炒地龍與地龍飲片中次黃嘌呤和肌苷含量的比較

孫立麗，霍秦秦，王婉婷

（吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林）

0 引言

炒地龍為地龍的清炒炮制加工品。炒地龍照炒炙法（《中國藥典》2015 版 四部 通則0213）清炒炮制。

地龍的來源有廣地龍和滬地龍，廣地龍主產于廣東、海南、廣西，春季至秋季捕捉；滬地龍主產于浙江、江蘇、上海、山東、河南等地[1]。現省內制藥企業、藥品批發、市售及醫療機構應用的地龍藥材均為廣地龍，滬地龍較少見。

化學成分：地龍體內含有多種蛋白質類、多肽類、核苷酸、氨基酸以及脂肪酸等化學成分[2]。蛋白質是地龍的主要活性成分之一；多肽類包括活性地龍肽和抗菌肽等；核苷酸是地龍代謝的重要化學成分，地龍中主要有次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶等核苷酸成分；地龍含有多種氨基酸，包括了人體必需的八種氨基酸。

藥理作用： 生地龍主要有平喘、抗凝血、抗血栓、抗腫瘤、降血壓等藥理作用，所含的蚯蚓解熱堿具有良好的解熱作用。地龍的平喘降壓作用，主要是含有次黃嘌呤、黃嘌呤等核苷酸成分, 并有抗組織胺及舒張支氣管作用，從而達到止咳平喘的目的[3]。

1 樣品收集

起草樣品收集情況：共收集地龍2 個品種10 批次藥材，其中廣地龍8 批、滬地龍2 批，來自廣西、河北、海南、廣東、江蘇、安徽等10 個產地。

2 含量測定

地龍主要活性成分有肌苷、次黃嘌呤、琥珀酸等。肌苷又可稱為次黃嘌呤核苷，它在化學結構上與次黃嘌呤極為相似，僅比次黃嘌呤多了一個呋喃糖。

參照有關文獻[5，6]采用高效液相色譜法對炒地龍中肌苷、次黃嘌呤進行含量測定。

2.1 儀器與試藥

高效液相色譜儀Waters e2695；電子天平METTLER MS105DΜ， 電子天平JA5003；

肌苷對照品，批號：140669-201104，含量100%，中國食品藥品檢定研究院；

次黃嘌呤對照品，批號：140661-201704，含量100%，中國食品藥品檢定研究院；

甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2.2 方法考察

方法：采用高效液相色譜法以次黃嘌呤和肌苷為定量指標，進行含量測定[7]，對10 批地龍樣品炮制前后進行含量考察。

十六年前，有著優越家世的古意，頂著耀眼的光壞，就讀于一所名牌大學，跟青梅竹馬的女友十分相愛，已經準備談婚論嫁。

色譜條件與系統適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01mol/L 磷酸二氫鉀溶液—50%甲醇溶液（80 ∶20）為流動相；檢測波長為254nm；柱溫30℃；流速0.8ml/min；進樣量20μl。

對照品溶液與供試品溶液制備:

對照品溶液的制備:取次黃嘌呤對照品與肌苷對照品適量，精密稱定，置同一100ml 量瓶中，加0.9%氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置20ml 量瓶中，加0.9%氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml 中含次黃嘌呤對照品25μg、肌苷對照品50 μg 的混合對照品溶液。

供試品溶液的制備：取本品粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.9%氯化鈉溶液25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用0.9%氯化鈉溶液補足減失的重量，搖勻，離心10min（4000r/min），精密量取上清液5ml,置10ml 量瓶中，用0.9%氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20μl 注入液相色譜儀，測定。

3 方法學考察結果

3.1 線性關系考察

標準曲線的制備：精密稱取次黃嘌呤對照品10.24mg、肌苷對照品20.70mg，置同一100ml 量瓶中，加0.9%氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液；精密量取對照品儲備液5ml，置20ml 量瓶中，加0.9%氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密吸取對照品溶液5、10、15、20、25μl，分別注入液相色譜儀，測得峰面積，以進樣量（ng）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果次黃嘌呤回歸方程為Y=5392.9X-38420 r ≈1.0000，進樣量在128-640ng 范圍內線性關系良好。

肌苷回歸方程為 Y=2822.3X-34021 r ≈1.0000，進樣量在258.75-1293.75ng 范圍內線性關系良好。結果見表1、表2。

表1 次黃嘌呤標準曲線數據

表2 肌苷標準曲線數據

3.2 儀器精密度試驗

取同一供試品（CDL-06）溶液，連續進樣6 次，每次20μl，依法測定，記錄峰面積。結果見表3。

次 黃 嘌 呤 平 均：682233，RSD=1.2%；肌 苷 平 均：1663696，RSD=1.5%

結果表明精密度良好。

3.3 穩定性考察

取同一供試品（CDL-06）溶液，分別在0h、3h、6h、9h、12h、18h、24h 各進樣測定一次，記錄峰面積。結果見表4。

表3 精密度試驗結果

表4 穩定性試驗結果

次黃嘌呤平均值：722540，RSD=5.7%，肌苷平均值：1716031，RSD=2.8%。

結果表明：供試品溶液在24h 內次黃嘌呤相對標準偏差較大，穩定性較差。

3.4 重復性考察

取同一批供試品（CDL-06）6 份，依法測定，平行測定6 次，計算。結果見表5。

表5 重復性試驗結果

結果次黃嘌呤平均含量為545.98 μg/g，RSD 為1.5%；肌苷平均含量為2.76mg/g，RSD 為2.2%，表明本方法重復性較好。

3.5 準確度試驗

取已知含量的樣品（CDL-06）（含次黃嘌呤520.55 μg/g、肌苷2.80 mg/g）6 份，每份約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品混合溶液（次黃嘌呤0.02496mg/ml、肌苷0.1457mg/ml）5ml，分別精密加0.9%氯化鈉溶液適量，使總體積至25ml，依法測定，計算回收率，結果次黃嘌呤平均回收率為95.9%，RSD=5.6%，肌苷平均回收率為93.0%，RSD=4.8%，n=6。結果見表6、表7。

表6 次黃嘌呤回收率試驗結果

表7 肌苷回收率試驗結果

表8 樣品含量測定結果

4 樣品測定

10 批樣品測定結果：依法測定地龍炮制前、后樣品中次黃嘌呤和肌苷含量，結果見表8。

實驗結果：地龍10 批生品含量次黃嘌呤在 262.566-632.371μg/g 之 間，均 值450.28μg/g 、肌 苷 在1.820-3.560mg/g 之間，均值2.30 mg/g，炒地龍10 批含量次黃嘌呤在282.703- 658.166μg/g 之間，均值479.08μg/g 、肌苷在1.381- 2.804 mg/g 之間，均值1.96mg/g。地龍10 批炒制前后含量均有變化，炒地龍次黃嘌呤的含量相應增高、肌苷含量相應降低。

5 討論

地龍經過炮制后化學成分或多或少會有一些變化。如炒制地龍中肌苷含量較生品相應降低，而次黃嘌呤含量增高，平喘療效增強；炮制品較地龍生品中蚓激酶的含量會減少[8]。