植絨采樣拭子聯合顯色培養基快速篩查醫務人員鼻腔金黃色葡萄球菌定植的價值

廣州市增城區人民醫院（511300）白艷 吳博

金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus，Sau）是一種常見的革蘭陽性菌，可導致多種感染性疾病的發生，對人類的生命健康產生了嚴重的威脅。隨著抗菌藥物的不合理使用或是濫用，耐藥菌株層出不窮，而Sau的耐藥性最為突出，其中以耐甲氧西林金葡菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）的危害性最大[1]。Sau能夠長期定植于人類的鼻腔中，與其他細菌共生，當Sau被轉移至呼吸道、手術切口部位或者血液中，在特定條件下能夠變成致病菌而導致感染的發生[2]。因此，對鼻腔內的Sau定植情況進行篩查，對Sau相關醫院感染的控制具有重要作用。常規細菌培養方式是用于Sau定植篩查的耗時比較長，容易受到多種因素的干擾等[3]，故尋找一種快速、高效的Sau定植篩查方法，是臨床檢驗醫學領域重要的研究課題。醫務人員會與各類患者進行密切接觸，因此對醫務人員鼻腔Sau定植情況進行篩查，意義重大，本研究將通過探討Eswab多功能植絨采樣拭子聯合顯色培養基快速篩查我院醫務人員鼻腔Sau定植的價值，以期為臨床提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象 以我院的150名醫務人員為研究對象，其中男性70例，女性80例，年齡25～55歲，平均為（36.47±4.80）歲，醫生60名，護士90名。對合并感染、炎癥性疾病、呼吸系統疾病、免疫系統低下、糖尿病等人群予以排除。

1.2 材料與儀器 Eswab多功能植絨采樣拭子（意大利COPAN公司）；MicroScan WalkAway plus 96/40全自動微生物鑒定與藥敏分析系統（貝克曼庫爾特公司）；MRSA選擇性顯色瓊脂培養（法國科瑪嘉公司）；革蘭陽性菌鑒定卡、革蘭氏陽性細菌藥敏卡片（法國梅里埃）；BD Bruker MALDI-Biotyper 全自動微生物鑒定質譜分析系統（美國BD公司）；MultiGene Mini PCR儀、化學發光凝膠成像系統（美國Labnet公司）；DNA聚合酶及Loading Marker（上海遠慕生物科技公司）；質控菌株（中國科學院微生物研究所）。

1.3 標本的采集 Eswab多功能植絨采樣拭子包括1個采樣管、1ml液體培養基、1根鼻咽尼龍植絨拭子。使用液體培養基將植絨拭子頭進行濕潤，將植植絨采樣拭子頭插入鼻前孔2cm處，反復進行3～5次旋轉，確保能夠采集到黏膜上皮細胞。采集完成以后將拭子置入采樣管中，將拭子的手持部分進行折斷去除。于室溫下進行保存，在24h內進行處理。

1.4 標本的培養 采用全自動微生物鑒定與藥敏分析系統將植絨采樣拭子接種于MRSA選擇性顯色瓊脂培養，35℃條件下進行16h的培養，通過系統軟件對菌落進行觀察。

1.5 Sau的質譜鑒定 使用一次性接種環對單個菌落進行挑取，將菌落在靶板檢測點上進行均勻涂布，得到菌膜，將1μL的基質液在菌膜上進行覆蓋；將質控菌落在靶板質控點進行均勻涂布，待菌落得到干燥以后，使用全自動微生物鑒定質譜分析系統進行鑒定，嚴格執行操作規程。

1.6 Sau的耐藥性分析 將菌落采用生理鹽水配置成為麥氏濁度菌懸液（0.5號），采用革蘭陽性菌鑒定卡、革蘭氏陽性細菌藥敏卡片在全自動微生物鑒定與藥敏分析系統上進行藥敏分析。按照美國CLSI抗菌藥物敏感試驗執行標準M100 S28對藥敏結果進行判定：苯唑西林的MIC≥4μg/mL判定為MRSA，苯唑西林的MIC≤2μg/mL判定為甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌（methicillin-sensitive staphylococcus aureus，MSSA）。

1.7 Sau的mecA基因檢測 取菌落用0.5mL的生理鹽水制成菌懸液，離心（1200r/min，10min）獲取上清液，采用PCR儀進行檢測，上游引物5’-TGCCTGTCCTAGTACGATAC-3’，下游引物5’-TTCGAGATCATCGTCCGTAC-3’310bp的長度，按照文獻[4]報道的條件進行檢測；取5μL的PCR產物進行凝膠電泳，以DNA Loading Marker作為參照，加入熒光染料后進行凝膠成像分析。mecA基因（-）判定為MSSA，mecA基因（+）判定為MRSA。

2 結果

2.1 鼻腔Sau定植快速篩查結果 150份標本中，35株Sau菌株經初篩檢出，Sau定植率為23.3%。35株Sau菌株中，包括18株（51.4%）MSSA菌株及17株（48.6%）MRSA菌株，MRSA定植率為11.3%；Sau菌株的報陽時間為（16.5±3.2）h。

2.2 鼻腔Sau定植快速篩查結果準確性的驗證結果 35株Sau菌株經過質譜鑒定均為18株MSSA菌株及17株MRSA菌株，符合率為100.0%；Sau菌株的耐藥性分析，18株MSSA菌株的苯唑西林MIC≤2μg/mL，17株MRSA菌株的苯唑西林MIC≥4μg/mL，符合率為100.0%；Sau菌株的mecA基因檢測，18株MSSA菌株的mecA基因為陰性，17株MRSA菌株中有1株菌株的mecA基因為陰性，16株菌株的mecA基因為陽性，符合率為97.1%。見附表。

附表 鼻腔Sau定植快速篩查結果準確性的驗證結果（株）

3 討論

Sau是人類的一種重要病原菌，能夠引起許多嚴重感染。Sau常定植于鼻腔中，當宿主的免疫功能出現障礙時，鼻腔內的Sau會轉變為條件致病菌，并且可以轉移到身體的其他部位，導致感染性疾病的發生。根據是否對苯唑西林耐藥，Sau可以分為MSSA與MASA，MRSA耐藥性形成的主要機制是由于金葡菌獲得mecA基因[5]，而MRSA導致的感染比較棘手。目前，醫療機構中MRSA的檢出率越來越高，給醫院感染的控制工作帶來了挑戰。而醫務人員在臨床診療過程中，會與患者進行不同程度的接觸，了解醫務人員鼻腔內的Sau定植情況，已經成為一項新的課題，同時對醫院感染控制工作的開展具有重大意義。

目前，醫療機構的微生物檢驗工作的自動化水平并不高，在微生物的檢驗過程中，標本的培養及鑒定、耐藥性的分析及基因的檢測等環節對報告的時效性進行了限制，因此，提高微生物檢驗工作的效率及時效性是需要解決的關鍵問題[6]。隨著臨床檢驗醫學技術的快速發展，實現實驗室的自動化是必然趨勢。Eswab多功能植絨采樣拭子包括1個采樣管、1ml液體培養基、1根鼻咽尼龍植絨拭子，是唯一能在室溫和冰箱溫度下保持需氧菌、厭氧菌和苛養菌生存力長達48h的多用途液基采集儲存系統，用于儲存細菌、病毒、衣原體、脲支原體和支原體的核酸和抗原，其通用性可精簡實驗室中標本管理流程中的所有步驟[7]；MRSA選擇性顯色瓊脂培養中含有選擇性抑制劑，能夠對某些其他細菌的生長進行抑制，產色能夠使SA菌落呈現綠色，能夠對SA進行直接篩選及鑒定[8]。

本研究探討了植絨采樣拭子聯合顯色培養基快速篩查醫務人員鼻腔Sau定植的價值，結果顯示：鼻腔Sau定植率與MRSA定植率分別為23.3%、11.3%，說明我院醫務人員鼻腔Sau定植率較高，特別是MRSA，對我院醫院感染工作提出了警示；陽性報告時間在16h左右，遠遠低于傳統培養的3h；鼻腔Sau定植快速篩查與質譜鑒定、耐藥性分析及mecA基因檢測的符合率分別為100.0%、100.0%、97.1%，說明該快速篩查方法具有很強的優勢。

總之，我院醫務人員鼻腔Sau定植率較高，需要采取一定的控制手段。植絨采樣拭子聯合顯色培養基是一種快速、精準的鼻腔Sau定植篩查方法，臨床價值高。