液相色譜-串聯質譜法檢測水產品中磺胺類和喹諾酮類藥物殘留

殷素平

廣東省廣州市番禺區農產品質量監測所 廣東廣州 511450

磺胺類和喹諾酮類藥物均是常見的合成抗生素，廣泛存在于水產養殖中，且可以通過多種途徑積蓄到人體中，尤其是喹諾酮類藥物會殘留于人體破壞造血系統，進而導致溶血性貧血癥，嚴重時引發癌癥[1]。

1 試驗設計環節

所選用的高效液相色譜-串聯質譜法采購美國AB科技有限公司3200QTRAPLC/MS/MS。本次試驗所選擇的色譜柱型號為AgilentEdipsePlusC182.5mm×100mm，5μm，柱溫控制為35℃，流量控制為0.8ml/min，進取量設定為20μL。流動相為甲醇-1%甲酸5mmol乙酸銨，經過0-15min甲醇含量由最初的50%增加至90%，當甲醇比例達到90%時各個化合物的出峰效果達到最佳狀態，嚴格將流速設定為0.8ml/min。表1是具體的磺胺類和喹諾酮類的檢測離子與條件。

2 試驗操作環節

試驗過程中先將樣品解凍，在50ml的離心管中準確稱取5g的樣品，準確加入50μL混合內標標準工作液，加入10g的無水硫酸鈉攪拌，然后再加入乙腈渦旋混合，確保各種物質可以充分攪勻，最后10000r/min離心5min分離。上清液中緩緩倒入已經準備好的正已烷溶液，充分振蕩確保可以分層，提取下層的清液倒入至旋轉蒸發瓶中。此過程中需要注意的一點是，殘渣需要再進行一次提取，提取完成后合并兩次提取液到蒸發瓶中，確保蒸發近干，用1ml的流動相經渦流混合，過0.2μm濾膜，對濾液開展3200QTRAPLC/MS/MS分析[2]。

3 試驗結果分析

3.1 前處理條件的合理選擇

本次試驗發現，磺胺類化合物在酸性條件下溶解度較大，如果選用酸化乙腈加以提取則可以進一步提升提取效率。試驗時在旋蒸至2-3ml時加入10ml的無水乙醇，以便確保提取液可以蒸發至近干，經研究發現喹諾酮類藥物的提取效率較為穩定，重復性良好。

3.2 質譜條件的合理選擇

通過試驗發現，本次所選擇的5種化合物和2種內標均可以獲得較高的（M＋H）母離子，而通過調節毛管電壓和椎孔電壓，發現目標物質的信號響應能力可以達到最高。將乙腈、甲醇和0.1%甲酸的5mmol/l乙酸銨溶液、0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸的2mmol/l乙酸銨溶液作為流動相。試驗結果表明，當甲醇作為流動相時目標物的靈敏度可以大大提升，且所形成的峰形更好，而如果將0.1%甲酸溶液作為流動相時同樣可以得到良好的離子化效果。由此可以得出，在正離子模式下，最佳的質譜條件為乙醇和0.1%甲酸5mmol/l乙酸銨溶液溶液。

3.3 基質效應分析

本次試驗發現高效液相色譜-質譜法對磺胺類藥物基質有良好的抑制效應作用，這對于提升檢驗數據的真實性具有十分重要的意義。本次試驗采用內標法。在應用試劑配制標準溶液這一方法時，質量分數控制為4.0μg/kg，發現無法開展準確的定量，繼而將質量分數控制為10.0μg/kg，發現恩諾沙星與氘代環丙沙星的回收率均可以達到94.7-112%，但磺胺類藥物的回收率卻僅僅只達到20-50%，且重復性不佳。應用基質配制標準溶液這一方法時，先將質量分數控制為1.0μg/kg，發現回收率僅僅可以達到45-67%，重復性不佳。然后加入內標物，質量分數控制為0.20μg/kg，實際質量分數控制為0.163-0.255μg/kg，回收率可以達到87-120%。在應用向空白樣本中加入標準品這一方法時，發現在處理過程中待測物質均發生了不同程度的損失，尤其是本身含量較低的樣品損失更加明顯。

3.4 試驗所得結論

本次試驗通過應用高效液相色譜-串聯質譜法同時測定磺胺類及喹諾酮類共7種抗生素含量，以標準加入法開展定量分析，可以有效減小基質干擾，檢測準確率得到較大程度的提升，尤其是在回收率方面能力更加突出，實際應用效果較好，值得推廣。

表1 磺胺類和喹諾酮類的檢測離子與條件