PLCD3基因rs12946454位點多態性與山東漢族人群子癇前期遺傳易感性關系

[摘要] 目的

探討磷脂酶Cδ3（PLCD3）基因rs12946454位點多態性與山東漢族人群子癇前期遺傳易感性關系。

方法 用Taqman探針熒光定量PCR技術，對842例子癇前期病人以及1 013例正常妊娠婦女的PLCD3基因rs12946454位點進行基因型檢測，比較兩組基因型分布和等位基因頻率的差異。

結果 子癇前期組與對照組PLCD3基因rs12946454位點基因型分布及等位基因頻率差異無顯著性（Pgt;0.05）。輕度及重度子癇前期組、早發型及晚發型子癇前期組分別與對照組相比，PLCD3基因rs12946454位點基因型分布和等位基因頻率差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。輕度子癇前期與重度子癇前期相比、早發型子癇前期與晚發型子癇前期相比，PLCD3基因rs12946454位點基因型和等位基因頻率差異均無顯著性（Pgt;0.05）。

結論 PLCD3基因rs12946454位點多態性可能與山東漢族人群子癇前期發病不相關。

[關鍵詞] 先兆子癇;磷脂酶Cδ;多態性，單核苷酸;疾病遺傳易感性

[中圖分類號] R714.24;R363.25

[文獻標志碼] A

[文章編號] 2096-5532（2021）03-0407-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2021.57.042

[開放科學（資源服務）標識碼（OSID）]

[網絡出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20200903.0933.007.html;2020-09-03 15：56：50

ASSOCIATION OF PLCD3 GENE RS12946454 POLYMORPHISM WITH THE GENETIC SUSCEPTIBILITY TO PREECLAMPSIA IN THE CHINESE HAN POPULATION IN SHANDONG PROVINCE， CHINA

WANG Ling， TANG Qian， ZHANG Lu， LIU Shiguo， ZHANG Xiaoxiao， LIU Xuemei

（Department of Nephrology， The Affiliated Hospital of Qingdao University， Qingdao 266003， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the association of PLCD3 gene rs12946454 polymorphism with the genetic susceptibility to preeclampsia in the Chinese Han population in Shandong province， China.

Methods TaqMan probe real-time PCR was used to determine the genotype of PLCD3 gene rs12946454 in 842 patients with preeclampsia and 1 013 normal pregnant women， and genotype distribution and allele frequencies were compared between the two groups.

Results There were no significant differences in genotype distribution and allele frequencies of PLCD3 gene rs12946454 between the preeclampsia group and the control group （Pgt;0.05）. There were no significant differences in genotype distribution and alleles of PLCD3 gene rs12946454 between the mild/severe/early-onset/late-onset preeclampsia groups and the control group （Pgt;0.05）. There were no significant differences in genotype distribution and allele frequencies of PLCD3 gene rs12946454 between the mild preeclampsia group and the severe preeclampsia group， as well as between the early-onset preeclampsia group and the late-onset preeclampsia group （Pgt;0.05）.

Conclusion The polymorphism of PLCD3 gene rs12946454 may not be associated with the onset of preeclampsia in the Chinese Han population in Shandong province.

[KEY WORDS]pre-eclampsia; phospholipase C delta; polymorphism， single nucleotide; genetic predisposition to disease

子癇前期是一種常見的妊娠期疾病，是造成孕產婦死亡的主要原因之一，與圍產兒死亡率增加顯著相關[1]。子癇前期表現為妊娠20周后新出現高血壓和蛋白尿，但在母體癥狀出現之前便可出現全身內皮細胞功能障礙[2]。目前子癇前期發病機制尚不完全清楚，研究認為子癇前期發病與血管生成和抗血管生成失衡、免疫反應、氧化應激、炎癥反應和遺傳因素等密切相關[3-7]。研究發現，來自母體和胎兒的多種遺傳因素在子癇前期發病中起著重要作用[8]。關于子癇前期家族史的一項調查研究表明，除了種族、區域和社會經濟因素以外，遺傳因素導致了50%以上子癇前期的發生[9]。對歐洲血統人群進行的一項全基因組關聯研究（GWAS）發現，磷脂酶Cδ3（PLCD3）基因rs12946454位點與血壓增高有關[10]。但目前尚未有研究證實rs12946454位點多態性是否與妊娠期婦女高血壓疾病有聯系。本研究旨在探討PLCD3基因rs12946454位點單核苷酸多態性與山東漢族人群子癇前期易感性的關系，為子癇前期的診斷和篩查提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2017年3月—2019年6月期間，選取就診于青島大學附屬醫院、棗莊市婦幼保健院、聊城人民醫院、臨沂市人民醫院等子癇前期孕婦（子癇前期組）842例和年齡相匹配的足月分娩的正常妊娠婦女1 013例（對照組）作為研究對象。根據中華醫學會婦產科學分會妊娠期高血壓疾病學組頒布的《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》[11]制定子癇前期診斷標準，并根據疾病嚴重程度將子癇前期病人分為輕度子癇前期組與重度子癇前期組，根據發病時間分為早發型子癇前期（妊娠34周之前發病）組與晚發型子癇前期（妊娠34周之后發病）組。子癇前期組納入標準為：①妊娠20周以后出現血壓≥18.7/12.0 kPa;②24 h尿蛋白≥300 mg或尿蛋白/肌酐比值≥0.3或隨機尿蛋白gt;1+;③未發現蛋白尿但有其他器官或系統受累;④既往無原發性高血壓、腎功能異常、糖尿病和妊娠早期體質量超標（BMIgt;25 kg/m2）等病史。對照組孕婦無子癇前期病史，無自身免疫性疾病，無妊娠期并發癥等病史。兩組孕婦均為漢族。采集兩組孕婦年齡、家族史、生育史、胎齡等人口統計學資料信息及相關臨床檢查結果。本研究得到了青島大學附屬醫院倫理委員會的批準，并獲得研究對象知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 基因組DNA提取 使用含EDTA的真空采血管采集受試者外周靜脈血5 mL，置于-20 ℃冰箱保存。使用基因組DNA提取試劑盒（北京天根）提取基因組DNA。

1.2.2 PLCD3基因rs12946454位點的基因分型

采用實時熒光定量PCR（qPCR）技術對PLCD3基因rs12946454位點進行基因型檢測。rs12946454位點上游引物序列為：5′-CACTCTCCACACTCA-CTCCTGCCCA-3′;下游引物序列為：5′-GCCCTT-TCTGGGGCTCCTGATGCCC-3′。所使用的Taqman探針由美國ABI公司設計合成。qPCR反應體系25.00 μL，內含： 20×SNP探針1.25 μL，2×PCR Master Mix 12.50 μL，模板DNA和去離子水共11.25 μL。PCR反應條件為：95 ℃變性30 s，1個循環;95 ℃、10 s，60 ℃、30 s延伸40個循環;95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，95 ℃、15 s，1個循環。使用Bio-Rad CFX manager 3.0軟件分析基因型。

1.3 統計學分析

應用SPSS 22.0軟件進行統計學處理。符合正態分布的計量資料結果以±s表示，兩組間均數比較采用t檢驗;應用卡方檢驗評估基因型頻率與Hardy-Weinberg平衡的一致性，皮爾森卡方檢驗和Cochran-Armitage 趨勢檢驗比較各組基因型分布和等位基因頻率的差異。Plt;0.05表示差異有統計學意義。

2 結" 果

2.1 兩組一般資料比較

子癇前期組與對照組孕婦年齡、孕次及流產次數差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。子癇前期組病人入院孕周、分娩孕周及新生兒體質量均小于對照組，差異有統計學意義（t=-36.582～-26.956，P<0.01）。見表1。

與對照組比較，*t=-36.582～-26.956，P<0.01。

2.2 兩組PLCD3基因rs12946454位點基因型分布與等位基因頻率比較

子癇前期組及對照組PLCD3基因rs12946454位點基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（Pgt;0.05）。子癇前期組與對照組基因型分布差異無統計學意義（χ2=2.066，Pgt;0.05），兩組等位基因頻率差異亦無顯著意義（χ2=2.066，P=0.558，OR=0.954，95%CI=0.814～1.118）。見表2。

2.3 輕度子癇前期與重度子癇前期病人PLCD3基因 rs12946454位點基因型和等位基因頻率變化與對照組相比，輕度子癇前期及重度子癇前期病人PLCD3基因rs12946454位點基因型分布差異均無顯著性（χ2=0.164、0.269，Pgt;0.05），等位基因頻率差異也無統計學意義（輕度vs.對照：χ2=0.168，P=0.682，OR=0.934，95%CI=0.675～1.294;重度vs.對照：χ2=0.270，P=0.603，OR=0.957，95%CI=0.811～1.130）。輕度子癇前期和重度子癇前期病人相比，PLCD3基因rs12946454位點基因型分布及等位基因頻率差異無顯著性（基因型：χ2=0.021，P=0.884;等位基因：χ2=0.020，P=0.887，OR=0.976，95%CI=0.700～1.361）。見表2。

2.4 早發型與晚發型子癇前期病人PLCD3基因rs12946454位點基因型分布和等位基因頻率比較早發型子癇前期組、晚發型子癇前期組與對照組相比，PLCD3基因rs12946454位點基因型分布差異無統計學意義（χ2=0.690、0.001，Pgt;0.05），等位基因頻率差異亦無統計學意義（早發組vs.對照組：χ2=0.693，P=0.405，OR=0.924，95%CI=0.768～1.113;晚發vs.對照：χ2=0.000，P=0.983，OR=0.998，95%CI=0.807～1.234）。早發型子癇前期與晚發型子癇前期組PLCD3基因12946454位點基因型和等位基因頻率比較，差異無統計學意義（基因型：χ2=0.416，P=0.519;等位基因：χ2=0.398，P=0.528，OR=0.926，95%CI=0.730～1.175）。見表2。

3 討" 論

研究表明，子癇前期發病涉及多種過程，包括異常的滋養層浸潤、血管痙攣、血小板活化、血管運動調節因子失衡和胎盤缺血等[12]。雖然目前其發病機制還不完全清楚，但子癇前期只發生在妊娠期間或胎盤（滋養層）腫瘤存在的情況下，因而子癇前期是由胎盤因素觸發的[13]。在正常妊娠中，滋養層細胞進入母體子宮螺旋動脈，深入到螺旋動脈甚至肌層水平，使得母體螺旋小動脈廣泛重塑為高容量、高流量的血管，為胎兒提供營養[14]。在子癇前期胎盤中，滋養層細胞無法從增生的上皮細胞亞型轉變為侵襲性內皮細胞亞型，造成子宮螺旋動脈的不完全重塑，導致母體血管狹窄，胎盤相對缺血[15-16]。病變胎盤促進母體循環中可溶性有毒因子的釋放，從而導致炎癥、內皮功能障礙和母體系統疾病[17]。研究顯示，包括轉錄因子、生長因子及受體和其他信號轉導分子在內的多種基因參與胎盤發育[18]。

PLCD3基因位于第17號染色體的17q21.31，包含有16個外顯子，其中的rs12946454位點位于PLCD3基因的內含子中[10]。研究表明，PLCD3參與促進神經元遷移和軸突突起延長[19]，還在血管平滑肌信號傳導中起重要作用，可以被血管活性肽AngⅡ和內皮素激活[20]。此外，還有研究發現，同時敲除小鼠PLCD1基因和PLCD3基因可以造成小鼠滋養層缺陷而致妊娠中期胚胎死亡;PLCD1/PLCD3雙基因敲除小鼠胎盤迷路層結構異常，胎盤血管減少[21]。因此，PLCD1和PLCD3基因在胎盤的正常發育中起著重要作用，PLCD3基因表達異常可能會造成胎盤發育不良，引發妊娠期疾病。

一項關于歐洲人群的GWAS研究結果顯示，PLCD3基因rs12946454位點與高血壓有關[10]，但該研究僅局限于歐洲人群及原發性高血壓疾病，目前尚未有相關研究證實PLCD3基因rs12946454位點遺傳多態性是否與妊娠期女性尤其是我國漢族婦女血壓升高有關。本研究對842例子癇前期孕婦和1 013例正常妊娠婦女進行了檢測，結果顯示，與正常妊娠婦女相比較，子癇前期孕婦PLCD3基因rs12946454位點基因型分布及等位基因頻率差異無顯著性，表明PLCD3基因rs12946454位點多態性可能與子癇前期發病不相關。進一步將子癇前期組分為輕度及重度子癇前期、早發型及晚發型子癇前期進行研究，結果顯示，與正常對照組相比，輕度子癇前期及重度子癇前期PLCD3基因rs12946454位點基因型分布和等位基因頻率差異均無顯著性;早發型子癇前期及晚發型子癇前期基因型分布和等位基因頻率差異亦無統計學意義;輕度子癇前期和重度子癇前期相比、早發型子癇前期和晚發型子癇前期相比，PLCD3基因rs12946454位點基因型分布和等位基因頻率差異均無顯著性。提示PLCD3基因rs12946454位點遺傳多態性可能與山東漢族人群子癇前期發病不相關。

本次研究首次在山東漢族人群中檢測PLCD3基因rs12946454位點多態性與子癇前期發病的關系，結果未發現PLCD3基因rs12946454位點多態性與山東漢族人群子癇前期發病不相關，與歐洲人群的GWAS結果不一致[10]。其原因可能與種族、地區及研究人群差異等因素有關，也可能與妊娠期高血壓疾病自身特性有關系。還需要對不同地區、不同種族人群進行更大樣本的相關遺傳研究，以闡明子癇前期與PLCD3基因多態性之間的關系。此外，目前尚缺乏PLCD3基因在高血壓相關疾病尤其是子癇前期中作用的研究報道，因此，深入研究PLCD3基因與子癇前期的關系，有利于完善子癇前期的發病機制，為子癇前期的治療和篩查提供理論依據。

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（本文編輯 黃建鄉）