希森美康XN9000 血細胞分析流水線復(fù)檢規(guī)則的制定與評估

郭曉聰，章梁君，郭小龍，華浩東，鐘輝秀

隨著醫(yī)院實驗室標(biāo)本量的與日俱增，工作量越來越大，原來的單機血常規(guī)儀器的檢測速度已不能滿足科室大批量標(biāo)本的檢測。越來越多的實驗室開始引進全自動血細胞分析流水線。筆者所在實驗室近期也引進了希森美康XN9000 全自動血細胞分析流水線，包括2 臺XN9000 全自動血細胞分析儀，一臺SP10 全自動推片機及1 臺完全模擬顯微鏡分類技術(shù)的 DI60 閱片機，并配套 laboman6.0 中文軟件系統(tǒng)。流水線不僅提高了測試速度，且具有推片、閱片功能，節(jié)約了人力成本。但是再精密的血細胞分析儀器也不能完全代替人工形態(tài)鏡檢，某些特定疾病還是需要人工鏡檢予以輔助和驗證［1］。生產(chǎn)商結(jié)合國際血液學(xué)復(fù)檢專家組推薦的41 條復(fù)檢規(guī)則與自身儀器特點，向該實驗室推薦了20 條復(fù)檢規(guī)則。原則上既不能漏檢惡性疾病，將假陰性率控制在5%的可接受范圍，也不能讓復(fù)檢率太高，降低工作效率。為保證此復(fù)檢規(guī)則的正確性，筆者根據(jù)驗證結(jié)果制定出該實驗室血細胞分析的復(fù)檢規(guī)則。

1 資料與方法

1.1 樣本來源收集筆者醫(yī)院2019-08-04—2019-10-02 的EDTA-K2 抗凝的靜脈全血標(biāo)本300份，包含住院（含臨床各科室，其中血液科64 例，腫瘤科49 例）、門診、體檢標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑SYSMEX XN9000 全自動血細胞分析流水線，配套LABOMAN6.0 中文軟件系統(tǒng)，配套試劑，校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。奧林巴斯顯微鏡2 臺。

1.3 驗證方法

1.3.1 樣本檢測 將生產(chǎn)商所提供的復(fù)檢規(guī)則（表1）錄入 XN9000 的 laboman6.0 軟件中。使用希森美康原裝校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器，室內(nèi)質(zhì)控在控。所有標(biāo)本嚴格按照儀器標(biāo)準(zhǔn)操作程序進行檢測，儀器結(jié)果只要觸及了復(fù)檢規(guī)則中的任何一條即為儀器陽性。

1.3.2 涂片鏡檢 每份標(biāo)本檢測完成后立即制作血涂片3 張，其中2 張分別由一位主任檢驗師和一位主管檢驗師進行人工分類計數(shù)和形態(tài)檢查，另一張備用。鏡檢陽性判定標(biāo)準(zhǔn)參照2008 年中國血細胞分析復(fù)審協(xié)作組制定的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行（表2）。兩位檢驗師分別分類計數(shù)200 個白細胞，并同時觀察白細胞、紅細胞、血小板的形態(tài)、有無血小板聚集、瘧原蟲等。觀察到表2 中的任意一條即判讀為陽性，若兩位檢驗者的結(jié)果不一致，則由第三位檢驗者再做分類計數(shù)，取兩個相同的結(jié)果為最終鏡檢判讀結(jié)果。

表1 SYSMEX XN9000 血液分析流水線廠家推薦復(fù)檢規(guī)則

表2 涂片鏡檢陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.3 評估驗證 以鏡檢結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，對儀器的復(fù)檢規(guī)則進行評估。利用microsoft ecxel 2013 進行統(tǒng)計學(xué)處理，計算sysmex XN9000 流水線在該復(fù)檢規(guī)則下檢測此300 份樣本的真陽性率，假陽性率，真陰性率和假陰性率。查看假陰性率是否＜5%。

2 結(jié) 果

統(tǒng)計結(jié)果見表3。

表3 復(fù)檢規(guī)則驗證結(jié)果（n=300）

2.1 驗證結(jié)果假陰性率為 14.3%，復(fù)檢率為28%。假陰性遠大于國際血液學(xué)專家組確定的5%的最大可接受限，該規(guī)則并不適用于該實驗室，需要重新修改規(guī)則并再次進行驗證。

2.2 原因分析9 例假陰性標(biāo)本中，鏡檢發(fā)現(xiàn)幼稚粒細胞5 例，儀器結(jié)果未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則；2 例為中性粒細胞比率，儀器結(jié)果均為78%未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則，而鏡檢結(jié)果分別為81%和83%；1 例為鏡下見血小板聚集而儀器未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則； 還有1 例鏡下異型淋巴細胞高達12%而儀器未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則。可見有幼稚粒細胞的標(biāo)本是造成此復(fù)檢規(guī)則假陰性偏高的主要原因，應(yīng)該將有未成熟顆粒報警（儀器IG 參數(shù)）這條加入到復(fù)檢規(guī)則，以避免漏篩此類標(biāo)本。同時將白細胞計數(shù)和MCV 的復(fù)檢限略微下調(diào)，以降低復(fù)檢率，重新設(shè)定的復(fù)檢規(guī)則如表4。

表4 修改后 SYSMEX XN9000 血液分析流水線計數(shù)與分類復(fù)檢規(guī)則

2.3 修改后復(fù)檢規(guī)則驗證結(jié)果修改規(guī)則后重復(fù)以上驗證步驟，驗證結(jié)果見表5。據(jù)統(tǒng)計顯示，該規(guī)則驗證結(jié)果復(fù)檢率為23.3%，假陰性率為4.0%，小于國際血液學(xué)專家組確定的5%的最大可接受限。2例假陰性標(biāo)本中1 例為PLT 聚集，1 例為中性粒細胞77%，嗜酸性粒細胞8%未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則，而鏡檢結(jié)果中性粒細胞82%，嗜酸性粒細胞4%。無惡性疾病漏檢。此規(guī)則滿足該實驗室的復(fù)檢要求，可應(yīng)用于臨床。

表5 修改后復(fù)檢規(guī)則驗證結(jié)果（n=300）

3 討 論

近年來，許多儀器廠家相繼推出了自己的血細胞分析流水線。它不僅能提高檢測效率，還同時具備制備血片和閱片功能。據(jù)報道，自動數(shù)字細胞圖像分析技術(shù)預(yù)分類外周血白細胞與人工再分類中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞的符合率可達到90%以上，嗜堿性粒細胞的符合率可達80%以上，未成熟粒細胞、有核紅細胞符合率僅有 55%左右［2，3］。由此可見，雖然多數(shù)類別細胞的正確識別率很高，但是也有部分細胞無法正確辨別。人工顯微鏡復(fù)檢細胞形態(tài)仍然是不可替代的形態(tài)檢查手段。鑒于此，驗證血細胞分析儀的復(fù)檢規(guī)則必須由有經(jīng)驗的主管技師以上的工作人員通過人工顯微鏡檢查來完成。希森美康XN9000 流水線已經(jīng)過多家實驗室大批量標(biāo)本的驗證，并且已經(jīng)在很多實驗室成熟應(yīng)用［4］。但是引用到實驗室時仍需要根據(jù)自身實驗室的要求對廠家的復(fù)檢規(guī)則進行驗證。

該研究采取雙盲法人工顯微鏡檢查法對希森美康XN9000 血細胞分析儀流水線廠家推薦的20條復(fù)檢規(guī)則進行驗證。驗證結(jié)果顯示復(fù)檢率為28%，假陰性率高達14.3%，遠高于國際血液學(xué)專家組確定的5%的最大可接受限定。對假陰性結(jié)果進行分析，發(fā)現(xiàn)其主要原因為有幼稚粒細胞的標(biāo)本（儀器的IG 參數(shù)），儀器有報警提示，但沒有將這條提示作為復(fù)檢規(guī)則。因此，復(fù)檢規(guī)則中需要增加IG這一條以降低假陰性，篩選出有幼稚粒細胞的標(biāo)本。同時將白細胞計數(shù)和MCV 的復(fù)檢下限略微下調(diào)，以降低復(fù)檢率。調(diào)整規(guī)則后重新驗證，結(jié)果顯示復(fù)檢率為23.3%，假陰性率為4.0%，同時假陰性中未漏檢原始細胞，該規(guī)則驗證通過。

隨著全自動血細胞分析儀的不斷發(fā)展，儀器在鑒別細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)方面的能力也得到很大改進。希森美康XN9000 全自動血細胞分析儀對白細胞分類通道的試劑和分析系統(tǒng)進行了改良，能更清晰的區(qū)分單核細胞群和淋巴細胞群，減少單核細胞和淋巴細胞的復(fù)檢率。WNR 通道增加有核紅細胞報告參數(shù)，可自動修正白細胞計數(shù)和分類，降低復(fù)檢率并防止漏檢［5，6］。即便如此，為了避免病理標(biāo)本的漏檢及錯誤報告的發(fā)放，實驗室仍必須要執(zhí)行人工鏡檢。要想盡可能的平衡工作的質(zhì)量和效率，就需要制定一個準(zhǔn)確的、合適的復(fù)檢規(guī)則。這其中，假陰性率是制定復(fù)檢規(guī)則的關(guān)鍵參數(shù)，具有診斷意義的重要參數(shù)不能出現(xiàn)假陰性，其他參數(shù)的假陰性率應(yīng)該小于國際血液學(xué)復(fù)審協(xié)作組認定的5%的最大可接受限［7］。該驗證顯示，儀器商沒有將儀器的 IG 參數(shù)設(shè)定為復(fù)檢規(guī)則，導(dǎo)致出現(xiàn)了過多的假陰性病例；同時白細胞總數(shù)的復(fù)檢低限設(shè)置偏高導(dǎo)致了復(fù)檢率過高。調(diào)整后的復(fù)檢規(guī)則經(jīng)再次驗證后，假陰性和復(fù)檢率都能到達要求，實驗室最終確定了這21條復(fù)檢規(guī)則。