原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3水平及其與肝纖維化指標的相關性

幸紅軍

遼寧省沈陽市第四人民醫院檢驗科，遼寧沈陽 110031

原發性肝癌為我國常見惡性腫瘤之一，目前其病因及發病機制尚未完全明確，盡早診治可明顯提高患者總體療效。部分原發性肝細胞癌能夠通過檢驗指標診斷，不能采用檢驗指標診斷的需進行穿刺或者手術取病理組織活檢確診，但后者具有創傷性，有一定的潛在風險，難以重復進行，另外，抽樣誤差也可能影響病理診斷的準確性。血清生化指標檢測是臨床上最常用的無創檢查方式，相關研究表明，原發性肝癌的惡變由多種因素所致，機體受刺激時可誘導T淋巴細胞浸潤，并促進可溶性腫瘤細胞壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)表達，sTRAIL能夠參與機體自身免疫性疾病、炎性反應和肝細胞凋亡，引起肝臟免疫受損[1]。基質金屬蛋白酶(MMP)在肝癌細胞外基質、組織再塑形中有重要作用，MMP-3高表達是多種惡性腫瘤發生、發展的標志，其表達水平與腫瘤淋巴結轉移、腫瘤分化程度有明顯相關性，可能成為判斷腫瘤預后、復發、侵襲、轉移的危險標志物[2]。另有研究發現，肝纖維化為多種慢性肝病的必然發生的病理改變，肝纖維化能夠反映肝臟病變程度[3]。近年來，有研究發現，細胞外基質合成及降解相關的標志物與肝纖維化程度關系密切[4]。本研究旨在分析原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3的表達及與肝纖維化指標的相關性，為原發性肝癌的臨床診治提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2018年1月至2019年5月收治的52例原發性肝癌患者納入原發性肝癌組。納入標準：均根據臨床病史、癥狀、實驗室指標及影像學檢查確診為原發性肝癌；心、腦、腎等器官無明顯障礙；KPS評分大于60分；未接受放化療[5]。排除標準：近期接受過正規免疫調節劑治療；合并肝臟血管畸形、血管瘤等疾病；合并凝血功能障礙及血液系統病變；妊娠期或者哺乳期女性。原發性肝癌組中男32例，女20例；年齡38～73歲，平均(51.42±8.51)歲；TNM臨床分期[5]，包括Ⅰ期13例，Ⅱ期20例，Ⅲ期19例。收集同期本院收治的63例肝良性腫瘤患者作為良性腫瘤組，均經穿刺取病理組織活檢確診為良性腫瘤，其中肝細胞腺瘤21例，肝血管瘤26例，肝囊腫16例；男37例，女26例；年齡36～71歲，平均(52.65±7.49)歲。選擇同期在本院門診體檢的健康體檢者39例作為對照組，其中22例，女17例；年齡37～74歲，平均(53.75±7.03)歲。3組研究對象年齡、性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 采集所有受試者空腹外周靜脈血，3 000 r/min離心15 min，將上清液保存在—80 ℃低溫箱中待檢。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清sTRAIL、MMP-3水平，試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司。采用放射免疫法測定透明質酸(HA)、層黏連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原肽(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)水平，試劑盒購自上海雅吉生物科技有限公司。

2 結 果

2.1各組血清sTRAIL、MMP-3和肝纖維化指標比較 原發性肝癌組血清sTRAIL、MMP-3水平高于良性腫瘤組及對照組(P<0.05)；良性腫瘤組血清sTRAIL、MMP-3水平高于對照組(P<0.05)；原發性肝癌組肝纖維化指標HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平高于良性腫瘤組及對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；良性腫瘤組及對照組HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組血清sTRAIL、MMP-3和肝纖維化指標比較

2.2不同TNM分期原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3和肝纖維化指標比較 Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者血清sTRAIL、MMP-3和HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平依次升高，兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同TNM分期原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3和肝纖維化指標比較

2.3血清sTRAIL、MMP-3對原發性肝癌的診斷價值分析 sTRAIL、MMP-3、sTRAIL+MMP-3的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.686、0.730、0.806，靈敏度分別為0.857、0.731、0.846，特異度分別為0.562、0.698、0.650。見表3和圖1。

圖1 血清sTRAIL、MMP-3對原發性肝癌診斷的

表3 血清sTRAIL、MMP-3對原發性肝癌的診斷價值分析

2.4原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3和肝纖維化指標之間的相關分析 原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3和肝纖維化指標之間均呈正相關(r=0.501～0.651,P<0.05)。見表4。

表4 原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3和肝纖維化指標之間的相關分析

3 討 論

原發性肝癌是危及患者生命安全的常見惡性腫瘤，盡管目前臨床在其治療上取得了明顯進展，但由于此類疾病具有高度的惡性生物學行為，加上傳統外科手術及放化療等方法的局限性，原發性肝癌患者的預后較差。明確原發性肝癌發生、發展和肝內轉移機制，探討有效的防治手段有助于提高該疾病的療效。

相關研究報道，NK細胞誘導的細胞毒性作用可能由腫瘤壞死因子(TNF)超家族經受體-配體結合受體所致，在原發性肝癌發生、發展中有重要作用[6]。另有研究報道，sTRAIL為TNF超家族成員，廣泛表達于活化的NK細胞、T淋巴細胞等，可特異性誘導腫瘤細胞、轉化細胞出現凋亡，不影響正常組織細胞的凋亡功能，機體在病理狀態下sTRAIL可參與免疫反應，調控細胞凋亡[7]。因此，sTRAIL被證實參與機體腫瘤細胞凋亡、炎性反應等多種病理反應。本研究結果顯示，原發性肝癌患者血清sTRAIL水平明顯高于良性腫瘤組及對照組，說明原發性肝癌的病理損傷中存在sTRAIL誘導的細胞凋亡，可能是肝臟清除病毒及病理受損的機制之一。進一步分析顯示，Ⅲ期原發性肝癌患者血清sTRAIL水平較Ⅱ期和Ⅰ期患者明顯上升，提示隨著腫瘤分期的進展，血清sTRAIL水平相應上升。ROC曲線分析發現，血清sTRAIL對原發性肝癌診斷的AUC高于0.500，證實其在此類疾病中的診斷價值。

已有研究證實，腫瘤細胞侵襲細胞外基質為原發性肝癌發生的另一重要環節，腫瘤細胞侵襲突破基底膜后可誘導基底膜降解，在基質內快速侵襲性生長，從而促進腫瘤的轉移[8]。MMPs為內源性蛋白水解酶，正常狀態下其主要水解細胞外基質，并參與細胞的生成及代謝，維持細胞穩定性，病理狀態下其過度表達，達到浸潤組織及轉移癌細胞的目的。MMP-3能夠誘導降解構成細胞外基質及基底膜的LN、纖維連接蛋白等，促進腫瘤浸潤、轉移。本研究結果顯示，原發性肝癌組血清MMP-3水平較良性腫瘤組及對照組高，說明其在原發性肝癌中的表達明顯上調，可能是因為腫瘤細胞中MMP-3調節系統紊亂，從而增加降解細胞外基質的能力，促進新生血管形成及腫瘤侵襲能力，導致腫瘤惡性浸潤生長。以上結果說明，監測血清MMP-3水平能反映病灶的侵襲能力，預測原發性肝癌患者生存情況。另外，本研究發現，原發性肝癌Ⅲ期患者血清MMP-3水平明顯高于Ⅱ期和Ⅰ期患者(P<0.05)，提示通過測定血清MMP-3水平能夠反映腫瘤分期情況。ROC曲線也提示MMP-3對原發性肝癌有一定的診斷作用。

一方面，原發性肝癌患者需經歷長期的炎性反應及纖維化階段，單核細胞、巨噬細胞活化后可釋放大量的細胞因子及炎癥介質，通過旁分泌途徑誘導細胞增殖，導致成纖維細胞的增生，促進HA、LN的增加[9]。另一方面，肝實質細胞受損后可減少肝內細胞數量，對血清HA、LN的攝取及降解可引起纖維化指標水平異常上升，導致肝細胞發生持續的損傷、修復及增生，影響正常肝細胞的增殖，增加細胞變異可能性，從而誘導肝細胞癌。PCⅢ及Ⅳ-C由肝臟間質細胞合成，經內皮細胞分解，能夠客觀反映肝纖維化狀態，是反映肝纖維化生成的血清學指標[10]。本研究結果顯示，原發性肝癌組HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平較良性腫瘤組及對照組高，而良性腫瘤組及對照組HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平相似，說明原發性肝癌患者有明顯的肝纖維化傾向，考慮與大部分原發性肝癌患者具有慢性肝臟疾病史，肝纖維化水平上升，此類患者腫瘤包膜破壞、肝細胞受損程度及細胞外基質分解代謝活躍有關。本研究相關分析顯示，原發性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3水平與肝纖維化指標呈正相關，說明血清sTRAIL、MMP-3水平能夠在一定程度上反映肝纖維化程度。

綜上所述，血清sTRAIL、MMP-3可能參與原發性肝癌的發生、發展，且與肝纖維化指標水平呈正相關，對原發性肝癌的早期診斷有重要價值。但本研究樣本量較少，需進一步加大樣本量，減少隨機誤差再進行下一步研究，以增加結論可靠性。