PCR、細菌培養法于陰道細菌檢驗的應用

閆清

山東國欣頤養集團淄博中心醫院檢驗科，山東淄博 255120

細菌性陰道炎是臨床比較常見疾病， 主要是因為細菌感染產生陰道菌群紊亂， 該疾病容易導致陰道內有益菌突然降低，并且被致病菌所取代[1]。 相關臨床數據指出， 目前我國細菌性陰道炎的發病率為1.00%左右，如果該疾病患者未得到有效、及時處理，則病情進一步發展的同時， 病情惡化， 臨床相關癥狀進一步加重，并且誘發子宮內膜炎疾病、慢性盆腔炎疾病等。 而且對于女性患者生殖系統而言， 細菌性陰道炎容易造成嚴重損傷，導致不孕等[2]。 由于細菌性陰道炎患者中大部分的病情緩解發展，因而未表現明顯臨床癥狀，致使患者自身及家屬均未加以高度重視， 從而當臨床就診時，已演變為盆腔病變累及情況等。 所以，臨床結合細菌性陰道炎疾病特點， 需給予開展早期臨床檢查診斷。 目前臨床針對細菌性陰道炎的常規檢查診斷方法為細菌培養法，但是該檢查方法的耗時較長，而且檢查診斷率較低，需要多次細菌培養等劣勢，因而未能進行臨床廣泛應用。聚合酶鏈式反應（PCR）檢驗法是一種簡易DNA 擴增法，隨著該技術逐步成熟，已被越來越運用在臨床醫學檢驗中[3]。 該次研究方便選擇2018 年6月—2019 年12 月期間該院50 例細菌性陰道炎患者設為對照組，將同時間段50 例細菌性陰道炎患者設為研究組，旨在探討聚合酶鏈式反應（PCR）檢驗法和細菌培養法于陰道細菌檢驗的應用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用隨機數字表方法設計，方便選取該院50 例細菌性陰道炎患者設為對照組，將同時間段50 例細菌性陰道炎患者設為研究組。 研究組有50 例， 年齡23～59歲，平均（31.05±3.20）歲；病程 1～4 年，平均（1.65±0.35）年。 對照組有 50 例，年齡 25～57 歲，平均（30.85±3.85）歲；病程 2～5 年，平均（1.70±0.30）年。 兩組的一般資料進行比較，結果顯示差異無統計學意義（P＞0.05）。 提示具有臨床可比性。

納入標準:①具有齊全的臨床資料；②伴有細菌性陰道炎相關典型癥狀；③18 周歲以上；④配合完成該次研究工作。 排除標準:①臨床相關資料不齊全者；②伴有傳染性疾病者；③伴有精神障礙疾病者；④不配合或者不自愿參與者。 該研究所選病例經過倫理委員會批準，患者或家屬均知情同意。

1.2 方法

陰道分泌物采集具體操作如下:選擇無菌陰道鏡，以充分暴露患者宮頸， 于陰道后穹窿處以棉簽取適量陰道分泌物，置于無菌時光中作保存，送實驗室檢查。

研究組（50 例）接受PCR 檢驗法，具體操作如下:首先放置試管于離心機， 轉速調整為12 000 r/min，持續離心10 min，離心結束后，取上清液，并加入適量堿性裂解液；予以加熱持續10 min，保持溫度處于98℃；接著再放置于離心機，轉速調整為12 000 r/min，持續離心5 min，離心結束后，取上清液；制作DNA 模板，添加DNA 即陽性，未添加DNA 即陰性；密切監測PCR 反應產物，予以擴增；常規提取無菌去離子水；作石蠟覆蓋表面；行PCR 反應循環（總環數為32 環）。

對照組（50 例）接受細菌培養法，具體操作如下:將陰道分泌物取出，需保障在無菌環境下進行操作；選擇無菌接種環并置于細菌分離培養基上進行接種；CO2培養箱溫度調整為35℃，時間調整為48 h；持續觀察培養物，并取出典型菌落；接著完成生化檢驗。

1.3 觀察指標

比較兩組的檢測應用效果， 包括檢查陽性率以及檢查結果（腸球菌、棒狀桿菌及加特納菌的檢出情況）。細菌培養檢驗陽性標準具體為:具有典型菌落，而且菌落為陽性（+）；PCR 陽性標準具體為:邊緣整齊，且條帶寬度＜1 mm，而且需注意和假陽性進行區別。

1.4 統計方法

經SPSS 23.0 統計學軟件分析數據，計數資料采用[n(%)]表示，組間差異比較用 χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組檢查陽性率的比較

研究組的檢查陽性率高于對照組， 差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 兩組檢查陽性率的比較

2.2 兩組的檢查結果比較

研究組的腸球菌陽性率、 棒狀桿菌陽性率及加特納菌陽性率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組的檢查結果比較[n（%）]

3 討論

經臨床相關文獻資料查閱獲知， 女性人群的身體健康狀態與其自身白帶存在密切相關性， 臨床通過給予女性人群開展白帶檢查， 從而可以有效了解自身身體健康情況，若伴有明顯的白帶分泌物增多，則需要加強重視，應該盡早接受早期敏感化驗檢查項目，并結合檢查結果從而及時判斷是否出現細菌感染[4]。 隨著社會高速發展及經濟進步的影響下，人們生活壓力、工作壓力隨之加重，以及日常生活習慣、飲食習慣等較大變化等因素影響，導致女性陰道疾病發生率也隨之升高，尤其是陰道炎疾病。 就陰道炎疾病的發生發展而言，均與女性人群自身陰道內寄生菌群間平衡特點相關。 女性陰道內寄生菌的正常表現是相互平衡狀態現象， 若出現失衡現象， 則會表現為大量的重要維持細菌平衡的細菌死亡， 并促使致病菌增殖明顯， 進而出現失衡現象。 病菌繁殖期間會消耗大量營養物質，并且影響陰道上皮細胞代謝功能，從而出現酸堿水平紊亂現象，并且誘發陰道炎癥[5]。

細菌性陰道炎的臨床感染狀態其實是因為混合陰道厭氧菌與陰道加特納菌相互作用而形成， 從而導致陰道內微生態發生失衡現象， 并演變為顯著的陰道分泌物含量增加，以及伴有嚴重瘙癢灼熱癥狀、伴有白帶有魚腥臭味情況。 經臨床相關研究顯示，細菌性陰道炎主要包括4 種類型: ①嗜血桿菌類型； ②棒狀桿菌類型；③厭氧菌類型；④加特納菌類型[6]。 在實際臨床細菌性陰道炎的發病比較緩慢，而且無顯著臨床癥狀表現，或者與其他常見婦科病癥存在相似癥狀， 因此該疾病容易被忽視， 而在臨床常規檢查中也容易發生漏診情況[7]。 細菌性陰道炎如果未得到及時有效的診斷與治療，則隨著疾病逐步發展，可演變為盆腔炎、宮頸炎等，個別嚴重者甚至致使不孕不育癥，影響其身心健康、生活質量。 因此，臨床需盡早檢查、盡早發現、盡早診斷以及盡早給予積極治療，以改善預后[8]。 PCR 檢驗法和細菌培養法均作為常用的臨床診斷輔助措施， 可以將陰道內的感染類型、 感染程度及陰道內菌群失調情況等準確體現。 細菌培養法是婦科陰道疾病目前的臨床診斷“金標準”，可以取得較好的臨床檢驗效果。 但是細菌培養法的臨床檢出率不理想，而且需要高要求相關檢驗設備，且操作時間長，因此未能適合推廣于臨床工作中[9]。PCR 檢驗法是新型的陰道細菌檢驗技術， 又稱為熒光定量檢驗法。 PCR 檢驗法主要是選用一段DNA 作為模板，借助DNA 聚合酶儀器與核苷酸底物的參與作用影響，擴增上述DNA 到足夠數量，從而有助于臨床進行結構分析、功能分析[10]。 其次，該檢驗方法的PCR 敏感性良好，其檢驗精準度、檢驗檢出率均較高。 參考相關臨床研究發現，PCR 檢驗法的操作較簡便，而且相對而言，檢驗設備要求較低，故此可以利于預防出現或者減少偏差等不良情況的發生。

從該次研究結果數據可知: ①與實施細菌培養法的對照組相比較， 實施PCR 檢驗法的研究組的檢查陽性率（90.00%）顯著提高（P＜0.05）； 表明開展 PCR 檢驗法可以更利于臨床檢驗效果的提高， 從而使細菌性陰道炎患者可以盡早接受積極對癥治療，以改善預后。 ②研究組的腸球菌陽性率 （22.00%）、 棒狀桿菌陽性率（28.00%）、加特納菌陽性率（80.00%）均顯著提高（P＜0.05）。 研究結果與陳文霞[11]的研究結果“研究組陽性檢出率（88.00%）明顯高于參照組（54.00%）（P＜0.05）；研究組的腸球菌檢出率 （24.00%）、 棒狀桿菌檢出率（28.00%）、加特納菌檢出率（36.00%）均顯著高于參照組（14.00%、24.00%、16.00%）（P＜0.05）。 ”相符合。 證實臨床進行陰道細菌檢驗過程中運用PCR 檢驗法的檢驗優勢顯著，可以快速取得結果，爭取更多臨床治療時間以及提高臨床治療效果，改善疾病預后。 綜合所得結果可知， 在細菌性陰道炎檢驗中實施PCR 檢驗法有更好效果，而且可以取得更高陽性檢出率[12]。

綜上所述，臨床依據細菌性陰道炎疾病特點，在臨床進行檢查診斷過程中， 與細菌培養法相比較， 應用PCR 檢驗法的檢查陽性率更高， 可以廣泛應用于臨床檢查診斷中。