黔產迎春花質量標準研究

姜 蓮 程 韜 王影超 舒 柯

貴州省食品藥品檢驗所，貴州 貴陽 550004

迎春花，又稱金腰帶、黃素馨，為木犀科植物迎春花JasminumnudiflorumLindl.的干燥葉和花。春、夏、秋三季均可采摘，晾干或曬干。藥用價值在我國歷史悠久，主要功效為解毒消腫、清熱利尿、止血止痛，用于發熱頭痛、小便熱痛、跌撲損傷、外傷出血、口瘡、癰癤腫痛、下肢潰瘍[1]。產于貴州思南、貴陽、安順等地。我國山西、陜西、甘肅、山東、河南、江蘇、四川、云南也有分布[2]。王佩珩等[3-4]對迎春花的化合物進行分析，得到裂環烯醚萜類化合物、黃酮類化合物、迎春花黃色素、多糖類化合物、揮發油類和脂肪酸類等。為提高迎春花的質量控制水平，本實驗建立顯微鑒別、薄層鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物及總黃酮的含量測定，為迎春花的研究及質量控制提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 奧林巴斯BX51型顯微鏡(OLYMPUS)，雙光束紫外可見分光光度計TU-1901(北京普析通用儀器有限責任公司)，電子調溫電熱套98-I-C(天津泰斯特儀器有限公司)，四用式暗箱紫外分析儀ZF-8(驥輝分析儀器(上海)有限公司)。

1.2 材料 3批迎春花藥材均自貴州，分別產至貴州安順(批號：180801)、貴州貴陽(批號：180802)、貴州貴陽(批號：180803)，樣品及對照藥材經貴州省食品藥品檢驗所標本館熊慧林老師檢定，均為迎春花，并存于貴州省食品藥品檢驗所；蘆丁(110752-201514)來源于中國食品藥品檢定研究院；硅膠G薄層板：青島海洋化工廠分廠生產的硅膠G薄層板(批號：20170408)及自制硅膠G薄層板；試劑：稀甘油、水合氯醛試液、三氯甲烷、甲醇、硫酸、乙醇均為分析純。

2 方法與結果

2.1 顯微鑒別 取本品內容物置顯微鏡下觀察：本品粉末淡棕色。葉表皮細胞含砂晶，有氣孔；木纖維常見，直徑5～30 μm，花粉粒圓形、類圓形、橢圓形，直徑20～45 μm，外壁薄，壁上偶見壁溝，花粉粒表面具網格狀紋理。

2.2 薄層鑒別 取本品粉末2 g，加70%乙醇30 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取迎春花對照藥材2 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(75∶35∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。如圖2所示。

2.3 檢查

2.3.1 水分 按《中國藥典》2015年版四部通則0832第二法，測定并計算3批迎春花的水分含量(%)，平行操作2次，取平均值作為結果，結果：3批迎春花的水分為12.1%～13.5%。樣品測定結果為見表1。

2.3.2 總灰分 按《中國藥典》2015年版四部通則2302總灰分測定法，測定并計算3批迎春花的總灰分含量(%)，平行操作2次，取平均值作為結果，結果：3批迎春花的總灰分為5.0%～5.8%。樣品測定結果為見表1。

2.3.3 酸不溶性灰分 按《中國藥典》2015年版四部通則2302總灰分測定法，測定并計算3批迎春花的酸不溶性灰分含量(%)，平行操作2次，取平均值作為結果，結果：3批迎春花的酸不溶性灰分為0.7%～1.2%。樣品測定結果為見表1。

表1 水分、總灰分、酸不溶性灰分測定結果

2.4 浸出物 按《中國藥典》2015年版四部通則2201浸出物測定法進行測定，分別用乙醇、50%乙醇、水作為溶劑，熱浸法和冷浸法分別測定浸出物，平行操作兩次，取平均值作為結果。根據測定結果，選擇浸出物含量最高的方法作為浸出物方法，故浸出物測定法為以稀乙醇為溶劑的冷浸法，其測定結果見表2。

表2 浸出物測定結果 (%)

2.5 總黃酮的含量測定[5]

2.5.1 供試品溶液的制備 取迎春花粗粉約1.2 g，精密稱定，精密加入50 mL 70%乙醇，置具塞錐形瓶中，密塞，稱定重量，加熱回流40 min，放冷，再次稱定重量，用70%乙醇不租減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液即得。

2.5.2 對照品溶液的制備 取蘆丁對照品20 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加70%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL含蘆丁0.2 mg)。

2.5.3 標準曲線的制備及線性關系考察 精密量取對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min。加氫氧化鈉試液10 mL，再加水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在500 nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線(如圖3所示)，得回歸方程：Y=0.0133X-0.0047(r=0.9999)，在7.909～47.454 μg蘆丁與吸光度之間線性關系良好。

2.5.4 測定法 精密量取供試品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加70%乙醇至6 mL，照標準曲線制備項下的方法，自“加亞硝酸鈉溶液1 mL”起，依法測定吸光度，同時取供試品溶液1 mL，除不加氫氧化鈉試液外，其余同上操作，作為空白，從標準曲線上讀出供試品溶液中含蘆丁的重量(mg)，計算，即得。

2.5.5 精密度、穩定性與重復性試驗 取對照品溶液在500 nm的波長處測定吸光度，重復測定6次，RSD=0.2%，表明精密度良好。取供試品溶液，按“2.5.4”項方法測定吸光度，連續測定120 min，計算得含量的RSD=0.2%，表明穩定性良好。取同一批迎春花藥材共6份，每份1.2 g，精密稱定，按“2.5.1”項方法制備供試品并測定含量，計算得平均含量為2.50%，RSD=0.1%，表明重復性良好。見表3。

表3 重復性試驗

2.5.6 準確度試驗 精密稱取已知含量迎春花粉末0.6 g，平行操作6份，分別精密加入含蘆丁對照品(0.2967 mg/mL)50 mL，按“2.5.1”項制備供試品溶液，并按“2.5.4”方法測定吸收光，計算回收率。結果回收率為101.5%，RSD=0.3%,表明方法的準確度良好。見表4。

表4 回收率試驗數據 (n=6)

2.5.7 樣品測定 取3批迎春花樣品，按“2.5.1”“2.5.4”項下方法制備供試品溶液并測定吸光度，測定總黃酮的含量，結果見表5。

3 結果與討論

迎春花為貴州習用藥材，其現行標準質量控制項目較少，文獻關于迎春花質量研究也較少，本研究從定性、定量對迎春花藥材進行研究，定性研究中顯微特征明顯,薄層色譜分離效果較好，重現性佳, 水分、灰分、浸出物測定方法可行。

迎春花的花、葉中含有較為豐富的黃酮類，已有研究證實迎春花提取液具有很好的抗心律失常、鎮痛鎮靜、耐缺氧等作用，故含量以總黃酮為指標，分別考察了不同的提取方式(超聲、回流)，不同的提取溶劑(乙醇、70%乙醇、稀乙醇、25%乙醇)，不同的提取時間(回流30 min、40 min、50 min)，結果文中方法提取完全，重現性好，準確度高，方法可行。

隨著中藥現代化和國際化，民族藥資源的開發利用、保護極其重要，應更好地保證該品種的合理開發利用，藥材安全有效，質量可控穩定。本研究可為迎春花的質量控制提供參考依據。