ISO15189體系下全自動血凝分析儀的3Q驗證

莎 仁 梁 魚

1.內蒙古自治區巴彥淖爾市醫院檢驗科，內蒙古巴彥淖爾 015000；2.內蒙古醫科大學，內蒙古呼和浩特 010110

隨著凝血檢測項目在臨床的不斷發展，臨床以及相關領域對凝血檢測結果的準確性和凝血檢測效率的要求越來越高[1]。因此，為確保檢測數據的準確可靠，在ISO15189體系下對醫學實驗室儀器設備進行3Q驗證非常有必要。3Q驗證即IQ、OQ和PQ，其中最關鍵的步驟為PQ即性能驗證，要求驗證頻率是每年一次[2]。ISO15189體系也要求實驗室新儀器在安裝和應用于臨床檢測前應對其性能指標進行驗證[3-5]，這都是保證檢測過程每個環節質量的重要手段[6]。美國FDA也有同樣的規定[7-8]。目前國內已有很多品牌的全自動凝血分析儀的性能驗證報道[9-10]。以SysmexCS-2500全自動血凝分析儀為例，探究在15189體系下該全自動血凝分析儀的性能驗證過程。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器為日本希森美康公司（Sysmex）[11]生產的SysmexCS-2500全自動血凝分析儀；試劑為凝血酶原時間（PT）測定試劑盒（批號565631）、活化部分凝血活酶時間（APTT）測定試劑盒（批號556969）、凝血酶時間（TT）測定試劑盒（批號556839）、纖維蛋白原（FIB）測定試劑盒（批號595024）、D-二聚體；質控品為正常凝血質控品：質控1（批號548087）和 INNOOANCED-DIMERControl1（批 號562243）；異常凝血質控品：質控P（批號562143）和 INNOOANCED-DIMERControl2（批號 556715）。

1.2 方法

1.2.1 批內精密度 根據《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》[12]、《D-二聚體定量檢測》文件[13]選取2個濃度水平高低值樣本，連續重復測定11次，計算變異系數（CV），標準差（SD）。要求計算CV值需≤廠家要求。

1.2.2 日間精密度 根據CLSI EP15-A3文件[14]選取兩個水平質控品，每天取出兩個水平的樣品各一份測定一次，共測定20 d，計算CV，SD。要求計算CV值需≤廠家要求。

1.2.3 準確性

1.2.3.1 準確性（PT、APTT、TT、FIB） 根據 CLSI EP15-A3文件[15]取兩個水平的血凝質控品進行測定，計算每份樣本檢測結果與靶值的相對偏差。以偏差為評價指標，要求計算的檢測結果與靶值的偏差在廠家規定的允許范圍內。

1.2.3.2 準確性（D-二聚體） 根據EP15-A3文件[15]選取兩個水平的定值質控品重復測定3次。要求D-二聚體低值、高值測定結果在廠家規定的允許范圍內。

1.2.4 線性范圍 根據408-2012《臨床化學設備線性評價指南》[16]選取一份接近預期上限的高值血漿樣本（H），FIB、D-二聚體按 100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例進行稀釋。每個稀釋度重復測定2次，計算均值。計算y=ax+b，驗證線性范圍，需符合a值在1±0.05范圍內，R2≥0.9801的要求。

1.2.5 FIB、D-二聚體檢測下限靈敏度 根據EP9-A3文件[17]連續測定接近理論低值水平血漿10次。結果需符合CV%＜20%。

1.2.6 攜帶污染率

1.2.6.1 PT、APTT、TT、FIB攜帶污染率 連續測定對倍稀釋的正常血漿PT或APTT三次（j1、j2、j3）后，立即連續測定原血漿FIB或TT三次（i1、i2、i3），再連續測定血漿 PT或 APTT三次（j4、j5、j6）。根據下面公式計算PT、APTT、TT攜帶污染率CV值，要求均應≤10%。血漿中FIB的濃度要求在3～4 g/L。

1.2.6.2 D-二聚體、FDP攜帶污染率

1.2.6.2.1 高值樣本對低值樣本的污染率 低值樣本置樣本架1和3位置，高值樣本置于2位置，每個樣本分別測定3次，記錄結果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。計算：K1=[N4-Mean（N1，N2，N3）]/Mean（N1，N2，N3）。 計 算 結 果 K1 應≤10.0%。

1.2.6.2.2 低值樣本對高值樣本的污染率 高值樣本置樣本架1和3位置，低值樣本置于2位置，每個樣本分別測定3次，記錄結果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。 計 算：K2=[A4-Mean（A1，A2，A3）]/Mean（A1，A2，A3）。 計 算 結 果 K2 應≤10.0%。

1.3 統計學處理

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據處理。計算的各檢驗指標性能驗證結果的CV值用百分數的形式表示。

2 結果

2.1 批內精密度

批內精密度正常質控和異常質控CV值均符合廠家要求，驗證合格。見表1～2。

表1 批內精密度正常質控水平驗證結果

表2 批內精密度異常質控水平驗證結果

2.2 日間精密度

日間精密度正常質控和異常質控CV值均符合廠家要求，驗證合格。見表3～4。

表3 日間精密度正常質控水平驗證結果

表4 日間精密度異常質控水平驗證結果

2.3 準確性

2.3.1 準 確 性（PT、APTT、FIB、TT） PT、APTT、FIB、TT檢測結果與靶值的偏差均符合要求，驗證合格。見表5～6。

表5 準確性正常質控水平驗證結果

表6 準確性異常質控水平驗證結果

2.3.2 準確性（D-二聚體） D-二聚體檢測結果與靶值的偏差符合要求，驗證合格。見表7～8。

表7 D-二聚體低值準確度驗證結果

表8 D-二聚體高值準確度驗證結果

2.4 線性范圍

所得FIB與D-二聚體的線性驗證回歸方程均符合要求，驗證合格。見圖1～2。

圖1 驗證FIB線性結果圖

圖2 D-二聚體線性結果圖

2.5 檢測下限（靈敏度）

FIB與D-二聚體檢測結果CV值均符合要求。見表9。

表9 CS-2500靈敏度驗證結果

2.6 攜帶污染率

檢測結果顯示PT/FIB、APTT/TT、FIB、TT/APTT、K1、K2的攜帶污染率CV值分別為-0.97%、0.50%、-0.52%、1.56%、2.56%、2.65%，均＜10%，符合要求，驗證合格。

3 討論

本研究在ISO15189體系下，參照CLSI頒布的EP系列文件，結合實際，對CS-2500全自動血凝分析儀進行了性能驗證。精密度是用變異系數CV來衡量在規定的條件下對同一被測量品進行連續多次獨立檢驗所得的測定結果之間的一致性。進行精密度驗證是ISO15189體系中性能驗證的關鍵一步[4]，也是進行其他項目性能驗證的前提和基礎[6]。準確性是衡量三次測量結果與靶值之間的一致程度的指標。線性范圍是檢測確定測定值與稀釋倍數呈線性關系的范圍。靈敏度是儀器測量最小被測量的能力，所測的最小量越小，該儀器的靈敏度越高。攜帶污染率是具體的量化攜帶污染，其值越小代表儀器檢測過程樣本相互影響越小。國內已有相應文獻綜述FIB項目比其他項目污染率高[5]。

SysmexCS-2500全自動血凝分析儀檢測項目的3Q性能驗證結果均符合廠家標識要求，同時該血凝分析儀多數驗證指標也能達到ISO15189的規定要求[6]。所以通過驗證可以確定該血凝分析儀精密度良好、準確性可靠、線性相關性較好、靈敏度較高、攜帶污染率低并具有較好的自潔能力，可用于ISO15189認可的醫學實驗室凝血檢測等工作，向臨床提供準確真實可靠的檢驗數據。