實驗教學中“假”抗“O”試劑的制備和應用

王英 陳新君 張陽 崔秀吉

摘 要：為避免在抗鏈球菌溶血素“O”膠乳凝集試驗（抗“O”試驗）中使用臨床患者血清樣本以及降低實驗教學材料成本，以硫酸鋁鉀[KAl（SO4）2]溶液、牙膏溶液制備“假”抗“O”試劑，以此模擬實際抗“O”試驗應用于實驗教學。結果顯示“假”抗“O”試劑可產生明顯的凝集顆粒，達到預期的實驗結果，滿足教學目標和任務。因此，“假”抗“O”試劑在實驗教學中可替代商品化的抗“O”試驗試劑盒。此外，因制備“假”抗“O”試劑的成本遠低于商用化試劑盒，可實現大幅度節約教學實驗經費的效果。

關鍵詞：微生物實驗教學;抗鏈球菌溶血素“O”;硫酸鋁鉀

Abstract： To avoid using the clinical serum samples in the antistreptolysin“O”test（ASO）and reduce the cost of experiment in the microbiology experimental teaching，a“Fake”ASO kit was developed to replace the commercial antistreptolysin“O”latex agglutination（ASO）kit.The“Fake”ASO kit consisted of 0.8mg/ml of KAl（SO4）2solution and 20mg/ml of toothpaste.In results，the“Fake”ASO kit showed a predicted agglutinating phenomenon similar to the commercial ASO kit.Thus，the“Fake”ASO kit can be using for the ASO experiment in microbiology experimental teaching.

Key words： Microbiology experimental teaching;Anit-streptolysin O;KAl（SO4）2

鏈球菌溶血素O（streptolysin O，SLO）是A群鏈球菌代謝產物中的一種，具有很強的抗原性，能夠刺激機體免疫系統產生相應的抗體[1-2]。感染溶血性鏈球菌的病人中，約有85%～90%病人于感染后2～3周，甚至病愈后數月到1年內仍可以檢測出SLO抗體[3-5]。活動性風濕熱患者血清中的SLO抗體顯著高于正常人，其效價在1∶400以上，通常作為鏈球菌新近感染指標之一或風濕熱及其活動性的輔助診斷。抗鏈球菌溶血素“O”測定試驗（膠乳凝集法），又稱抗“O”試驗，因其具有方法簡便、快速等優點，臨床上使用越來越廣泛[2，6]。在我校醫學微生物學實驗課教學中，抗“O”試驗是醫學生必須掌握的實驗操作項目。在實際實驗教學過程中應使用臨床病人血清標本完成該實驗項目。但因臨床血清標本來源困難以及涉及生物安全問題，現階段實驗教學中以商品化抗“O”試驗試劑盒中的陽性對照液代替病人血清標本進行試驗。但試劑盒存在價格高、量少，且貨源不穩定的情況，所以不適合長期在實際實驗教學中使用。因此，尋找既經濟又可靠的陽性對照液的替代物對于保證該教學實驗項目的正常開出就顯得十分必要。

通過多次預試和反復實踐，KAl（SO4）2溶液（0.8mg/ml）和牙膏（20mg/ml）的溶液，即“假”抗“O”試劑，可替代商品化試劑盒應用于教學實踐，并取得預期實驗教學目的。

1 材料與方法

1.1 材料

KAl（SO4）2，分析純，購自天津市大茂化學試劑廠;牙膏，品牌黑妹，購自海口某超市;抗鏈球菌溶血素“O”膠乳凝集試驗試劑盒，購自上海捷門生物技術有限公司，批號190806。

1.2 方法

（1）0.8mg/mL KAl（SO4）2溶液的配制 稱取0.08g KAl（SO4）2完全溶解于100ml的蒸餾水中。

（2）20mg/mL牙膏溶液的配制稱取1g牙膏用少量蒸餾水研磨溶解，靜置1分鐘后，吸取上清液用蒸餾水定容至50ml。

（3）抗“O”試驗代替法預試驗按1∶1比例混合20mg/mL牙膏溶液和商品化抗“O”試劑盒中的膠乳試劑配成混合液，記為膠乳試劑R。取試劑盒中的一張反應紙板四個格子，標記有2，3，5，6。在每個格子中分別滴加1滴0.8mg/mL KAl（SO4）2溶液（模擬病人陽性血清標本）、1滴生理鹽水（模擬病人陰性血清標本）、1滴陽性對照液、1滴陰性對照液，再分別滴加1滴膠乳試劑R，然后用攪拌棒攪拌混勻，邊攪拌邊觀察實驗現象的變化。

2 結果與分析

完成抗“O”試驗流程后，5號格子，即陽性對照液（商品化試劑盒）和2號格子，即模擬病人陽性血清（KAl（SO4）2溶液）均在2分鐘之內出現凝集顆粒，但1號和4號格子沒有出現變化（如下圖）。肉眼觀察，商品化試劑盒中的陽性對照液和模擬病人陽性血清中產生的凝集現象相似，同時出現凝集得時間也相近。

兩種方法抗“O”試驗結果對比圖

3 結語

在醫學微生物學的實驗教學中，抗“O”試驗是重要的一個實驗項目。學生通過操作進一步掌握抗“O”試驗原理和臨床意義等鏈球菌的相關知識。但近年來，臨床血清標本，商品化試劑盒中陽性對照液的來源的困難和需求的日益增大，現有的商品化試劑盒無論在數量上還是經費上無法滿足教學需求。為了解決這一難題，保證教學項目的順利開展，通過反復實踐，研制出商品化抗“O”試驗試劑盒的替代方法，即采用濃度為0.8mg/ml KAl（SO4）2溶液和20mg/ml的牙膏溶液模擬商品化抗“O”試驗試劑盒。由于0.8mg/mL KAl（SO4）2溶液不能使試劑盒中的膠乳試劑發生凝集，所以在膠乳試劑中加入等量的20mg/mL牙膏溶液，其理由是牙膏中含有的羧甲基纖維素鈉可在酸性條件下沉淀，而0.8mg/ml的KAl（SO4）2溶液呈酸性，因此能使羧甲基纖維素鈉沉淀出現類似凝集顆粒[7，8]。羧甲基纖維素鈉是由天然纖維素經過化學改性得到的白色纖維狀或顆粒狀粉末，無臭、無味，為堿性的溶液。是常用于日用化學用品，如牙膏，中起到增強劑的作用，比較安全[9，10]。這種“假”抗“O”試劑的優點是：（1）容易獲取硫酸鋁鉀和牙膏，且用量小，能滿足教學大用量的需求;（2）成本低，商品化試劑盒中陽性標本的價格為25元/ml，每年需要要采購100～150mL，但本方法中使用的黑妹牙膏一支不足十元，而且能夠制備足夠的牙膏液供應大量學生使用，從實驗成本上大大節約了實驗經費。至于其他品牌牙膏是否也可用，需要進一步進行預實驗驗證;（3）安全，此法代替了血清標本的使用，因此不涉及生物安全問題。

綜上所述，“假”抗“O”試驗試劑可替代原有的抗“O”試劑盒，且具有經濟、安全、實驗結果滿足教學目標、簡便等優點，適用于國內各醫學院校醫學微生物學實驗室在進行ASO膠乳試驗教學材料的準備。

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