早搏靈膠囊對(duì)腎上腺素誘導(dǎo)室性心律失常家兔的影響及作用機(jī)制的研究*

陳波，楊雪華，張琪，周亞濱，于曉紅，徐京育，張雪松，宋雪，張瑜，孫琳琳，牛雯穎

1 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院 黑龍江哈爾濱 150040

2 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 黑龍江哈爾濱 150040

室性心律失常（Ventricular arrhythmia，VA）是來(lái)源于心室的節(jié)律或者速率紊亂導(dǎo)致的心律失常，是臨床中比較常見(jiàn)的心律失常類(lèi)型，其中包括室性期前收縮、室速、室撲和室顫，其發(fā)作具有潛在危險(xiǎn)性[1]。引起室性心律失常的原因眾多，交感神經(jīng)過(guò)度興奮是室性心律失常發(fā)生的主要原因之一，交感神經(jīng)系統(tǒng)的急慢性激活均可不同程度地引發(fā)機(jī)體內(nèi)釋放兒茶酚胺類(lèi)物質(zhì)，心肌細(xì)胞在高濃度兒茶酚胺類(lèi)物質(zhì)的作用下，導(dǎo)致細(xì)胞膜上的離子通道功能產(chǎn)生病理性改變，進(jìn)而導(dǎo)致室性心律失常的發(fā)生[2]。目前對(duì)于交感神經(jīng)興奮導(dǎo)致的室性心律失常的治療，西醫(yī)主要是以口服β受體阻滯劑藥物為主，嚴(yán)重的患者則需要考慮是否進(jìn)行介入等手術(shù)治療方案進(jìn)行醫(yī)治。由于長(zhǎng)期口服西藥治療過(guò)程中，多數(shù)會(huì)產(chǎn)生副作用。以及手術(shù)費(fèi)用昂貴等問(wèn)題，導(dǎo)致了西醫(yī)治療心律失常方面存在一定的局限性。

隨著不斷深入研究，中醫(yī)藥在針對(duì)心律失常方面的治療取了一定的進(jìn)展，中醫(yī)治療方案產(chǎn)生的副作用小，療效顯著，可對(duì)患者全身狀態(tài)的調(diào)節(jié)，可達(dá)到標(biāo)本兼治的效果。但是臨床上的抗心律失常的復(fù)方中成藥數(shù)量不多，早搏靈膠囊作為院內(nèi)制劑，已經(jīng)在我院臨床應(yīng)用多年，療效顯著。本研究通過(guò)預(yù)防性給予早搏靈膠囊藥物，觀(guān)察腎上腺素誘導(dǎo)的家兔產(chǎn)生的室性心律失常情況及心肌組織鈉鉀ATP酶活性的影響，探討早搏靈膠囊治療室性心律失常的療效與作用機(jī)制。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)新西蘭家兔，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供（動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（黑）2013-001），共32只，體質(zhì)量（2.28±0.25）kg，雌雄各半。飼養(yǎng)溫度17～24℃，通風(fēng)良好，溫度適宜，固體飼料，自由飲水。

2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑

早搏靈膠囊（由紅參、黃芪、麥門(mén)冬、當(dāng)歸、山楂、苦參、黃芩、青皮、丹參組成），（規(guī)格：每粒 0.25g），由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院提供（黑藥制字Z20110063，批號(hào)：20170324）；鹽酸普萘洛爾片（規(guī)格：每片10mg），由山西云鵬制藥有限公司提供（批號(hào)：G160901）；鹽酸腎上腺素注射液，由哈爾濱三馬獸藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)：20160902）；氨基甲酸乙酯（分析純），由天津市百世化工有限公司提供（批號(hào)：20150203）；氯化鈉注射液，由哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司提供（批號(hào)：161104D12）；ATP 酶檢測(cè)試劑盒、考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供（批號(hào)：201703）。

3 實(shí)驗(yàn)儀器

十六導(dǎo)生理記錄儀MP150（BIOPAC Systems，Inc.），BECKMAN低溫超速離心機(jī)（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司），TGL-16G型高速臺(tái)式離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠(chǎng)），電子分析天平（梅特勒－托利多儀器（上海） 有限公司），心電機(jī)（655I型，上海KOHDEN電子有限公司），BECKMAN－DU640紫外分光光度儀（美國(guó)Pharmacia Biotech公司），電熱恒溫水溫箱（HH.W21.CU600，溫度范圍： 37～65℃，上海醫(yī)療器械廠(chǎng)），低溫冰箱（MDF－U50V日本三洋公司）。

4 實(shí)驗(yàn)方法

將32只健康家兔，隨機(jī)分配為4組。每組8只，模型組、空白組給予生理鹽水40mL/kg灌服；早搏靈組給予8.2mg/ml的早搏靈溶液40mL/kg灌服；對(duì)照組給0.16mg/ml的鹽酸普萘洛爾片40mL/kg灌服。每日灌胃給藥1次，連續(xù)7d。次給藥1h后，用20%烏拉坦（6ml/kg）耳緣靜脈注射麻醉后，記錄正常心電圖，然后沿著耳緣靜脈快速注射0.1%腎上腺素50μg/kg（5s內(nèi)注射完），同時(shí)描記家兔心電圖和心率變化，心電觀(guān)察完成后，處死家兔，取家兔心肌組織，采用定磷法進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)測(cè)酶促反應(yīng)過(guò)程中無(wú)機(jī)磷的釋放量來(lái)測(cè)定心肌組織鈉鉀ATP酶的活性。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料都用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）來(lái)表示，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，則多樣本之間比較使用方差分析，組間對(duì)比用LSD-t檢驗(yàn)，若不符合正態(tài)分布，則用非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05為數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組處理對(duì)腎上腺素誘導(dǎo)的心律失常模型家兔心電圖影響的比較

與模型組進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，早搏靈膠囊組和普萘洛爾組能明顯推遲家兔室性心律失常出現(xiàn)時(shí)間，縮短家兔室性心律失常持續(xù)時(shí)間，具有顯著性差異（P＜0.05）；早搏靈膠囊組與普萘洛爾組在縮短家兔室性心律失常持續(xù)時(shí)間上無(wú)明顯差異（P＞0.05），但其延遲家兔室性心律失常出現(xiàn)時(shí)間的作用低于普萘洛爾組，具有顯著性差異（P＜0.05）。見(jiàn)表 1。

表1 各組處理對(duì)腎上腺素誘導(dǎo)的心律失常模型家兔心電圖影響的比較（）

表1 各組處理對(duì)腎上腺素誘導(dǎo)的心律失常模型家兔心電圖影響的比較（）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與普萘洛爾組比較，#P＜0.05。

組別 動(dòng)物只數(shù) 室性心律失常出現(xiàn)時(shí)間/s室性心律失常持續(xù)時(shí)間/s空白組 8 — —模型組 8 16.09±6.02 117.00±33.50普萘洛爾組 8 32.56±9.06* 81.26±21.19*早搏靈膠囊組 8 23.46±6.28*# 85.20±20.12*

2 各組家兔心肌組織鈉鉀ATP酶（Na+ -K+ ATPase）活性比較

與空白組比較，模型組家兔的鈉鉀ATP酶活性降低，有極顯著性差異（P＜0.01）；與空白組比較，早搏靈膠囊組、普萘洛爾組的家兔鈉鉀ATP酶活性降低，均有顯著差異（P＜0.05）。與模型組比較，早搏靈膠囊組、普萘洛爾組兩組家兔鈉鉀ATP酶活性明顯增高，均有顯著性差異（P＜0.05）；與普萘洛爾組相比，早搏靈膠囊組家兔的鈉鉀ATP酶活性低于普萘洛爾組，有顯著性差異（P＜0.05）。以上說(shuō)明，早搏靈膠囊組與普萘洛爾均可提高心律失常家兔鈉鉀ATP酶活性，普萘洛爾組優(yōu)于早搏靈膠囊組。見(jiàn)表2。

表2 各組家兔心肌組織鈉鉀ATP酶（Na+-K+ATPase）活性比較（）

表2 各組家兔心肌組織鈉鉀ATP酶（Na+-K+ATPase）活性比較（）

注：與空白組組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與普萘洛爾組比較，·P＜0.05。

組別 動(dòng)物只數(shù) Na+-K+ATPase活性（μmolPi/mgprot/h）空白組 8 4.12±0.94模型組 8 2.89±0.58*普萘洛爾組 8 3.76±0.47*△早搏靈膠囊組 8 3.31±0.66*△·

討 論

從中醫(yī)角度來(lái)講，室性心律失常歸屬于中醫(yī)“心悸”領(lǐng)域，心悸的病機(jī)多為虛實(shí)夾雜，多由于素體虛弱、情志不遂、飲食不節(jié)以及感受外邪，導(dǎo)致人體內(nèi)氣血不足、陰陽(yáng)失衡，心脈運(yùn)行不暢，心神失養(yǎng)而發(fā)病[3]。臨床上心悸患者癥候多為虛實(shí)夾雜的表現(xiàn)，并非單一證型。心悸日久，易耗氣傷陰，氣血運(yùn)行不暢，而致血行瘀滯。早搏靈膠囊主要適用于臨床上氣陰兩虛兼有瘀血內(nèi)停的患者。組方中以紅參為君，黃芪、麥冬為臣，君臣配伍，補(bǔ)潤(rùn)結(jié)合，以達(dá)益氣養(yǎng)陰之效，又加之當(dāng)歸、苦參、丹參等藥以行血活血，共奏榮心血、養(yǎng)心陰、行心血而不瘀滯之效，從而全方位調(diào)節(jié)，達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。通過(guò)前期臨床觀(guān)察，本藥物可以顯著提高患者的生活質(zhì)量，降低患者的心律失常的發(fā)生率，未產(chǎn)生不良反應(yīng)[4]。

心臟的節(jié)律收縮與傳導(dǎo)有賴(lài)于心肌細(xì)胞膜內(nèi)外的離子分布穩(wěn)態(tài)，離子分布紊亂則會(huì)導(dǎo)致心律失常的發(fā)生。鈉鉀ATP酶是鑲嵌在動(dòng)物膜上維持細(xì)胞膜內(nèi)外離子濃度穩(wěn)態(tài)的重要蛋白質(zhì)，它通過(guò)消耗ATP，可以向細(xì)胞外泵出3個(gè)鈉離子，向細(xì)胞內(nèi)泵進(jìn)2個(gè)鉀離子，它具有三個(gè)亞基單位，分為α、β、γ亞單位。其中α亞單位起到泵的主要作用[5]。當(dāng)心肌組織鈉鉀ATP酶活性降低時(shí)，“入鉀排鈉”的工作效率降低，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈉離子增多，鉀離子減少，胞內(nèi)鈣離子過(guò)多，使心肌細(xì)胞的自律性增高，傳導(dǎo)速度減緩，從而導(dǎo)致心律失常的發(fā)生[6]。實(shí)驗(yàn)所用的造模藥物腎上腺素是一種重要的兒茶酚胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)，以其造模可誘導(dǎo)家兔產(chǎn)生類(lèi)似于臨床上交感神經(jīng)興奮導(dǎo)致的室性心律失常[7]。腎上腺素通過(guò)作用于心肌細(xì)胞的β腎上腺素能受體，使β腎上腺素能受體激活，激活的β受體則會(huì)與心肌細(xì)胞膜上的鈉鉀泵α1亞基偶聯(lián)，使α1亞基從胞漿膜上轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致鈉鉀ATP酶活性降低[8]，從而引發(fā)一系列反應(yīng)，導(dǎo)致家兔發(fā)生室性心律失常。

早搏靈膠囊的君藥紅參中的有效成份，可以改善細(xì)胞的能量代謝，對(duì)于心、脾等相關(guān)組織的鈉鉀ATP酶有不同程度的激活作用，對(duì)鎂ATP酶產(chǎn)生抑制作用[9]；臣藥黃芪可以正向保護(hù)心肌細(xì)胞鈉鉀ATP酶的活性，對(duì)鈉、鉀電子流起到調(diào)控作用，實(shí)現(xiàn)正性肌力作用[10]；黃芩的主要成份黃芩甙可以通過(guò)提高鈉鉀ATP酶活性抑制哇巴因所致的心律失常[11]。其他組成藥物雖沒(méi)有直接對(duì)鈉鉀ATP酶產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，但是研究發(fā)現(xiàn)它們可以對(duì)心臟電生理產(chǎn)生不同程度的影響。當(dāng)歸對(duì)鈣通道有一定的阻滯效果，同時(shí)也可以抑制鈉離子向胞內(nèi)流動(dòng)和鉀離子向胞外流出[12]；紅參、苦參、丹參酮均可以不同程度地抑制心肌細(xì)胞膜上的離子電流[13-15]，并且丹參有較好的抗室性心律失常的作用[16]；麥冬、青皮可以提高心肌收縮力，有效抵抗心律失常[17-18]；山楂可有效抑制心肌細(xì)胞內(nèi)鉀離子外流，可以產(chǎn)生類(lèi)似于Ⅲ類(lèi)抗心律失常藥物的作用[19]。組方中藥物之間的相互配伍，也可提高抗心律失常的作用。黃芪和當(dāng)歸作為益氣補(bǔ)血的藥對(duì)，兩者配伍可增強(qiáng)藥理作用，提高對(duì)心肌細(xì)胞的正向保護(hù)作用[20]，亦可能提高黃芪對(duì)于鈉鉀泵的活性的保護(hù)。麥冬與紅參合用后可以加強(qiáng)對(duì)于心肌電生理的影響，提高抗心律失常的療效[21]。這些都為早搏靈膠囊可以提高鈉鉀泵的活性以及抗心律失常的作用提供了可靠的理論依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)家兔心電圖時(shí)相變化的觀(guān)察記錄，發(fā)現(xiàn)早搏靈膠囊可以有效延遲腎上腺素誘導(dǎo)的家兔的室性心律失常出現(xiàn)時(shí)間，縮短家兔的室性心律失常持續(xù)時(shí)間；顯著提高家兔的心肌組織鈉鉀ATP酶的活性，驗(yàn)證了上文觀(guān)點(diǎn)。由此可以推測(cè)出早搏靈膠囊可以通過(guò)上調(diào)鈉鉀ATP酶活性，調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞膜內(nèi)外Na+、K+分布，維持心肌細(xì)胞膜內(nèi)外離子的分布穩(wěn)定，這可能早搏靈膠囊對(duì)抗腎上腺素誘導(dǎo)的室性心律失常的作用機(jī)制之一。