菌血癥與免疫功能的相關(guān)性分析

牛彩紅 王淑春

摘要：抗生素和激素的廣泛應(yīng)用以及有創(chuàng)診療技術(shù)的發(fā)展，致使血液感染發(fā)病率逐漸升高，菌血癥是由致病菌侵入血液后所致的一種感染狀態(tài)，而菌血癥治療時(shí)間長(zhǎng)，費(fèi)用多，病死率高，危害極大，血培養(yǎng)是血液感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，即使陰性也不能除外感染，淋巴細(xì)胞亞群作為機(jī)體免疫功能的一個(gè)重要指標(biāo)，在病原菌感染后，會(huì)發(fā)生一系列數(shù)量和比例的變化。本研究選擇107例血培養(yǎng)患者，分析其外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化，找出其規(guī)律，為臨床對(duì)菌血癥的輔助診斷、治療提供理論依據(jù)。

【中圖分類號(hào)】R552 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2021）03-294-02

1.資料與方法

1.1.資料：本次研究選取2018年10月至2019年11月在本院住院同時(shí)進(jìn)行血培養(yǎng)陽(yáng)性及外周血淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定的患者107例，男68例，女39例，年齡18-70歲，平均年齡44±22歲，送檢血培養(yǎng)與淋巴細(xì)胞亞群送檢時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)，并選同期健康體檢人員36例作為健康對(duì)照組，男21例，女15例，平均年齡43±19歲。

1.2分組：按細(xì)菌生長(zhǎng)情況分為革蘭氏陰性細(xì)菌感染組（82例）、革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染組（25例），同時(shí)設(shè)健康對(duì)照組（36例）。

1.2.方法：

1.2.1試劑與儀器：美國(guó)BD公司BACTEC9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀及BD公司配套血培養(yǎng)瓶，美國(guó)BD公司PHOENIX-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)及原裝配套試劑，美國(guó)貝克曼公司FC-500流式細(xì)胞分析儀，稀釋液（COULTER ISOTON Ⅲ DILUENT），清洗液（COULTER CLENZ），四色復(fù)合試劑異硫氰酸鹽熒光素（FITC） 標(biāo)記的CD45、藻紅蛋白（PE）標(biāo)記的CD4、藻紅蛋白-得克薩斯紅（ECD）標(biāo)記的CD8、藻青蛋白5（PC5）標(biāo)記的CD3。雙色復(fù)合試劑FITC標(biāo)記的CD3、PE標(biāo)記的CD（16/56）。單色試劑PC5標(biāo)記的CD19，藻青蛋白7（PC7）標(biāo)記的CD45。

1.2.2血培養(yǎng)：靜脈采血16-20ml立即注入?yún)捬蹙托柩蹙囵B(yǎng)瓶各1瓶，每瓶8-10ml，并送實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室接受標(biāo)本編號(hào)、登記后，將血培養(yǎng)瓶置BD公司BACTEC9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中培養(yǎng);當(dāng)儀器陽(yáng)性報(bào)警時(shí)，用無(wú)菌注射器抽取培養(yǎng)液涂片、革蘭氏染色、鏡檢，根據(jù)染色鏡檢結(jié)果接種營(yíng)養(yǎng)血平板和/或巧克力平板，置于37℃孵育24h，待菌落形成后挑取單個(gè)菌落配成0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝痪褐肂D公司PHOENIX-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)對(duì)病原菌鑒定，另取菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢確認(rèn)。

1.2.3.淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：靜脈采集外周血2 ml加入EDTA-K2抗凝管中。 取兩管分別標(biāo)記T、B&NK，分別加入抗凝血100ul，T系四色熒光素抗體20ul加入T管;CD45、 CD19、CD3單色熒光素抗體，CD16/56 單色熒光素雙抗體各20ul加入B&NK管。兩管輕輕混勻，避光染色15min后，均再加入500ul裂解液混勻，避光10min取出，300g離心5min，棄去上清液，加2ml0.01MPBS液洗滌，離心棄去上清液，再加入0.5ml0.01MPBS混勻，上流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、CD8淋巴細(xì)胞、4/8比值、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞百分含量。

1.3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

本次107例患者血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果中，革蘭氏陰性菌感染組患者總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8、B淋巴細(xì)胞百分含量較健康對(duì)照組明顯升高（P<0.05）。革蘭氏陽(yáng)性菌感染組總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8比值與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。與革蘭氏菌陽(yáng)性組比較，革蘭氏陰性菌總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8比值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）組見附表。

3.討論

淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫反應(yīng)中主要作用細(xì)胞。機(jī)體在正常情況下，各淋巴細(xì)胞亞群保持一定的數(shù)量和比例，協(xié)同調(diào)節(jié)，實(shí)現(xiàn)機(jī)體免疫功能正常運(yùn)行。而當(dāng)病原微生物侵入機(jī)體時(shí)，免疫應(yīng)答會(huì)使淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量或功能發(fā)生變化，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能失調(diào)。外周血中總T淋巴細(xì)胞，其表面的CD3分子參與T淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原，介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。T4淋巴細(xì)胞也稱誘導(dǎo)/輔助性T淋巴細(xì)胞，具有輔助B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生淋巴因子，增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答。

T8淋巴細(xì)胞包括抑制性/細(xì)胞毒性細(xì)胞，具有直接殺傷感染微生物的靶細(xì)胞的功能。4/8比值是監(jiān)測(cè)人體細(xì)胞免疫功能，反應(yīng)機(jī)體免疫狀態(tài)的主要指標(biāo)，用于評(píng)價(jià)免疫失調(diào)、免疫狀態(tài)、以及免疫系統(tǒng)的損害程度。B淋巴細(xì)胞表達(dá)和分泌免疫球蛋白，執(zhí)行體液免疫以清除病原微生物。NK細(xì)胞屬自然殺傷細(xì)胞，具有抗感染、免疫調(diào)節(jié)等功能。

本研究中，革蘭氏陰性組和革蘭氏陽(yáng)性組總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8比值較健康對(duì)照組明顯升高，說(shuō)明菌血癥患者在病原菌侵入血液后，機(jī)體免疫功能失調(diào)，動(dòng)態(tài)平衡紊亂，細(xì)胞免疫功能反應(yīng)性增強(qiáng)。革蘭氏陰性細(xì)菌感染組患者總T淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞、4/8、B淋巴細(xì)胞百分含量較健康對(duì)照組明顯升高，表示機(jī)體感染革蘭氏陰性菌后，以細(xì)胞免疫為代表的CD4細(xì)胞異常活化，反應(yīng)性增殖，介導(dǎo)體液免疫的B淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)，說(shuō)明機(jī)體此時(shí)細(xì)胞免疫和體液免疫同時(shí)對(duì)非己抗原誘發(fā)的免疫應(yīng)答，在對(duì)抗病原菌過(guò)程發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染組中T4淋巴細(xì)胞、4/8比值均高于對(duì)照組，但增高幅度不及革蘭氏陰性組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明機(jī)體此時(shí)以細(xì)胞免疫為主，但免疫反應(yīng)革蘭氏陰性菌組強(qiáng)于革蘭氏陽(yáng)性菌組，考慮為革蘭氏陽(yáng)性菌組以葡萄球菌為主，革蘭氏陽(yáng)性組以桿菌為主，球菌對(duì)機(jī)體刺激反應(yīng)弱于桿菌，這也可能與病例少有關(guān)系，是本研究的不足之處，還有待在后續(xù)工作中進(jìn)一步的研究改進(jìn)提高。

在淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)中影響因素眾多，如機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況，維生素和微量元素水平、體質(zhì)等，[2-5]但是在血培養(yǎng)患者中由于淋巴細(xì)胞亞群的異常活化，導(dǎo)致了免疫功能的紊亂，在臨床治療過(guò)程中，應(yīng)加強(qiáng)免疫功能調(diào)節(jié)，適度使用免疫調(diào)節(jié)劑（如糖皮質(zhì)激素、免疫球蛋白、匹多莫德等）進(jìn)行治療，盡快平衡患者的淋巴細(xì)胞亞群比例，有助于促進(jìn)病情恢復(fù)，縮短病程，減少并發(fā)癥。

參考文獻(xiàn)

[1]World Health Organization，Prevention of hospital-acquired infections：a practical guide[M].2nd ed.Geneva：World Health Organization，2002

[2]蔣利平，楊錫強(qiáng)，李成榮等.兒童血清免疫球蛋白G亞類缺陷及其與反復(fù)呼吸道感染的關(guān)系[J].中華兒科雜志，1990.28（2）：79-81

[3]Singh M.Recurrent lower respiratory tract infections in children[J].Indian I Pediatr，1999，66（6）：887-893

[4]趙黎光，馬凱，反復(fù)呼吸道感染與微量元素的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，3（18）：62

[5]Brook I，Shah K.Bacteriology of adenoids and tonsils in children with recurrent adenotonsillitis[j].Ann Otol Rhinol Laryngol，2001，110（9）：844-848.

山西省陽(yáng)泉市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 045000