豬流行性腹瀉病毒與大腸桿菌混合感染的診斷與分析

李璐璐1，關昕睿1，王子璇1，郭曉玉1，穆英麗1，解佳1，陳立功1★，王學靜1,2★

（1.河北農業大學動物醫學院，河北保定071001；2.河北省畜牧獸醫研究所，河北保定071000）

2020 年11 月， 河北某養殖場初生仔豬發生嘔吐、腹瀉，為了確定其病因，對該場發病仔豬進行了臨床癥狀觀察、病理學剖檢、腹瀉病毒分子生物學診斷和細菌學診斷，初步判定該場仔豬發生了豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）和大腸桿菌的混合感染，現將結果匯報如下。

1 發病情況

2020 年11 月初河北某養殖場初生仔豬開始發生嘔吐、腹瀉，主訴發病仔豬為該養豬場產房3～10 日齡仔豬， 其中3～7 日齡仔豬發病率為100%，死亡率為75%～100%；8～10 日齡仔豬發病率為60%，死亡率為20%～30%。

2 臨床癥狀

發病仔豬主要表現為水樣腹瀉和排黃色稀便，部分仔豬哺乳后發生嘔吐， 發病后2～3 天后開始脫水，脫水嚴重個體在昏迷中死亡。

3 剖檢病變

取3 頭病死豬剖檢病變主要為消瘦。 腹股溝淋巴結、頜下淋巴結和腸系膜淋巴結呈紅褐色（3/3）。胃內有未消化奶塊，胃黏膜瘀血（3/3）。 小腸腔內充滿黃色稀薄液體（3/3）。部分仔豬腎臟見針尖大小出血點（1/3）。其他臟器未見肉眼可見病變。

4 腹瀉病毒分子生物學診斷

取腹瀉死亡仔豬的小腸和腸系膜淋巴結等組織，立即進行研磨。 研磨病料經8000 轉/分鐘4℃離心2分鐘， 提取離心后上清液中病毒RNA，然后進行反轉錄，取cDNA 分別進行PEDV、 傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、 豬 輪 狀 病 毒 （Porcine rotavirus，PoRV） 及 豬 丁 型 冠 狀 病 毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV） 的PCR 擴增。PCR 產物經2% 瓊脂糖凝膠電泳， 結果表明腹瀉仔豬病料呈PEDV 陽性（見圖1），呈TGEV、PoRV和PDCOV 陰性（電泳圖略）。

5 細菌學檢測

取小腸內容物分別接種于麥康凱瓊脂培養基平板、伊紅美藍培養基平板和十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養基平板，37℃培養24～48 小時。 十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養基平板未見細菌生長。 麥康凱培養基上可見邊緣整齊、稍突起、表面光滑濕潤， 粉紅色或深紅色的圓形菌落；伊紅美藍培養基上呈紫黑色帶金屬光澤的圓形菌落。 代表性單菌落純化后進行革蘭氏染色、鏡檢。 結果鏡下可見純化細菌為革蘭氏陰性短小桿菌，不形成芽孢。根據以上特征可初步判斷該細菌為大腸桿菌。 用紙片擴散（K-B）法檢測該大腸桿菌對阿莫西林、氟苯尼考、林可霉素、慶大霉素、新霉素、恩諾沙星、多西環素和紅霉素等8 種抗菌藥物的敏感性。 藥敏試驗結果表明，大腸桿菌僅對新霉素和慶大霉素高敏；對恩諾沙星低敏；對其余5 種藥物均耐藥。

6 討論與分析

據豬場管理人員介紹，該豬場所有母豬均接種過PED 疫苗，但根據臨床癥狀觀察、病理學剖檢、腹瀉病毒分子生物學診斷和細菌學診斷結果，初步判定該豬場初生仔豬發生了豬流行性腹瀉與大腸桿菌混合感染。 建議采取以下措施：

6.1 加強初生仔豬的飼養管理

圖1 PEDV PCR 產物電泳結果

PED 可以發生于幼齡仔豬、育肥豬和母豬， 但10 日齡內哺乳仔豬更為易感PEDV。 2020 年冬季較為寒冷，因此，在冬季應做好豬舍，尤其是產房的通風、干燥和保溫工作。

6.2 及時調查PED 免疫失敗原因

本試驗結果表明該豬場發生了PED 免疫失敗的現象。 導致PED 免疫失敗因素較多， 如免疫程序不合理；疫苗因運輸、保存不當或疫苗取出后在免疫接種前受到日光的直接照射，均會影響免疫效果；此外，新的PEDV 變異毒株的出現， 也可能是當前該病流行的原因。

6.3 治療方法

發病仔豬應立即隔離，及時對豬舍、用具等進行徹底消毒。 發病早期給腹瀉仔豬注射敏感抗菌藥物，適當補充葡萄糖氯化鈉溶液，日齡稍大的仔豬部分成活。

6.4 優勢血清型大腸桿菌疫苗的接種

產腸毒素性大腸桿菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)也可致仔豬發生腹瀉，致初生仔豬腹瀉大腸桿菌O 血清型眾多，這可能是當前豬場很少使用大腸桿菌疫苗的原因。 因此，大腸桿菌耐藥日趨嚴重情況下，應使用適于該地區的優勢血清型大腸桿菌疫苗為母豬進行接種。