妊娠期糖尿病SH2B1基因突變篩查及對產后糖代謝轉歸的影響研究

陳秋霞，汪洪林，黃贊怡，趙振東

(海南省婦女兒童醫學中心，1.婦產科，2.檢驗科，海南 ?？?570206)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是臨床中較為常見的妊娠期間糖代謝異常，但不包括孕前已存糖尿病前期甚至糖尿病[1]。近年來隨著我國人民生活方式和社會經濟的發展和改變，我國GDM的臨床發病率呈現明顯增加趨勢，該病對母兒健康安全造成嚴重威脅[2]。研究發現GDM會引起多種孕期或圍產期并發癥，且影響因素并不因妊娠終止而結束[3]，患者可能出現產后代謝綜合征、糖尿病、心血管疾病等多種疾病[4]。SH2銜接蛋白(SH2 adaptor protein，SH2B1)是體內重要的信號分子，在體內參與胰島素、瘦素等多種生物活性物質的調控[5]。流行病學調查結果顯示，血脂代謝與糖尿病的發生和發展關系密切，而肥胖、胰島素抵抗、核苷酸多態性等因素均與SH2B1密切相關[6]，但SH2B1與GDM的關系仍未見報道，因而本研究選擇GDM患者作為研究對象，分析SH2B1基因突變的發生情況及研究基因突變對產后糖代謝轉歸的影響。

1資料與方法

1.1研究對象

選擇2017年1月至12月期間海南省婦女兒童醫學中心收治的36例GDM患者作為觀察組，并選擇40例糖耐量正常孕婦作為對照組。入選標準：①患者臨床資料完整；②孕前無糖尿病病史；③分娩孕周39～42周；④肝腎功能檢查資料完整，未合并器質性臟器疾??；⑤受試者對本研究知情并簽署知情同意書。排除標準：①合并其他妊娠期合并癥；②有慢性病疾病史；③免疫系統功能異常；④合并內分泌系統疾??；⑤臨床或隨訪資料缺失，或主動申請退出本研究。觀察組孕婦年齡24～38歲，平均(27.91±5.13)歲，分娩孕周39～41周，平均(39.89±1.32)周，產前身體質量指數(body mass index，BMI)25.93～28.84 kg/m2，平均(27.09±0.74)kg/m2，身高1.54～1.73m，平均(1.63±0.08)m，對照組孕婦年齡24～39歲，平均(27.58±4.85)歲，分娩孕周39～43周，平均(39.47±1.28)周，產前BMI 25.27～28.91 kg/m2，平均(27.13±0.65)kg/m2，身高1.51～1.75m，平均(1.63±0.09)m，兩組受試者一般臨床資料比較差異均無統計學意義(均P>0.05)，分組合理，具有可比性。本研究經我院倫理委員會審議并批準，所有研究對象知情本研究并簽署知情同意書。

1.2方法

所有受試者入組后采集空腹靜脈血2mL，采用DNA快速抽提試劑盒提取基因組RNA，利用紫外分光光度計分析DNA純度和濃度，要求紫外分光光度計的A260/A280≥1.8則判定為符合標準，置于-80℃冰箱中保存。使用Primer軟件設計SH2B1基因引物，正向和反向引物序列分別為：5′-CTGAGCATGCGTAACTACGCTCGTGCATACGGTC-3′和5′-TCGTACTAAACGCAGCACCGATCA-3′。后采用PCR法擴增目標基因，后取10μL的PCR產物使用瓊脂糖凝膠電泳分離基因，并交由南京金斯瑞生物科技有限公司完成測序。對GDM患者隨訪3年，收集一般病歷資料以及糖、脂代謝等實驗室檢查指標，包括空腹血糖(fasting plasma glucose，FPG)、空腹胰島素(fasting insulin，FINS)、葡萄糖耐量試驗(glucose challenge test，GCT)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、瘦素(leptin)。記錄產后3年2型糖尿病(type 2 diabetes，T2DM)的逐年發病率，發生T2DM記為不良預后，未發生則計為預后良好。

1.3統計學方法

2 結果

2.1 SH2B1基因突變檢測結果

觀察組患者SH2B1基因突變率為27.78%(10/36)，對照組參與者SH2B1基因突變率為10.00%(4/40)，觀察組患者SH2B1基因突變率顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組參與者SH2B1基因突變檢測結果比較[n(%)]

2.2 GDM患者SH2B1基因突變組與未突變組患者生化指標檢測結果

將GDM患者根據SH2B1基因是否突變分為突變組(n=10)和未突變組(n=26)，比較兩組患者的生化指標檢測結果。SH2B1基因突變的GDM患者FPG、TG水平顯著高于未突變組，而Leptin水平顯著低于未突變組，差異均存統計學意義(均P<0.05)，但兩組患者GCT、TC、HDL-C、LDL-C、FINS水平比較差異均無統計學意義(均P>0.05)，見表2。

表2 GDM患者SH2B1基因突變組與未突變組生化指標檢測結果比較

2.3不同產后轉歸GDM患者基因突變調查結果

GDM患者不良預后組SH2B1基因突變率為62.50%，預后良好為17.86%，不良預后組SH2B1基因突變率顯著高于預后良好組(P<0.05)，見表3。

表3 不同產后轉歸GDM患者基因突變率比較[n(%)]

2.4影響GDM患者產后轉歸多因素分析結果

SH2B1基因突變、FPG和Leptin是影響GDM患者產后T2DM發生的危險因素(均P<0.05)，見表4。

表4 影響GDM患者產后轉歸多因素分析結果

3討論

3.1 SH2B1蛋白對GDM患者的影響

SH2B1蛋白是定位于人染色體16p11.2基因的重要蛋白，其轉錄子3’-端經剪切后可出現不同亞型，編碼蛋白分別有756、670、682 及724共3種氨基酸殘疾，分別以α、β、γ、δ表示[7]。有研究指出，在外周組織和中樞神經系統組織中SH2B1蛋白廣泛表達[8]。此外，有學者研究發現，SH2B1還可在體內扮演銜接蛋白的角色，與胰島素受體、Janus激酶2、胰島素受體底物等活性物質結合，參與體內胰島素、瘦素等多種細胞因子和激素信號傳導[9]。本研究結果顯示，在GDM患者人群中SH2B1蛋白突變患者與未突變患者血中瘦素水平存顯著性差異(P<0.05)，提示SH2B1蛋白可能參與GDM患者體內的能量代謝過程。

既往研究結果顯示，GDM患者極易出現早產和巨大兒、妊娠高血壓、新生兒低血糖、新生兒窒息等，且可能導致孕婦本人及子女出現肥胖、T2DM等疾病[10]。大量臨床研究追蹤結果顯示，GDM患者多伴隨嚴重的血脂代謝異常，可能造成母嬰預后不良，并導致遠期不良結局的發生，而脂蛋白水平的異常波動是血脂代謝紊亂的重要指標[11]。因而本研究對SH2B1基因突變組與未突變組患者包括TC、TG、LDL-C 及HDL-C等在內的生化指標進行檢測，結果顯示SH2B1基因突變組GDM患者FPG、TG水平顯著高于未突變組，而Leptin水平顯著低于未突變組(P<0.05)，表明SH2B1基因突變會加重患者體內血脂代謝異常，可能引起患者病情加重。

3.2 SH2B1基因突變對GDM患者臨床轉歸的影響

SH2B1能夠有效緩解胰島素受體底物去磷酸化和胰島素受體酪氨酸的磷酸化，參與誘導的Janus激酶2活化，激活體內生長激素[12]。且體內實驗研究結果表明Leptin、胰島素的合成釋放、血脂血糖代謝以及肥胖等均受到SH2B1蛋白的調控[13]。國外有研究結果顯示，基因型為GA+AA 型SH2B1蛋白患者TG、BMI、穩態模型胰島素抵抗指數(homeostasis model insulin resistance index，HOMA-IR)均低于GG型，且GDM患者病情與SH2B1基因型密切相關[14]。

目前針對GDM易感性與SH2B1基因多態性的相關研究較少，并未見相關報道。本研究分析GDM患者臨床轉歸與SH2B1基因多態性關系時發現，GDM患者不良預后組SH2B1基因突變率為62.50%，預后良好為17.86%，不良預后組SH2B1基因突變率顯著高于預后良好組(P<0.05)，進一步的多因素Logistic回歸模型分析結果顯示SH2B1基因突變、FPG和Leptin是影響GDM患者產后T2DM發生的危險因素(P<0.05)。分析其原因可能與SH2B1基因突變后會加重患者體內血脂、血糖等代謝紊亂，引起患者病情加重，升高患者出現胰島素抵抗的危險因素有關。因此，臨床上應對GDM孕婦SH2B1基因型、血糖和Leptin水平進行檢測，若出現SH2B1基因突變、FGB持續升高和Leptin水平異常患者則應予以重視，產后并堅持定期隨訪，盡可能及時采取合理方案進行干預，以改善患者臨床轉歸。

綜上所述，SH2B1基因突變與產后糖代謝轉歸情況密切關聯，是影響患者發生T2DM的危險因素。但本研究受制于地域限制，臨床樣本數不足，整體代表性不強，后續需開展更大范圍的調查研究，分析SH2B1基因在GDM患者發病、臨床轉歸等的影響機制，為臨床應用提供依據。