十二烷基二甲基芐基氯化銨的低溫殺菌效果

陳海蘭 劉心建

（山西焦煤運城鹽化集團有限責任公司，山西運城，044000）

2020年12月，我國多地陸續報道冷鏈物品外包裝新型冠狀病毒（COVID-19）核酸檢測陽性，通過冷鏈物品引發的新型冠狀病毒肺炎疫情時有發生。為解決全國疫情防控之急需，研究低溫消毒劑并確保低溫消毒效果成了各消毒劑生產企業的頭等大事之一。

十二烷基二甲基芐基氯化銨（1227），別名苯扎氯氨、潔而滅等，是一種廣譜、高效的陽離子殺菌劑，廣泛應用于醫療、紡織印染和水處理行業[1]。目前，有關1227的殺菌性能研究大都在常溫條件下進行[2-3]，事實上低溫狀態下消毒劑的消毒效果通常具有很大的不確定性[4]。為了解1227在低溫條件下的殺菌效果，筆者在-18℃條件下進行了實驗觀察，以期為從事低溫消毒劑開發的業內同仁提供參考。

1 實驗部分

1.1 材料和儀器

1227（50%，工業品），金黃色葡萄球菌（ATCC6538，第5代）和大腸桿菌（8099，第4代），牛血清白蛋白，胰蛋白胨生理鹽水溶液（TPS）稀釋液，中和劑為D/E中和肉湯，營養瓊脂培養基，平紋棉布片（10 mm×10 mm）。

生物安全柜、培養箱、恒溫器、電冰箱以及其他微生物實驗必備器材等。

1.2 實驗方法

（1）將1227用乙二醇和乙醇稀釋成濃度0.5%的溶液，然后放入-18℃冰箱中備用。

（2）將實驗菌株24 h營養瓊脂培養物，用TPS洗下菌苔，制成菌懸液。用3.0%牛血清白蛋白稀釋，使菌液的濃度約為5×108cfu/mL。取10 μL均勻涂抹于滅菌棉布片上，（36±1）℃恒溫培養箱中干燥后，放入-18℃冰箱中備用。

（3）采用載體浸泡定量殺菌實驗[5]。在無菌平皿中加入5.0 mL溶液（1），加入菌片（2）并使之浸沒于液體中。在-18℃條件下作用至設定時間（15、30、45 min）后，取出菌片移入含5.0 mL中和劑的試管中。中和作用10 min，混勻，取1.0 mL接種平皿，培養。同時以稀釋液代替1227溶液，做陽性對照實驗。結果以殺滅對數值表示，實驗重復3次，取其算術平均值。

2 結果與討論

2.1 中和劑鑒定

以金黃色葡萄球菌（ATCC6538）為實驗菌，對D/E中和肉湯的中和作用進行鑒定。實驗分為4組，第1組為中和劑+菌片，第2組為1227溶液+中和劑+菌片，第3組為稀釋液+菌片，第4組為稀釋液+中和劑+培養基。經3次重復實驗，結果見表1。

表1 中和劑鑒定實驗結果

從表1可以看出，3次重復實驗，每次實驗的第1組、第2組和第3組的實驗菌生長量均相似，且組間菌落數誤差率不超過15%；第4組均無菌生長。依據參考文獻[5]中和劑鑒定實驗評價規定，D/E中和肉湯對1227實驗溶液具有良好的中和作用，中和劑選擇合格。

2.2 殺菌能力

經3次重復實驗，在-18℃條件下，質量濃度為0.5%的1227對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌作用15 min，殺滅對數值均大于3.0，達到了《消毒技術規范》（2002版）的消毒合格水平[6]，結果見表2。

表2 1227對微生物的殺滅效果

3 結論

中和劑載體定量鑒定，-18℃條件下，D/E中和肉湯可有效中和質量濃度為0.5%的1227對金黃色葡萄球菌的殘留作用，且自身及其中和產物對培養基無不良影響，對實驗菌種的生長基本無影響。D/E中和肉湯可做1227實驗溶液對金黃色葡萄球菌載體浸泡定量殺菌實驗的中和劑。

載體浸泡定量殺菌實驗中，-18℃條件下，質量濃度為0.5%的1227對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌作用15 min，殺滅對數值均大于3.0，達到了《消毒技術規范》（2002版）的消毒合格水平，表現出了較高的殺菌效率，可以用于低溫消毒劑，在-18℃條件下使用。