線索和治療時藥物調整等提供輔助作用。

綜上所述，PCOS 女性生殖道微生態失衡情況較健康女性嚴重，患陰道炎概率更大，且PCOS 患者的高濃度的雄激素與真菌感染具有一定關聯。