禽源NME/NM23核苷二磷酸激酶2(NME2)基因的克隆及表達(dá)鑒定

謝麗基，謝芝勛，王盛，黃嬌玲，鄧顯文，謝志勤，羅思思，曾婷婷，張艷芳，張民秀，范晴

(廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所/廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530001)

禽呼腸孤病毒(ARV)主要引起家禽的病毒性關(guān)節(jié)炎/腱鞘炎、矮小綜合征及吸收不良綜合征等，尤為嚴(yán)重的是誘發(fā)免疫抑制，造成家禽對疫苗免疫應(yīng)答能力和各種病原體抵抗力降低。σA蛋白是禽呼腸孤病毒S2基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白，能激活PI3K-AKT信號通路的作用[1]，與禽呼腸孤病毒抗干擾素作用有關(guān)[2]，在ARV的感染致病過程中發(fā)揮重要作用。本課題組在前期的免疫共沉淀(CO-IP)、質(zhì)譜鑒定以及酵母雙雜交篩選的研究中發(fā)現(xiàn)，禽源NME2是潛在的與禽呼腸孤病毒 σA 蛋白互作的宿主蛋白[3]。

NME(non-metastasis cells)基因即NM23基因，是Steeg等[4]學(xué)者從7株轉(zhuǎn)移能力不同的小鼠黑色素瘤細(xì)胞系中，用差示雜交的方法蹄選鑒定出的一種與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)的基因，他們將此基因命名為NME基因。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)屬于基因家族的有10種，它們分別是到NME1到NME10[5]。二磷酸核苷激酶(nucleoside diphosphate kinase，NDPK)活性是NME家族共同的特征[6]，其中，NME2(NME/NM23核苷二磷酸激酶2)編碼的NDPK的B亞基，具有核苷二磷酸激酶活性，催化二磷酸核苷轉(zhuǎn)化為相對應(yīng)的三磷酸核苷[7]，參與細(xì)胞的的能量代謝[8]、微管解聚[9]等過程，影響腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。

因此，本研究構(gòu)建禽源NME2基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pEF1α-Myc-NME2，為后續(xù)進(jìn)一步驗(yàn)證宿主蛋白NME2是否與禽呼腸孤病毒σA相互作用，并研究其對σA基因功能的影響奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試驗(yàn)試劑

RT-PCR試劑盒、pMDTM18-T Vector Cloning Kit、PrimeScript Ⅱ 1stStrand cDNA Synthesis Kit、pEF1α-Myc載體和限制性內(nèi)切酶SalⅠ和NotⅠ購自寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)公司；……