不同起始血液制備洗滌紅細胞的質量比較*

鄧 莉，歐陽熊妍，彭 楷，李 娜，汪 娟

重慶市血液中心，重慶 400052

洗滌紅細胞由于去除了幾乎所有血漿和絕大部分非紅細胞成分，廣泛應用于臨床多種疾病的治療。按照《血站技術操作規程(2019版)》，洗滌紅細胞起始血為合格血液，按照目前紅細胞成分分類，懸浮紅細胞和去白懸浮紅細胞均可應用于制備洗滌紅細胞。由于這兩種紅細胞成分的質量差異，采用同樣的制備工藝流程所制備的洗滌紅細胞是否有差異？本研究分別選用懸浮紅細胞和去白懸浮紅細胞作為起始血，制備洗滌紅細胞并對其相關的質量指標進行比較。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機抽取成品庫1 U合格血液60袋(來源于200 mL全血所制備的紅細胞為1 U)，懸浮紅細胞和去白懸浮紅細胞各30袋。入組血液均為采血后7 d以內的血液。

1.2儀器、材料及試劑

1.2.1血液制備 賽默飛3BP+大容量低溫離心機(賽默飛3BP)，全自動全血成分血分離機(LMB，德國)，無菌接管機(泰爾茂TSCD-Ⅱ型，日本)，南格爾250 mL×3生理鹽水溶液聯袋(四川南格爾)，采血袋200 mL(山東威高)。

1.2.2檢測儀器及試劑 Sysmex XS 500i全自動血細胞計數儀及配套試劑，北京瑞爾達 photometer 4040 半自動生化儀，游離血紅蛋白檢測試劑盒(批號：191012)，奧林巴斯AU400全自動生化儀，伊普諾康腦脊液/尿液總蛋白測定試劑盒(批號：20190902)。

1.3方法

1.3.1洗滌紅細胞制備 使用無菌接駁機將冷藏的洗滌用生理鹽水溶液聯袋和待洗滌的紅細胞懸液導管進行無菌結合連通。將生理鹽水溶液150 mL移至紅細胞袋內夾緊導管混勻，混勻后4 669×g離心10 min，離心溫度4 ℃，加速9，減速5，離心完成，取出血袋，避免震蕩。將血袋置于全自動全血成分血分離機進行分離操作，程序設置：設備運行前所有卡鉗閉合，擠壓板向前移動，打開A、D卡鉗；分離廢液由母袋位置到頂部天平位置，分離到M1位置停止，卡鉗A、D閉合。繼續分離廢液，擠壓板繼續向前移動，啟用A卡鉗的流速調節器，打開A、D卡鉗，分離到E1、E2位置停止，卡鉗A、D閉合。分離白膜層，擠壓板繼續向前位置到頂部天平位置，卡鉗A、D閉合，擠壓板居中。重復上述操作，洗滌3次。洗滌完成，加入50 mL紅細胞保養液，混勻。

1.3.2檢測指標 檢測過程：制備完成后，質管科按照GB18469-2012的規定進行質量檢測，外觀、容量、血紅蛋白含量、上清蛋白質含量、無菌試驗標本在抽檢后當天分樣檢測，溶血率由母袋血液在2～6 ℃冰箱懸掛靜置保留至儲存期最后1周，取上清液檢測。

1.3.2.1血紅蛋白含量 采用Sysmex XS 500i全自動血細胞計數儀檢測總血紅蛋白濃度(CHb)，血紅蛋白含量計算公式為Hb=CHb×V，式中Hb為血紅蛋白含量，V為全血或成分血體積。

1.3.2.2溶血率 在儲存期最后1周，采用鄰-甲聯苯胺法進行游離血紅蛋白檢測，溶血率計算公式為P=(1-HCT)×CFHb/CHb×100%[1]，式中P為溶血率，HCT為血細胞比容，CFHb為上清液游離血紅蛋白濃度。

1.3.2.3上清蛋白質含量 上清蛋白質含量計算公式為Cpr=A1CV(1-HCT)/A0[1]，式中Cpr為上清蛋白質含量，A1為樣品吸光度，A0為標準品吸光度，C為標準品濃度，V為洗滌紅細胞容量。

1.3.2.4容量 血袋稱重，分別計算洗滌前后紅細胞容量。

1.3.2.5細菌培養 進行需氧菌和厭氧菌培養。

2 結 果

2.1洗滌前后容量比較 懸浮紅細胞組洗滌過程損耗的血液明顯多于去白懸浮紅細胞組，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 洗滌前后容量比較

2.2兩組制備的洗滌紅細胞相關質量指標的比較 采用懸浮紅細胞制備的洗滌紅細胞的血紅蛋白含量、上清蛋白含量、儲存期末溶血率與采用去白懸浮紅細胞制備的洗滌紅細胞相比，差異均無統計學意義(P>0.05)。所有入組血液細菌培養均無細菌生長。見表2。

表2 洗滌后各項質量指標比較

3 討 論

洗滌紅細胞為臨床常用血液制品之一，推薦用于血漿蛋白過敏患者、非同型造血干細胞移植患者、IgA缺乏患者、高鉀血癥及肝腎功能不全等貧血患者。洗滌紅細胞是采用特定的方法將保存期內的全血、懸浮紅細胞用大量等滲溶液洗滌，去除幾乎所有血漿成分和大部分非紅細胞成分，并將紅細胞懸浮在氯化鈉注射液或紅細胞添加劑中所制成的紅細胞成分血[1]，可降低過敏、非溶血性發熱等輸血反應。在血液制備過程中，離不開“人、機、料、法、環”的質量控制要素，需建立標準化操作流程，而洗滌紅細胞起始血液選擇的固定化，利于制備血液的過程控制及質量穩定。傳統觀念中，洗滌紅細胞起始血應選擇去白懸浮紅細胞，因為這樣的起始血液其白細胞經過白細胞過濾器清除后殘留更少，同時白細胞具有免疫活性,在儲存期間會釋放多種炎癥因子,導致紅細胞的破壞[2-3],但是按照目前國標對于洗滌紅細胞的定義和質量檢測，取消了檢測白細胞殘留量指標。同時在本研究中，全部選用采集后7 d以內的血液，通過離心后洗滌去除掉血液中的大部分白細胞，也能達到去除白細胞、減少輸血不良反應的目的[4]，兩組的儲存期末溶血率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

采用全自動全血成分血分離機分離制備洗滌紅細胞，兩組均采用同一分離制備程序，利用分離機光學探測器準確探測血液中白膜層，控制流速以及掌控分離效果，避免人工分離過程差異，在白細胞去除和紅細胞回收環節上所造成的波動較大[5]。本研究中所分離制備的洗滌紅細胞，懸浮紅細胞組和去白懸浮紅細胞組的血紅蛋白含量比較，差異無統計學意義(P>0.05)，所有數據均在國標范圍以內；懸浮紅細胞組和去白懸浮紅細胞組的上清蛋白質含量比較，差異無統計學意義(P>0.05)；說明選用合格的懸浮紅細胞和去白懸浮紅細胞作為起始血，均能制備符合國標要求的洗滌紅細胞，二者質量指標無明顯差異。

由于紅細胞容量受獻血者個體影響較大[6]，因為來源于HCT高的血液經離心分離去除血漿后，所獲得的紅細胞懸液容量較高，而來源于HCT低的獻血者所捐獻的血液，所分離制備的紅細胞懸液容量也相對較低。因此本研究中僅對比同一袋血液洗滌前后容量差，懸浮紅細胞組容量損耗較去白懸浮紅細胞組損耗量大，差異有統計學意義(P<0.05)。分析原因，紅細胞在反復洗滌過程中，要去除其中幾乎所有血漿和絕大部分白細胞，按照洗滌紅細胞的制備要求，灌注生理鹽水后離心，去除上清液和白膜層，由于去白懸浮紅細胞前期在制備過程中，已經通過白細胞過濾器去除了絕大部分白細胞，損失了部分血液，因此在洗滌環節中，對于白膜層的洗滌和去除，比懸浮紅細胞白膜層的洗滌，損耗的血量更少。隨著無菌接管技術的發展，本研究中，采用無菌接管技術連接洗滌用生理鹽水和血液，整個過程可視為密閉系統，可以在常規血液制備操作環境中進行，減少二次污染機會[7]。