阿帕替尼聯合DC-CIK 細胞治療原發性肝癌的臨床療效及患者細胞免疫功能的變化

時牛，宋潔，崔天慶，云宇婷，石秀換，郭瑞芳

1 內蒙古自治區人民醫院消化內科，呼和浩特010010；2 內蒙古醫科大學附屬醫院腫瘤內科；3 內蒙古自治區人民醫院臨床營養中心

原發性肝癌常起病隱匿，患者大多就診時已是中晚期，此時已不適合手術治療或者手術療效難以達到預期［1-3］。阿帕替尼為一種抑制血管生成的小分子口服靶向藥物，臨床報道其治療胃癌、肺癌等患者療效顯著［4-9］。殺傷性細胞群體（DC-CIK）治療屬于一種生物細胞治療方式，可通過在人體外培養誘導的樹突狀細胞（DC）與體內誘導殺傷細胞（CIK）的協同作用產生DC-CIK，從而發揮特異性殺傷腫瘤細胞的治療作用，具有療效好且安全的優勢［10-11］。有研究發現，阿帕替尼聯合多種治療手段包括生物免疫治療可提高肝癌患者的遠期生存率［12］。故本研究選取60 例原發性肝癌阿采用帕替尼聯合DC-CIK 細胞治療，觀察其臨床療效以及患者免疫功能的變化。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015 年1 月—2018 年1 月內蒙古自治區人民醫院確診收治的原發性肝癌患者120 例，男59 例、女61 例，年齡34～70 年齡（43.4 ±23.2）歲，均符合2017 年版《原發性肝癌診療規范》［13］中原發性肝癌的診斷標準。納入標準：①中晚期原發性肝癌；②首次用藥前2 周內未使用過免疫抑制劑類和激素類藥物；③預計生存期≥3 個月；④無手術治療指征或者拒絕接受手術治療者。排除標準：①有遠處轉移病灶；②心、肺、腦等具有嚴重的功能障礙者；③經臨床評估后認為不適合參與本研究患者。120 例隨機分為對照組和觀察組各60 例，兩組性別、年齡、癥狀體征、病理分期分級等比較差異均無統計學意義（P均＞0.05）。本研究經醫院倫理委員會批準同意實施，患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法

1.2.1 DC-CIK 細胞培養 采集患者外周靜脈血50 mL，經密度梯度離心法分離取得外周血單個核細胞層；經淋巴細胞分離液取得淋巴細胞，在37 ℃、5%CO2的培養箱中細胞貼壁生長120 min。分離細胞，將懸浮液吸入進75 cm2培養瓶1640 培養液中進行CIK細胞培養，貼壁細胞加入DC細胞培養液進行DC 細胞培養。其中CIK 培養瓶中加入干擾素-γ，之后加混合細胞因子（50 ng/mL MAbCD3、100 U/mL IL-1a、1 000 U/mL IFN-γ）誘導，擴瓶培養后收集。DC 培養瓶中加入含半量細胞因子（1 000 U/mL IL-4和50 U/mL GM-CSF）的培養基誘導DC 細胞，擴瓶培養后收集。在第7 天將收集的DC 細胞和CIK 細胞按照1∶10 比例加入新的培養瓶中，混合培養6～7 d，得到DC-CIK 細胞。取少量DC-CIK 細胞進行細胞鑒定，無菌檢測合格后可進行回輸。

1.2.2 治療方案 對照組應用甲磺酸阿帕替尼片（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司）500 mg，每天1次，餐后0.5 h溫水送服，28 d為1個療程，共3個療程。觀察組應用甲磺酸阿帕替尼片與對照組相同，同時聯合接受DC-CIK 生物細胞治療。每周回輸細胞2～3次，每次回輸CD 細胞（1～10）×109個、CIK 細胞（1～100）×1010個，28 d為1個療程，連續治療3個療程。

1.3 療效判定及免疫功能檢測 參照Recist1.1 實體瘤療效評價標準，3 個療程治療結束后評估兩組療效。完全緩解（CR）為所有靶病灶腫塊均完全消失，且無新的靶病灶；部分緩解（PR）為所有腫塊的總面積之和較基線相比下降30%以上；穩定（SD）為介于PR 和疾病進展（PD）之間；PD 為所有腫塊的總面積之和較最小總面積時增多20%以上，或有新的靶病灶；無法評估（NE）是指因影像不清晰等原因而無法進行療效評定。總緩解率（ORR）為（CR+PR）/總例數×100%，疾病控制率（DCR）為（CR+PR+SD）/總例數×100%。采集兩組治療前、治療3 個療程靜脈血，采用血液生化儀檢測肝臟功能指標如天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、白蛋白（ALB）以及甲胎蛋白（AFP），采用流式細胞儀檢測外周血中CD3+、CD4+、CD8+細胞構成以及CD4+/CD8+。

1.4 統計學方法 應用SPSS 25.0軟件進行數據處理和分析。符合正態分布的計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數或百分比表示，比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床療效 經3 個療程治療，兩組均無死亡患者。對照組CR 、PR、SD、PD 分別為6、8、23、23 例，ORR 為23.3%，DCR 為61.7%；觀察組CR 、PR、SD、PD 分 別 為11、18、20、11 例，ORR 為48.3%，DCR 為81.7%。兩組ORR、DCR 比較差異均有統計學意義（P均＜0.05）。

2.2 兩組治療前后肝功能及AFP 水平變化 兩組治療3個療程與本組治療前比較，血液ALT、AST、AFP水平降低、ALB水平升高（P均＜0.05）。治療3個療程兩組比較，觀察組血液ALT、AST、AFP水平低于對照組，ALB水平高于對照組（P均＜0.05）。見表1。

表1 兩組治療前后肝功能及AFP水平比較（±s）

表1 兩組治療前后肝功能及AFP水平比較（±s）

注：與本組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療3個療程時比較，△P＜0.05。

組別對照組治療前治療3個療程觀察組治療前治療3個療程n ALT（U/L）AST（U/L）ALB（g/L）AFP（ng/mL）60 137±12.1 93±10.7*148±35.6 102±26.7*16.2±4.1 31.2±4.3*357±72.3 168±72.1*60 360±70.0 60±34.2*△142±13.2 51±5.6*△156±40.1 56±18.5*△16.9±4.2 40.3±3.7*△

2.3 兩組治療前后免疫功能變化 對照組治療3個療程與治療前比較，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+各項指標差異無統計學意義（P均＞0.05）。觀察組治療3 個療程與治療前比較，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+各項指標差異有統計學意義（P均＜0.05）。治療3 個療程兩組比較，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+各項指標差異有統計學意義（P均＜0.05）。見表2。

表2 兩組治療前后免疫功能指標比較（x±s）

3 討論

原發性肝癌患者就診時大多為中晚期，此時患者機體調節功能已發生紊亂，免疫應答啟動嚴重受損，免疫功能明顯受到抑制［14-15］。因此保守治療選擇多藥聯合應用或者多種方式協同治療以提高臨床療效、增強免疫功能、減少不良反應有重要意義。

研究顯示，阿帕替尼聯合DC-CIK細胞療法可從抑制血管生成和增強免疫功能兩個方面協同增加抗腫瘤作用。腫瘤生長需要血管營養的供給。阿帕替尼可競爭性地抑制血管生成信號通路的重要靶點血管內皮生長因子-2 上的ATP 位點，阻斷信號向下游進一步傳遞，減少腫瘤細胞生長過程中氧氣和營養物資供給，有效抑制肝癌組織中血管惡性生長，從而實現抗腫瘤治療的目的。DC 是體內具有識別抗原并殺傷腫瘤細胞，具有誘導生成細胞毒性T 細胞和Th 細胞的功能，屬于免疫系統的啟動者以及參與者。研究表明，DC 細胞通過誘導產生T 淋巴細胞，趨化T 細胞向腫瘤細胞遷移，并使T 細胞在腫瘤部位生存，進一步分泌白介素等因子，遏制血管的生長及腫瘤的增殖等，從而起到抗腫瘤作用［16］。CIK 細胞可通過分泌細胞因子以及自體毒性作用殺傷腫瘤細胞，且CIK 細胞經刺激后可使高表達CD3+、CD4+等具有免疫功能的T 淋巴細胞增加［17］。研究表明，DC-CIK 細胞有助于CIK 增殖，增強其活性，同時也可增強DC的功能。DC-CIK 細胞可充分調動免疫機制有效殺滅腫瘤細胞，抑制腫瘤生長，同時不損壞正常細胞，尤其對清除殘留病灶有明顯優勢［18］。本研究顯示，經3 個療程治療后，觀察組ORR 和DCR 均明顯高于對照組，肝功能改善程度好于對照組，且治療后觀察組外周血免疫功能各項指標均明顯改善。說明阿帕替尼聯合DC-CIK 細胞療法治療原發性肝癌患者效果優于單藥阿帕替尼，其中發揮主要治療作用的可能是DC-CIK細胞生物療法。

綜上所述，阿帕替尼聯合DC-CIK細胞生物療法可通過改善原發性肝癌患者的免疫功能起到抗腫瘤作用，且臨床療效顯著。但是，本研究總體病例數少，且隨訪觀察時間短，此研究結果的真實性尚需要臨床進一步研究。