禽白血病病毒衣殼蛋白p15基因慢病毒表達載體的構建及其在雞肝癌細胞系中的表達

沈逵，何倩，秦愛建,3，錢琨,3*

(1.揚州大學教育部禽類預防醫學重點實驗室，江蘇 揚州 225009；2.揚州大學江蘇省動物預防醫學重點實驗室，江蘇 揚州 225009；3.江蘇高校動物重要疫病與人獸共患病防控協同創新中心，江蘇 揚州 225009)

禽白血病病毒(avian leukosis virus，ALV)是一種能夠引起宿主產生嚴重免疫抑制的反轉錄病毒，最終導致宿主產生多種惡性腫瘤[1]。嚴重的免疫抑制常常造成多種病原的混合感染，有研究表明，先天感染ALV是導致雞馬立克病疫苗免疫效果低下的主要原因之一[2]，其與禽網狀內皮組織增生癥病毒共感染條件下可以促進彼此的復制[3-4]，因此ALV對養禽業危害嚴重。

ALV的基因組具有典型的慢轉化型反轉錄序列：5′-R-U5-gag-pol-env-U3-R-3′[5]，主要編碼各種結構蛋白(gag、pol、env)，包括磷蛋白(如p19)、核衣殼蛋白(如p15、p27)、DNA聚合/整合酶蛋白(如p68、p32)、囊膜蛋白(如gp85、gp37)等。gag基因十分保守，主要編碼12 kDa、15 kDa、19 kDa和27 kDa 4種蛋白質，它們分別命名為p12、p15、p19和p27，其中p15和p27為衣殼蛋白[6]。目前對病毒編碼蛋白的研究主要集中在p27、gp85和gp37蛋白，已報道的研究發現，gp37在胞漿區域的C末端酪氨酸基序在體內外均可影響ALV-J的致病性[7]，gp85含有病毒受體決定簇，其高變區和可變區決定了ALV的中和活性和特異性[8]，p27存在多種抗原表位，基因組十分保守，是群特異性抗原，常被作為各亞群ALV的檢測指標[9]。衣殼蛋白p15作為一種由124個氨基酸組成的蛋白酶，可對gag和pol基因編碼的多聚蛋白進行切割，使其加工成為成熟的非糖基化蛋白和一些多肽。有研究表明，gag末端攜帶活化狀態下的p15時，前體蛋白的成熟和釋放過程將十分迅速，并且p15-蛋白N端的7個氨基酸組成的區域有增加病毒裝配效率的作用[10]。……