黔產黃苞大戟中1個新的megastigmane糖苷

杜彩霞，易 平，陳俊磊，熊 燕，張嘉瑜，黃烈軍，苑春茂，郝小江*，顧 瑋*

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黔產黃苞大戟中1個新的megastigmane糖苷

杜彩霞1, 2, 3，易 平1, 2，陳俊磊1, 2，熊 燕1, 2，張嘉瑜1, 2，黃烈軍1, 2，苑春茂1, 2，郝小江1, 2*，顧 瑋1, 2*

1. 貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室，貴州 貴陽 550014 2. 貴州醫科大學 省部共建藥用植物功效與利用國家重點實驗室，貴州 貴陽 550014 3. 畢節醫學高等專科學校，貴州 畢節 551700

研究黔產黃苞大戟的化學成分。采用正相硅膠、RP-C18、HPLC、Sephadex LH-20等色譜技術對黃苞大戟化學成分進行分離純化，并運用NMR、MS等現代譜學技術進行化學結構鑒定。從黃苞大戟80%乙醇提取物中分離鑒定出5個化合物，分別鑒定為(6,9)-布盧姆醇-6′--沒食子酸酯（1）、(6,9)-布盧姆醇-6′--沒食子酸酯（2）、-kaurane-3-oxo-16β-17-diol（3）、-16α,17-dihydroxy-atisan-3-one（4）、短葉蘇木酚酸甲酯（5）。化合物1為新的megastigmane糖苷類化合物，命名為黃苞大戟苷A；化合物2～5首次從黃苞大戟中分離得到。

黃苞大戟；megastigmane糖苷；黃苞大戟苷A；(6,9)-布盧姆醇-6′--沒食子酸酯；短葉蘇木酚酸甲酯

黃苞大戟Boiss.是大戟科大戟屬植物的多年生草本植物，又名草藺如、水黃花、刮金板、粉背刮金板、中尼大戟。產于我國廣西、貴州、四川、西藏、湖北、云南。生于海拔600～4500 m的山坡、灌叢或疏林下。主要用于治療小兒黃水疥、水腫、水臌[1]。黃苞大戟在貴州分布廣泛，多個少數民族均有記載其用法，苗族將其煎水服用于治療便秘；布依族將其與蜂蜜、一支箭一起煎水服用于治療水臌病；仡佬族將其與燈心草、刺五加、菖蒲、茜草等一起配伍煎水服治療水急病[2]。據報道，黃苞大戟中主要有萜類、黃酮類、多酚類等化學成分[3-6]，現代藥理研究表明，黃苞大戟具有抗腫瘤、抗艾滋病毒的作用[3-4]。作為一種重要的苗藥資源，目前國內外對于黃苞大戟的化學成分和功效的研究報道較少，因此對其化學成分和藥理活性進行系統研究，可以更深入的闡明該植物的藥效物質基礎，為該植物的開發應用提供科學依據。本實驗對黔產黃苞大戟全草進行了化學成分研究，共分離得到5個化合物，分別鑒定為(6,9)-布盧姆醇-6′--沒食子酸酯 [(6,9)-blumenol-6′--gallate，1]、(6,9)-布盧姆醇-6′--沒食子酸酯 [(6,9)- blumenol-6′--gallate，2]、-kaurane-3-oxo-16β- 17-diol（3）、-16α,17-dihydroxy-atisan-3-one（4）、短葉蘇木酚酸甲酯（methyl brevifolincarboxylate，5）。化合物1為1個新的megastigmane糖苷類化合物，命名為黃苞大戟苷A（sikkimenside A），化合物2～5首次從黃苞大戟中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker Avance NEO 600MHz超導核磁共振儀（德國Bruker公司）；HITACHI高效液相色譜儀Primaide （日本日立公司）；Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（半制備柱，250 mm×9.4 mm，5 μm，美國安捷倫公司）；QE Focus型串聯四極桿飛行時間液質譜聯用儀（賽默飛世爾科技有限公司）；Chirascan 型圓二色譜儀（英國應用光物理公司）；EYELA-1100型旋轉蒸發儀（日本東京理化器械株式會社）；40～80目和200～300目柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；反相填充材料RP-C18（25～40 μm，德國默克公司）；Sephadex LH-20凝膠（Pharmacia公司）；甲醇、石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯等試劑購買于天津市富宇精細化工有限公司；色譜甲醇（上海星可高純溶劑有限公司）。

黃苞大戟樣品2017年5月采自貴州省黔東南苗族侗族自治州，經貴州省中國科學院天然產物重點實驗室顧瑋副研究員鑒定為黃苞大戟Boiss.，憑證標本（HGK-2015-25）存放于貴州省中國科學院天然產物重點實驗室。

2 提取與分離

黃苞大戟（19 kg）粉碎后用80%乙醇回流提取4次，每次分別提取4、3、3、2 h，濾過，合并提取液，減壓濃縮后將浸膏（2 kg）分散于水中，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。將各個部位萃取液濃縮，得到石油醚部位（230 g），醋酸乙酯萃取部位（350 g），正丁醇部位（523 g）。醋酸乙酯部位首先通過正相硅膠柱色譜（40～80目），二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，經薄層色譜（TLC）分析合并相似流分Fr. 1～18。

Fr. 2首先經過RP-C18柱色譜，水-甲醇（60∶0→0∶100）梯度洗脫，其次經過Sephadex LH-20凝膠[二氯甲烷-甲醇（1∶1）]發現有結晶洗出，最后將其結晶洗出后通過HPLC半制備色譜分離[水-甲醇（30∶70）]，得到化合物3（R＝37.7 min，4.3 mg），4（R＝41.4 min，5.5 mg）。Fr. 3經反復硅膠柱色譜（200～300目）后經過Sephadex LH-20凝膠分離得到化合物5（28.2 mg）。Fr. 5首先經RP-C18分段，其次反復通過硅膠柱色譜（200～300目）分離得到化合物1和2的混合物，最后經HPLC半制備色譜分離[水-甲醇（40∶60）]，得到化合物1（13.1 mg，R＝36.5 min）和2（23.5 mg，R＝41.4 min）。

3 結構鑒定

表1 化合物1和2的波譜數據

圖1 化合物1的關鍵HMBC和1H-1H COSY相關

通過化合物1和2的ROSEY譜（圖2）可以看出，化合物1中，H-6和H-8、H-12相關；化合物2中，H-6和H-11、H-12相關，H-7和H-12相關，H-8和H-10相關，H-和H-13相關。但H-6所處的位置特殊，鄰位是2個甲基 (C-11、C-12)、1個季碳 (C-1)、1個CH2(C-7)，所以仍不能確定其絕對構型。進一步通過化合物1和2的ECD計算證明二者計算值分別與實驗值的吻合度良好（圖3），從而最終確定化合物1和2的絕對構型。故最終鑒定化合物1為(6,9)-布盧姆醇-6′--沒食子酸酯，命名為黃苞大戟苷A（sikkimenside A）。化合物2為(6,9)-布盧姆醇-6′--沒食子酸酯。結構見圖4。

化合物3：白色粉末，TLC檢測，噴霧10%硫酸乙醇試液顯紫紅色，ESI-MS: 343.4 [M＋Na]+，分子式為C20H32O3。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 3.51 (1H, d,= 10.8 Hz, H-17α), 3.42 (1H, d,= 10.8 Hz, H-17β), 2.51 (1H, dd,= 8.4, 6.6 Hz, H-2), 2.13 (1H, m, H-1α), 2.07 (1H, m, H-13α), 1.98 (1H, m, H-14α), 1.42～1.64 (8H, m, H-6, 7, 11, 12), 1.24 (1H, d,= 9.0 Hz, H-9β), 1.10 (3H, s, H-20), 1.09 (3H, s, H-18), 1.04 (3H, s, H-19)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 37.8 (C-1), 34.1 (C-2), 218.3 (C-3), 47.14 (C-4), 55.6 (C-5), 21.2 (C-6), 39.3 (C-7), 43.3 (C-8), 54.3 (C-9), 38.5 (C-10), 19.3 (C-11), 26.6 (C-12), 40.6 (C-13), 40.8 (C-14), 52.2 (C-15), 79.7 (C-16), 69.8 (C-17), 27.3 (C-18), 21.0 (C-19), 17.6 (C-20)。以上數據同文獻對比一致[8]，故鑒定化合物3為- kaurane-3-oxo-16β-17-diol。

圖2 化合物1和2的選擇性1H-1H ROSEY相關

圖3 化合物1和2的ECD譜

圖4 化合物1和2的結構

化合物4：白色粉末，TLC檢測，噴霧10%硫酸乙醇試液顯紫紅色，ESI-MS: 343.4 [M＋Na]+，分子式為C20H32O3。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 3.60 (1H, d,=10.8 Hz, H-17α), 3.47 (1H, d,= 10.8 Hz, H-17β), 2.60 (1H, m, H-2), 2.33 (1H, m, H-2), 2.03 (1H, m, H-11α), 1.87 (1H, m, H-14′), 1.85 (1H, m, H-1β), 1.82 (1H, m, H-12), 1.63 (1H, m, H-13′), 1.49 (1H, m, H-13), 1.47 (1H, m, H-6α), 1.46 (1H, m, H-6β), 1.42 (1H, m, H-7β), 1.37 (1H, m, H-1α), 1.31 (1H, m, H-9) , 1.29 (1H, m, H-5), 1.24 (1H, m, H-11β), 1.23 (1H, m, H-15′), 1.13 (3H, s, H-20), 1.10 (3H, s, H-18), 1.06 (3H, s, H-19), 0.82 (1H, m, H-14)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 38.0 (C-1), 34.1 (C-2), 217. 6 (C-3), 47.6 (C-4), 55.7 (C-5), 19.6 (C-6), 38.7 (C-7), 32.9 (C-8), 50.9 (C-9), 37.2 (C-10), 23.0 (C-11), 32.1 (C-12), 23.2 (C-13), 27.2 (C-14), 52.5 (C-15), 74.1 (C-16), 69.0 (C-17), 26.2 (C-18), 21.6 (C-19), 13.5 (C-20)。以上數據與文獻對比基本一致[9]，故鑒定化合物4為-16α,17- dihydroxy-atisan-3-one。

化合物5：淡黃色粉末，TLC檢測，噴霧10%硫酸乙醇試液顯黑色，ESI-MS: 329.2 [M＋Na]+，分子式C14H10O8。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 7.29 (1H, s, H-7), 4.42 (1H, dd,= 2.0, 7.7 Hz, H-9), 3.63 (3H, s, OCH3), 2.98 (1H, dd,= 7.7, 18.7 Hz, H-10a), 2.47 (1H, dd,=2.0, 18.7 Hz, H-10b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 145.9 (C-2), 138.5 (C-3), 112.9 (C-3a), 143.7 (C-4), 140.6 (C-5), 149.7 (C-6), 108.1 (C-7), 115.1 (C-7a), 160.2 (C-8), 40.6 (C-9), 37.0 (C-10), 52.1 (OCH3)。以上數據經文獻對比一致[10]，故鑒定化合物5為短葉蘇木酚酸甲酯。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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A new megastigmane glycoside fromfrom Guizhou Province

DU Cai-xia1, 2, 3, YI Ping1, 2, CHEN Jun-lei1, 2, XIONG Yan1, 2, ZHANG Jia-yu1, 2, HUANG Lie-jun1, 2, YUAN Chun-mao1, 2, HAO Xiao-jiang1, 2, GU Wei1, 2

1. Key Laboratory of Chemistry of Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences, Guiyang 550014, China 2. State Key Laboratory of Functions and Applications of Medicinal Plants, Guizhou Medicinal University, Guiyang 550014, China 3. Bijie Medical College, Bijie 551700, China

To study the chemical constituents of.The chemical constituents were isolated and purified by column chromatography,RP-C18, HPLC and Sephadex LH-20, and their chemical structures were elucidated on the basis of 1D-NMR, 2D-NMR, and MS data.Five compounds were isolated fromand identified as (6,9)-blumenol-6′--gallate (1), (6, 9)-blumenol-6′--gallate (2),-kaurane-3-oxo 16β-17-diol (3),-16α, 17-dihydroxy- atisan-3-one (4) and methyl brevifolincarboxylate (5).Compound 1 is a new megastigmane glycoside, named sikkimenside A, compounds 2—5 are isolated fromfor the first time.

Boiss.; megastigmane glycoside; sikkimenside A; (6,9)-blumenol-6′--gallate; methyl brevifolincarboxylate

R284.1

A

0253 - 2670(2021)08 - 2205 - 05

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.08.002

2020-12-03

國家自然科學基金資助項目（U1812403）；國家自然科學基金資助項目（31860074）；貴州省科技計劃項目（黔科合支撐[2018]2799號）

杜彩霞，女，碩士，研究方向為天然藥物化學。E-mail: 1370809176@qq.com

顧 瑋，女，博士，副研究員，研究方向為民族藥物化學。E-mail: guwei2009@126.com

郝小江，男，博士，研究員，研究方向為化學生物學。E-mail: haoxj@mail.kib.ac.cn

[責任編輯 王文倩]