蛋雞脂肪肝出血綜合征及其分子機(jī)制的研究進(jìn)展

曾文惠，曾慶節(jié)，殷 超，楊小璇，王玉潔，茹 盟，劉佳婷，謝賢華，梁海平，魏 慶，黃建珍

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045)

蛋雞脂肪肝出血綜合征(fatty liver hemorrhage syndrome,FLHS)是影響全球養(yǎng)禽業(yè)的一種常見(jiàn)的營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病，由于能量攝入過(guò)高導(dǎo)致肝臟內(nèi)脂肪過(guò)度沉積所引起。該病多發(fā)于產(chǎn)蛋高峰期的蛋雞，籠養(yǎng)雞是主要患病對(duì)象，發(fā)病后的雞通常表現(xiàn)為體質(zhì)量明顯增加、產(chǎn)蛋量突然下降及突然死亡。病理剖檢可見(jiàn)心、肝臟、肺臟等臟器表面有不同程度的脂肪沉積，肝臟腫大、發(fā)黃、表面有出血點(diǎn)，隨病情加重甚至?xí)鸶闻K破裂出血。近年來(lái)，隨著社會(huì)的發(fā)展，集約化養(yǎng)殖的規(guī)模不斷擴(kuò)大，F(xiàn)LHS發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)，正常情況下發(fā)病率一般為5%左右，嚴(yán)重時(shí)可高達(dá)30%，嚴(yán)重影響了蛋雞的生產(chǎn)，給養(yǎng)禽業(yè)造成極其嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。由于該病發(fā)病時(shí)難以覺(jué)察，常突然死亡，故實(shí)際生產(chǎn)中往往是預(yù)防大于治療。現(xiàn)主要是從分子角度來(lái)分析FLHS的發(fā)病機(jī)理，旨在為FLHS的研究方向提供新的思路。

1 禽類脂質(zhì)代謝的特點(diǎn)

體內(nèi)存在的脂肪酸主要有3個(gè)來(lái)源：飲食攝入、脂肪組織生成和肝臟合成。大部分哺乳動(dòng)物的脂肪酸都來(lái)自于脂肪組織的生成。而與哺乳動(dòng)物不同，禽類脂質(zhì)代謝的主要器官是肝臟，其中70%的脂肪酸都來(lái)自于肝臟合成，5%來(lái)自脂肪組織，剩余部分則通過(guò)采食獲取[1]。禽類在攝食后，日糧中的脂類物質(zhì)在胰脂酶的作用下形成乳糜微粒(CM)被腸上皮細(xì)胞吸收入血，隨后低密度脂蛋白(LPL)作用于CM，使脂肪酸釋放并被肝臟吸收，之后以復(fù)合物的形式由極低密度脂蛋白(VLDLs)將其運(yùn)出肝臟，運(yùn)至循環(huán)系統(tǒng)，最終，經(jīng)LPL作用使血液中游離脂肪酸又進(jìn)入脂肪組織重新合成脂肪。蛋雞由于在產(chǎn)蛋階段需要大量的脂質(zhì)供應(yīng)來(lái)形成蛋黃，因此蛋雞FLHS的發(fā)病率往往高于肉雞。

正常情況下，肝臟中的脂質(zhì)代謝常處于一種動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)，而FLHS發(fā)生的實(shí)質(zhì)上就是這種平衡被打破，使得脂質(zhì)的合成遠(yuǎn)大于其分解，或者脂質(zhì)運(yùn)輸障礙，最終導(dǎo)致脂肪沉積于肝臟。因此一旦有關(guān)脂質(zhì)合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和β-氧化等過(guò)程中的任何一個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)生障礙，都會(huì)有引發(fā)FLHS的風(fēng)險(xiǎn)。

2 FLHS的發(fā)病原因

關(guān)于FLHS產(chǎn)生的機(jī)理，一直以來(lái)學(xué)術(shù)界有多種討論。其中最為流行的有“二次打擊”學(xué)說(shuō)和“多擊”理論。最早DAY等[2]提出了“二次打擊”學(xué)說(shuō)，認(rèn)為FLHS的產(chǎn)生需要2個(gè)條件：肝臟內(nèi)的脂肪變性和脂質(zhì)的氧化應(yīng)激。該假說(shuō)表示禽的脂代謝失衡與胰島素的功能障礙有很大聯(lián)系，禽類往往較哺乳動(dòng)物更易于發(fā)生胰島素抵抗，發(fā)生胰島素抵抗后的禽體內(nèi)脂肪分解加劇，使得體內(nèi)游離脂肪酸含量隨之上升，引起肝細(xì)胞的通透性和線粒體功能的改變，脂質(zhì)的代謝失衡，導(dǎo)致過(guò)多脂肪蓄積于肝臟，大量脂肪在肝臟的長(zhǎng)時(shí)間滯留而發(fā)生過(guò)氧化促使體內(nèi)的活性氧/氮自由基等活性氧族含量增多，從而使機(jī)體內(nèi)氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡，自由基超量聚積并作用于肝臟，進(jìn)一步損傷溶酶體、線粒體及肝臟細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性，破壞其生物膜，引發(fā)細(xì)胞的炎癥壞死，最終導(dǎo)致FLHS。其中，胰島素抵抗是FLHS產(chǎn)生的重要一環(huán)，目前被普遍認(rèn)為主要受到營(yíng)養(yǎng)和遺傳因素的影響。

然而隨著研究的深入，“二次打擊”學(xué)說(shuō)不再能充分解釋患病動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生分子及代謝變化。于是，在此基礎(chǔ)上“多擊”理論誕生了[3]。該理論認(rèn)為除胰島素抵抗和氧化應(yīng)激外，營(yíng)養(yǎng)、激素、環(huán)境、遺傳、應(yīng)激、基因及表觀遺傳調(diào)控、腸道微生物等多種因素均可誘發(fā)FLHS。然而，對(duì)于現(xiàn)代集約化生產(chǎn)，其中管理、環(huán)境等因素可以得到較好控制，因此，營(yíng)養(yǎng)因素是當(dāng)前養(yǎng)禽業(yè)中引起FLHS的主要原因。以下將對(duì)FLHS的幾種影響因素進(jìn)行歸納綜述。

2.1 營(yíng)養(yǎng)因素

2.1.1日糧 日糧中能量/蛋白比是引起FLHS的主要因素，當(dāng)日糧中能量/蛋白配比不均衡時(shí)易引起FLHS。如高能低蛋白(high energy low protein，HELP)日糧，一方面由于高能日糧導(dǎo)致肝臟代謝負(fù)荷過(guò)大，無(wú)法代謝體內(nèi)過(guò)多脂肪酸，從而引起肝臟內(nèi)脂肪酸的堆積；另一方面，低蛋白致使機(jī)體內(nèi)沒(méi)有足夠的原料合成載脂蛋白，使脂類無(wú)法從肝臟運(yùn)出，肝臟內(nèi)脂肪蓄積加重；而高蛋白低能日糧同樣也會(huì)引起FLHS，低能日糧使機(jī)體加大對(duì)氨基酸的代謝，其代謝產(chǎn)物加重肝臟負(fù)擔(dān)所致[4]。

2.1.2營(yíng)養(yǎng)元素的缺乏 蛋氨酸與膽堿是體內(nèi)磷脂酰膽堿的前體物質(zhì)[5]，對(duì)于VLDL的合成是必不可少的。當(dāng)日糧中缺乏這兩種物質(zhì)時(shí)，VLDL合成受阻，導(dǎo)致脂質(zhì)蓄積于肝臟。甜菜堿、維生素B12/C/E等物質(zhì)由于參與膽堿的合成，故這些物質(zhì)的缺失也會(huì)造成肝臟脂肪沉積[6]。

2.1.3外源性藥物和添加劑的使用 外源性藥物和添加劑的使用在一定程度上也會(huì)影響FLHS的發(fā)展。比如四環(huán)素，它作為一種抑菌劑，其作用機(jī)理是通過(guò)抑制蛋白質(zhì)的合成來(lái)阻礙細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，但這種特性也抑制了脂蛋白合成，阻礙了脂質(zhì)從肝臟運(yùn)出，造成脂肪在肝臟的大量堆積，故其濫用時(shí)易引發(fā)FLHS。而與此相反的是，二氫吡啶的添加則可引起血清中載脂蛋白的含量上升，促使脂質(zhì)從肝臟運(yùn)出，減輕肝臟負(fù)擔(dān)[7]。

2.2 激素因素某些激素可調(diào)節(jié)脂質(zhì)分解與合成，如甲狀腺素、胰高血糖素、皮質(zhì)醇等激素可促進(jìn)脂肪分解，而胰島素、雌激素等激素可推動(dòng)脂質(zhì)合成。其中蛋雞高發(fā)FLHS的一個(gè)重要原因就是體內(nèi)雌激素含量升高，一方面其刺激肝臟合成脂肪，一方面又可抑制肝臟中線粒體對(duì)脂質(zhì)的氧化，從而導(dǎo)致肝臟內(nèi)脂質(zhì)含量急劇上升[8]。

2.3 環(huán)境因素飼養(yǎng)方式不合理易引發(fā)FLHS，比如雞舍內(nèi)密度過(guò)大，雞群由于缺乏運(yùn)動(dòng)空間而導(dǎo)致能量消耗下降引起的脂肪沉積，這種情況常見(jiàn)于集約化養(yǎng)殖場(chǎng)。高溫和應(yīng)激也易導(dǎo)致FLHS，高溫環(huán)境時(shí)由于需能少且此時(shí)甲狀腺素受抑制從而利于脂質(zhì)在體內(nèi)的堆積。應(yīng)激則主要是通過(guò)刺激糖皮質(zhì)激素的產(chǎn)生，從而促進(jìn)糖異生作用，推動(dòng)脂質(zhì)合成[9]。

2.4 遺傳因素FLHS具有很強(qiáng)的遺傳相關(guān)性，比如蛋用種雞往往比肉用種雞的發(fā)病率高，節(jié)糧小型蛋雞比中型蛋雞發(fā)病率高。即使是相同的環(huán)境與飼喂條件，不同品種或品系的雞肝臟內(nèi)的脂肪沉積程度也會(huì)不同。種系或是個(gè)體間遺傳狀態(tài)的不同，往往代表了其對(duì)FLHS易感程度的不同。

充分利用廣西的“一帶一路”、中國(guó)-東盟銜接橋梁等發(fā)展機(jī)會(huì)，學(xué)院應(yīng)提供有吸引力的薪酬、科教條件等吸引學(xué)科帶頭人、高層次人才。注重培養(yǎng)中青年教師，為潛力大的青年骨干教師提供國(guó)內(nèi)外交流、深造的機(jī)會(huì)，充分利用學(xué)院與泰國(guó)、英國(guó)等高校的合作關(guān)系，加大雙方教師的相互交流學(xué)習(xí)，培養(yǎng)教師的國(guó)際化視野以提高教學(xué)科研能力。

2.5 其他因素誤食重金屬、毒物、霉變的飼糧時(shí)也會(huì)引起FLHS，汞、鉛、砷等重金屬通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成從而促進(jìn)FLHS的產(chǎn)生。毒物和霉變則主要通過(guò)損害肝臟而使其功能受損，致合成脂蛋白的能力下降，造成肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積。另外，有研究表明腸道的微生物菌群也與FLHS的產(chǎn)生有一定的聯(lián)系，通過(guò)利用益生菌改善腸道環(huán)境可對(duì)該病起預(yù)防作用[10]。

3 FLHS形成的分子機(jī)制

FLHS形成的潛在分子機(jī)制有很多，大多相互交織，互為聯(lián)系。如AMPK和JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以及表觀遺傳調(diào)控等都涉及其中。

3.1 AMPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路AMPK(AMP-activated protein kinase,AMPK)，全稱AMP激活的蛋白激酶，可整合來(lái)自全身各處的輸入調(diào)節(jié)能量的消耗與產(chǎn)出，維持代謝平衡，被稱之為“代謝的主開(kāi)關(guān)”[11]。由于幾乎參與了生物體所有生理代謝的過(guò)程，故通常認(rèn)為FLHS的產(chǎn)生與AMPK信號(hào)通路有著密切聯(lián)系。AMPK活性由AMP/ATP調(diào)控，并由其上游的AMPK激酶(AMPKK)激活，在禽類中主要由LKB1進(jìn)行。PROSZKOWIEC等[12]研究表明，激活后的AMPK一般通過(guò)2種方式發(fā)揮作用。第1種是直接作用于代謝相關(guān)酶，通過(guò)調(diào)節(jié)酶活來(lái)控制代謝，如經(jīng)典的AMPK-ACC通路。乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)被AMPK磷酸化并滅活后會(huì)抑制脂肪酸的合成,同時(shí)導(dǎo)致丙二酸單酰輔酶A水平下降從而緩解了它對(duì)肉堿棕櫚酸轉(zhuǎn)移酶-1(CPT-1)的抑制，促進(jìn)脂肪酸在線粒體中的氧化[13]。另一種是利用一些重要的轉(zhuǎn)錄因子影響代謝相關(guān)基因的表達(dá)，如AMPK-PPARα/HNF4α/SERBP1α。其中PPARα可通過(guò)介導(dǎo)體內(nèi)脂肪酸β-氧化相關(guān)酶的表達(dá)推動(dòng)脂質(zhì)分解[14-15]。LIU等[16]研究發(fā)現(xiàn)高脂飲食可顯著下調(diào)AMPK的表達(dá)。DIHINGIA等[17]的研究表明通過(guò)高脂日糧飼喂的小鼠體內(nèi)ACC蛋白含量顯著上升，而當(dāng)經(jīng)過(guò)治療后小鼠ACC水平下降，說(shuō)明ACC或許參與脂質(zhì)合成。而CHENG等[18]在研究高脂日糧誘導(dǎo)小鼠的非酒精性脂肪肝(NAFLD)時(shí)發(fā)現(xiàn)，薯蕷皂甙元可通過(guò)上調(diào)AMPK表達(dá)從而減弱ACC活性，以達(dá)到預(yù)防NAFLD目的。以上結(jié)果表明AMPK確實(shí)可通過(guò)體內(nèi)的某些通路如AMPK-ACC來(lái)影響脂質(zhì)代謝，但多是針對(duì)以小鼠建立的模型為主。最近GAO等[19]用HELP日糧成功誘導(dǎo)了海蘭褐蛋雞FLHS模型，并經(jīng)研究指出FLHS蛋雞AMPK的mRNA及CPT1的mRNA較對(duì)照組表達(dá)量下降，而ACC、FAS、HMGR、HNF4α的mRNA表達(dá)量上升，暗示AMPK主要通過(guò)影響脂質(zhì)代謝中ACC、HMGR、FAS等相關(guān)酶的表達(dá)來(lái)影響脂質(zhì)在肝臟中的沉積。另外，受AMPK-SERBP1a、1c直接調(diào)控的Cidea基因最近也被研究證實(shí)在脂質(zhì)積累和誘導(dǎo)FLHS的過(guò)程中發(fā)揮重要作用[20-21]。近期，WANG等[22]在研究蛋雞脂肪肝模型的時(shí)候發(fā)現(xiàn)了與自噬及凋亡有關(guān)基因的異常表達(dá)。此前也有研究證明肝臟的損傷與自噬基因的失活有關(guān)[23]，表明自噬可能參與對(duì)肝臟的保護(hù)。mTOR作為AMPK通路的下游底物可抑制自噬，以AMPK-mTOR作為切入點(diǎn)，通過(guò)調(diào)控mTOR的表達(dá)也許可以為FLHS防治提供理論支持。

3.2 JAK-STAT信號(hào)通路JAK-STAT信號(hào)通路由酪氨酸激酶JAK、酪氨酸激酶相關(guān)受體及轉(zhuǎn)錄激活因子STAT共3部分組成，通過(guò)JAK-STAT的作用介導(dǎo)體內(nèi)某些細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子(瘦素、IL-4、IL-6、IFN-γ等)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡、炎癥、免疫調(diào)節(jié)等生理過(guò)程。目前JAK家族有4種：JAK1-3、TYK2；STAT家族有7種：STAT1-4、STAT5A/B、STAT6。其作用機(jī)制為細(xì)胞因子與受體結(jié)合使得JAK發(fā)生自體磷酸化，JAK的激活使受體中的酪氨酸殘基也隨之磷酸化，STAT被招募至受體表面激活并以二聚體的形式轉(zhuǎn)移至核內(nèi)調(diào)節(jié)相應(yīng)靶基因的轉(zhuǎn)錄。該通路可受到SOCS、CIS、PTP等因子的影響。

STAT3作為JAK-STAT最重要的一員，常與體內(nèi)的各細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子共同參與對(duì)體內(nèi)糖脂代謝的調(diào)節(jié)，此前大量的研究都證明了兩者間的關(guān)系。瘦素是脂肪組織中分泌的一種肽類激素，通過(guò)介導(dǎo)JAK2-STAT3促進(jìn)脂肪分解，抑制脂肪合成，維持肝臟內(nèi)的能量平衡。朱夢(mèng)夢(mèng)等[24]的研究表明化積健脾湯可通過(guò)上調(diào)瘦素受體(LepRb)、JAK2、STAT3的表達(dá)，下調(diào)SOCS-3、IL-6，通過(guò)調(diào)節(jié)JAK-STAT通路，改善瘦素抵抗，減少脂質(zhì)沉積。IL-6也是一種能量調(diào)節(jié)因子，IL-6/STAT3的組合被證實(shí)可改善體內(nèi)的脂肪沉積，緩解肝臟的脂肪變性。研究表明，長(zhǎng)期的IL-6治療可通過(guò)激活STAT3上調(diào)Bcl-2、Bcl-xL等抗凋亡基因的表達(dá)，從而改善瘦素缺陷型的ob/ob小鼠及高脂飼喂、乙醇飼喂這3類小鼠脂肪變性程度，保護(hù)肝臟[25]。IL-6/STAT3還可通過(guò)影響胰島素抵抗參與脂質(zhì)代謝，但是積極還是消極影響目前仍有爭(zhēng)議[26-27]。IL-22是一種抗炎因子，也是一種重要的護(hù)肝因子。YANG等[28]研究指出，IL-22通過(guò)激活JAK1-STAT3可下調(diào)TG合成有關(guān)基因的表達(dá)，減緩脂肪沉積。祝娟娟等[29]研究表明，NAFLD小鼠經(jīng)藍(lán)莓與益生菌處理后，可抑制炎性因子的同時(shí)上調(diào)IL-22的表達(dá)，通過(guò)激活STAT從而下調(diào)SREBP-1c的表達(dá)，達(dá)到TG和膽固醇合成下降，改善肝臟炎癥及脂肪肝的目的。綜上，JAK可通過(guò)與細(xì)胞因子的合作參與對(duì)肝臟中脂肪代謝的調(diào)節(jié)。近期，ZHU等[30]通過(guò)對(duì)構(gòu)建的FLHS蛋雞與健康對(duì)照組的基因表達(dá)圖譜進(jìn)行比較，篩選出多個(gè)差異表達(dá)基因，其中IL-6、SOCS-3和CNTF被認(rèn)為可作為未來(lái)JAK-STAT中的潛在藥物靶點(diǎn)，通過(guò)抑制IL-6、SOCS-3及促進(jìn)CNTF的表達(dá)可增強(qiáng)胰島素作用和葡萄糖穩(wěn)態(tài)，緩解病癥。

3.3 表觀遺傳修飾與FLHS表觀遺傳學(xué)是近年來(lái)發(fā)展迅速的新興學(xué)科，它可在不影響基因序列的情況下通過(guò)DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA調(diào)控等表觀修飾來(lái)雙向改變基因表型。隨著表觀遺傳學(xué)的發(fā)展，由此也為FLHS致病機(jī)制的研究提供了新的視角。

3.3.2組蛋白修飾與FLHS 除DNA甲基化外，組蛋白修飾也可以影響脂質(zhì)的代謝。HU等[38]在往雞蛋注射甜菜堿時(shí)發(fā)現(xiàn)新生仔雞的肝臟內(nèi)AHCYL1、DNMT1的含量和H3K27me3水平出現(xiàn)了明顯波動(dòng)，并伴隨著膽固醇代謝相關(guān)酶HMGCR、CYP7A1、ABCA1等的異常表達(dá)，證實(shí)甜菜堿可通過(guò)表觀遺傳修飾介導(dǎo)新生仔雞的膽固醇代謝。L-PK(L-型丙酮酸激酶)與NAFLD有著密切聯(lián)系，對(duì)細(xì)胞增殖和糖脂代謝有積極的推動(dòng)作用。而ZHANG等[39]用黃連素飼喂NAFLD小鼠時(shí)L-PK啟動(dòng)子的甲基化水平明顯下降，并且伴隨其周圍H3、H4(H3K9、H3K18、H4K8、H4K12等)的乙酰化水平的顯著上升，推動(dòng)了L-PK的表達(dá)，加速了肝臟中糖脂類物質(zhì)的分解。此前還有大量研究表明異常的組蛋白修飾與Ⅱ糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)，易導(dǎo)致胰島素抵抗，進(jìn)而引發(fā)NAFLD[40]。并且研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD的產(chǎn)生往往與組蛋白的三甲基化修飾有著密切聯(lián)系，高脂飼喂的小鼠體內(nèi)H3K4me3、H3K9me3 水平的上升促進(jìn)了PPARα及其網(wǎng)絡(luò)周圍基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，進(jìn)一步加劇了脂質(zhì)堆積[41]。組蛋白修飾包括甲基化、乙酰化、泛素化等多種修飾，其中乙酰化修飾最為廣泛，受到HAT與HDAC的共同調(diào)控。LEE等[42]在研究中發(fā)現(xiàn)HAT與HDAC的不平衡會(huì)引起肝臟中基因表型的異常而導(dǎo)致肝功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致NAFLD。此外，在組蛋白的眾多修飾酶中研究較多的有P300(乙酰化酶)和SIRT1、SIRT3(去乙酰化酶)。P300主要介導(dǎo)與脂質(zhì)合成、糖酵解有關(guān)的ChREBP的乙酰化，通過(guò)上調(diào)其轉(zhuǎn)錄活性，誘發(fā)NAFLD。SIRT1、SIRT3都是屬于SIRTs家族的去乙酰基轉(zhuǎn)移酶，SIRT1主要發(fā)揮抗炎、抗高脂血、增強(qiáng)胰島素活性及調(diào)節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)等作用。SIRT3則主要參與脂肪酸的氧化和維持線粒體的完整性。當(dāng)對(duì)小鼠特異性的敲除SIRT1或SIRT3后，小鼠表現(xiàn)出了脂肪變性、胰島素抵抗、高脂血癥、NAFLD、脂肪性肝炎等一系列癥狀[43]。由此可見(jiàn)，通過(guò)對(duì)特定組蛋白修飾酶的抑制與激活或許可為預(yù)防NAFLD或FLHS提供方向。

3.3.3microRNA與FLHS 近期非編碼小RNA調(diào)控也是研究FLHS的熱點(diǎn)。microRNA 作為一種小的、非編碼的RNA，主要通過(guò)阻止靶向mRNA 的翻譯來(lái)調(diào)控基因表達(dá)，參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡及對(duì)碳水化合物與脂類的代謝調(diào)節(jié)。此前有大量研究表明高脂飲食構(gòu)建的NAFLD動(dòng)物模型中出現(xiàn)了肝組織內(nèi)miRs和靶基因的差異表達(dá)，如小鼠模型中miR-33a、miR-34a、miR-122等上調(diào)，miR-467b、miR-216、iR302a等下調(diào)的情況[44-49]。除此之外大量研究表明在NAFLD的發(fā)展過(guò)程中miR-122、miR-34a、miR-16及miR-21等在血漿中的水平也出現(xiàn)了明顯改變[50-53]，這表明特定miRs的血漿水平或許可作為診斷NAFLD及其嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。如豐度最高的miR122被認(rèn)為是評(píng)估NASH患者發(fā)展成HCC風(fēng)險(xiǎn)的標(biāo)志分子，也被認(rèn)為是治療高膽固醇血癥及其他血脂異常的潛在治療靶點(diǎn)[54]。miR-34a也是參與膽固醇及脂肪酸合成的重要miR，它可抑制SIRT1與PPAR表達(dá)激活，當(dāng)其過(guò)表達(dá)時(shí)易引起脂肪的堆積變性，沉默時(shí)SIRT1、PPARa及其下游基因也相對(duì)的隨之恢復(fù)激活。此前DERDAK等[55]研究發(fā)現(xiàn)P53可通過(guò)抑制miR-34a從而活化SIRT1/(PGC1a)/PPARa通路來(lái)改善NAFLD小鼠體內(nèi)的肝損傷與脂肪變性。miRs在影響脂質(zhì)代謝和炎癥發(fā)展的過(guò)程中受到表觀調(diào)控，SERNA等[56]研究結(jié)果表明編碼H3K27的甲基轉(zhuǎn)移酶-EZH2活性的缺失，可通過(guò)上調(diào)促炎性因子以及miR-200b和miR-155的表達(dá)推動(dòng)脂肪堆積，促進(jìn)NAFLD的發(fā)展。最近TAN等[57]研究篩選出了3個(gè)受DNA甲基化和IncRNA共同調(diào)控的靶基因(ABCD3、HAO1、BLMH)。目前miRs被認(rèn)為是NAFLD潛在的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，通過(guò)對(duì)這些代謝相關(guān)靶基因的深入研究或許可推動(dòng)對(duì)FLHS分子機(jī)制的理解及保肝類藥物的生產(chǎn)與發(fā)展，從而更好地防治FLHS的發(fā)生。

目前，有關(guān)表觀遺傳對(duì)FLHS調(diào)控的研究相對(duì)較少，其影響FLHS形成的機(jī)制還需進(jìn)一步的研究。

4 診斷與防控

4.1 診斷

4.1.1臨床癥狀 發(fā)病初期，患雞無(wú)明顯的臨床癥狀，主要表現(xiàn)為過(guò)度肥胖、體質(zhì)量異常，超出正常值的25%，且產(chǎn)蛋量在短時(shí)間內(nèi)呈急劇下降，有些甚至出現(xiàn)產(chǎn)蛋停止現(xiàn)象。外表觀之雞冠和肉髯蒼白、萎縮、腹部膨大下垂、觸之柔軟，可摸到厚實(shí)的脂肪組織。隨著病情的發(fā)展，患病雞出現(xiàn)精神沉郁、排稀糞、嗜睡、癱瘓等癥狀，并在明顯癥狀出現(xiàn)后的1～2 d 內(nèi)死亡。

4.1.2病理剖檢 剖檢后可見(jiàn)患死雞心、肝、胃、腸等各器官表面有不同程度的脂肪沉積，腹腔含淡紅色積液或血凝塊。肝臟腫大、質(zhì)脆、顏色發(fā)黃、表面伴隨大小不一的出血點(diǎn)或壞死灶，切開(kāi)后可見(jiàn)內(nèi)部結(jié)構(gòu)模糊，充滿脂肪。

4.1.3實(shí)驗(yàn)室檢查 取病死雞的肝臟制成切片于顯微鏡下觀察，可見(jiàn)細(xì)胞的胞漿內(nèi)有數(shù)量不一的脂滴存在，不同脂滴融合將胞核壓向一側(cè)，呈現(xiàn)不同程度的脂肪變性現(xiàn)象。嚴(yán)重時(shí)，細(xì)胞間的界限消失，使得肝索與肝竇的結(jié)構(gòu)難以區(qū)分。隨之肝細(xì)胞會(huì)發(fā)生壞死，周圍并伴隨大量單核細(xì)胞浸潤(rùn)，其間質(zhì)內(nèi)充滿脂肪。

4.1.4早期診斷 由于該病的病情發(fā)展迅速，患病雞常在工作人員尚未覺(jué)察的情況下便突然死亡，故以上方法均算不上最佳診斷方案。出于對(duì)經(jīng)濟(jì)效益的考量，目前通常采取早期診斷的方式來(lái)避免FLHS的發(fā)生。通過(guò)監(jiān)測(cè)蛋雞體內(nèi)特定物質(zhì)的血液生化指標(biāo)，可為早期診斷提供依據(jù)。劉鑫等[58]的研究結(jié)果表明，病雞體內(nèi)總伴隨著Che、HDL-Ch等物質(zhì)含量的上升及LDL-Ch、T-Ch等含量的下降，當(dāng)其中Che占血漿總膽固醇含量的百分比低于60%時(shí)可將其作為FLHS發(fā)病診斷的早期指標(biāo)。而HDL-Ch與LDL-Ch的比值低于50%時(shí)也預(yù)示著有患發(fā)FLHS的可能。此外，ALT與AST的升高則通常作為肝損傷的重要指標(biāo)。

4.2 防控措施

4.2.1藥物治療 對(duì)于病情較輕的FLHS患病雞可采用按每千克飼料中添加1 g氯化膽堿、900 mg肌醇、10 000 IU的VE及12 mg VB12的劑量服用3～4 周來(lái)緩解。由于該方法耗時(shí)較長(zhǎng)，故也可對(duì)患病雞連續(xù)10 d單純性投喂0.1～0.2 mg氯化膽堿來(lái)治療。對(duì)于病情嚴(yán)重的，按嚴(yán)重程度在上述方法的基礎(chǔ)上多增加幾個(gè)療程。

4.2.2適時(shí)調(diào)整飼糧 盡量給蛋雞飼喂?fàn)I養(yǎng)豐富的全價(jià)糧，保證營(yíng)養(yǎng)均衡，滿足產(chǎn)蛋需求，注意飼糧中的能量水平。由于產(chǎn)蛋期的能量需求高，故在不同的產(chǎn)蛋階段需對(duì)飼糧的蛋白能量比作出相應(yīng)調(diào)整。當(dāng)能量過(guò)高時(shí)，可將飼糧中的玉米用麩皮、大麥等替代。合理的使用添加劑VE、Se、黃酮類化合物及白芍、柴胡、龍膽草、山楂等中藥藥材也可在一定程度上預(yù)防脂肪肝的發(fā)生。除了調(diào)節(jié)飼糧營(yíng)養(yǎng)，對(duì)于雞群中的某些肥胖個(gè)體也可通過(guò)采取限飼的措施來(lái)減少蛋雞脂肪肝的發(fā)病率。

4.2.3加強(qiáng)日常管理 保證雞舍內(nèi)的環(huán)境安寧和清潔衛(wèi)生，定期進(jìn)行消毒及維持通風(fēng)良好，避免有毒氣體在舍內(nèi)蓄積。盡量把握好飼養(yǎng)密度，保證每只雞都有足夠的運(yùn)動(dòng)空間。當(dāng)處于夏季高溫時(shí)注意給舍內(nèi)進(jìn)行降溫處理，減少熱應(yīng)激的發(fā)生。同時(shí)，在選種時(shí)也盡量避免選擇易感品種，定期檢查雞群，對(duì)于超出正常體質(zhì)量的15%～20%的雞只進(jìn)行淘汰處理，還要注意時(shí)常檢查飼糧，以免雞群誤食霉變帶毒的飼料，增加患上FLHS的風(fēng)險(xiǎn)。

5 結(jié)語(yǔ)

只有深入了解FLHS形成的分子機(jī)制才能從根本上預(yù)防該病的發(fā)生，然而目前，有關(guān)FLHS致病機(jī)制的研究還不是很全面。針對(duì)脂肪肝的分子層面的研究也大多集中在以小鼠為模型的NAFLD上，對(duì)FLHS分子機(jī)制的研究依舊乏善可陳。盡管FLHS與人類的NAFLD的發(fā)病機(jī)制存在許多相似之處，然而大多數(shù)研究中揭示的結(jié)論由于樣本量小，缺乏在相應(yīng)蛋雞FLHS模型中進(jìn)行大量驗(yàn)證而未能有統(tǒng)一定論。故未來(lái)應(yīng)進(jìn)一步大力開(kāi)展相關(guān)生物學(xué)功能研究，揭示FLHS形成的分子機(jī)制，找出其作用的關(guān)鍵信號(hào)通路及其目標(biāo)位點(diǎn)，通過(guò)篩選出診斷相關(guān)分子標(biāo)記物和關(guān)鍵靶基因等來(lái)為促進(jìn)FLHS的預(yù)防和治療，推動(dòng)保肝類藥物的研發(fā)生產(chǎn)提供理論支撐。