hr-HPV感染及CD163+巨噬細胞表達與宮頸組織惡性病變程度相關性分析

（遼寧省本溪市衛生健康發展服務中心，遼寧 本溪 117000）

宮頸癌是惡性腫瘤之一，其主要發病原因為hr-HPV感染導致宮頸組織逐漸惡化并形成淋巴結轉移[1]。宮頸組織惡化發生原因有多種，宮頸腫瘤微環境變化是反映宮頸組織惡化的一種標志，微環境中如浸潤大量炎性細胞，將導致腫瘤相關性炎癥，進而惡性發展成為癌癥的，而癌癥發生、進展和預后不良與腫瘤相關巨噬細胞有密不可分的關系[2-3]。巨噬細胞能夠從多個方面影響腫瘤組織的增殖、侵襲和轉移的能力，它具有多個分子標志物，包括CD163+、CD204+等[4-5]。本研究通過選取2012年1月至2015年1月在本中心治療的120例宮頸組織病變患者，收集患者組織臨床樣本，并檢測組織中CD163+巨噬細胞的表達水平，探討巨噬細胞與hr-HPV感染之間及宮頸組織惡化的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2015年1月在本中心治療的120例宮頸組織病變患者，收集患者組織臨床樣本，根據宮頸組織病變程度分為對照組（正常宮頸組織）20例，宮頸瘤變組50例，宮頸癌組50例，3組患者基本資料對比差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 3組患者基本資料對比

1.2 納入及排除標準 納入標準：確診為hr-HPV感染患者；無其他重大器官疾病患者；無精神疾病，能獨立完成調研患者；患者臨床資料齊全。排除標準：孕婦與急性盆腔感染患者；接受過放射治療與化療等非手術治療患者；宮頸腺癌患者。

1.3 方法 免疫組織化學法：采用福爾馬林將組織標本中固定，石蠟包埋，連續切片成5 μm厚。將切片脫蠟水化，加入3%過氧化氫-甲醇共同孵育30 min，以除去內源性過氧化物酶活性。加入檸檬酸鹽緩沖液，放置于微波爐中微波15 min以進行抗原修復。后加入10%山羊血清于37 ℃封閉容器中封閉1 h。以1∶200比例加入CD163+小鼠抗人單克隆抗體稀釋液一抗稀釋并置于4 ℃冰箱孵育過夜。取出切片加入二抗后置于37 ℃容器中孵育30 min。采用DAB顯色1 min，并用蘇木素復染。取出切片并采用酒精脫水后放入二甲苯中透明，最終將切片風干并置于中性樹脂封片固定。

hr-HPV病毒載量檢測：采HC-Ⅱ HPV檢測試劑盒對標本中hr-HPV病毒的DNA含量進行檢測，單位為RLU/CO，其中RLU表示相對光單位，CO表示陽性對照臨界值。陽性表示RLU/CO比值大于等于1，陰性表示RLU/CO比值小于1。

1.4 評價標準 采用低倍鏡（×100）對巨噬細胞的細胞膜上篩選，選擇呈棕黃色的細胞最密集區域進一步分析，巨噬細胞平均數量以高倍鏡（×400）下隨機選取個視野的巨噬細胞平均值為準，根據棕黃色的細胞所占比例判定表達量并進行評分，評分標準為0～3：以小于5%評為0分；5%～20%1分；20%～50%為2分；大于50%為3分，低水平表達分區為0～1分，高水平表達為2～3分。

1.5 統計學方法 使用SPSS20.0統計軟件進行數據分析，計量資料用（）來表示，行獨立樣本t檢驗，計數資料用百分比（%）表示，行χ2檢驗，P＜0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組患者的巨噬細胞計數、hr-HPV感染率及病毒載量對比 對比3組患者巨噬細胞計數可知，宮頸瘤變組、宮頸癌組中患者巨噬細胞計數、hr-HPV感染率及hr-HP病毒載量顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 3組患者的巨噬細胞計數、hr-HPV感染率及病毒載量對比

2.2 hr-HPV陽性及陰性感染的巨噬細胞表達量對比 對比hr-HPV感染患者中陽性患者及陰性患者表達計數，可知陽性患者巨噬細胞表達顯著高于陰性患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）

2.3 巨噬細胞數量與宮頸癌患者臨床資料相關性分析 分析50例患者巨噬細胞數量與臨床數據相關性可知，宮頸癌患者巨噬細胞數量與其FIGO分期和淋巴結轉移顯著相關，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 結論

宮頸癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，近年來其發病及病死率不斷提升，且發病年齡逐步提前并呈現地區增長趨勢，已成為威脅女性健康甚至導致死亡的主要疾病[6-8]。hr-HPV感染是宮頸癌發病的重要因素，其主要致病原因為巨噬細胞數量不斷增加轉移，進而導致宮頸組織惡性轉化，最終發展成為宮頸癌[9]。

病毒感染能夠促進機體組織惡化，其原因為病毒能夠導致炎性細胞介質募集到腫瘤微環境中參與腫瘤惡性病變過程[10-11]。多數研究表明，病毒感染能夠激活巨噬細胞，而本研究發現巨噬細胞在感染患者中能高表達，進一步分析可知宮頸惡性轉化與巨噬細胞密切相關，且隨著宮頸惡性病變進展其表達呈逐漸增高趨勢，表明巨噬細胞浸潤增多可能與宮頸惡性病變發展有關。其主要原因為病毒感染能夠從多方面影響腫瘤發展，感染產生的炎性因子能夠增強腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲的能力，且能與相關的成纖維細胞及因子相互作用，從而降低免疫系統對腫瘤的監視與清除等抑制作用，最終導致宮頸組織惡性病變，進而發展成為宮頸癌癥。多數研究表明巨噬細胞數量的增加與患者臨床病理參數有著一定的相關性。本研究通過對比宮頸癌患者巨噬細胞與臨床相關資料的關聯性可知，FIGO分期及宮頸癌淋巴結轉移與巨噬細胞數量變化密切相關，差異有統計學意義。其主要原因為患者腫瘤相關巨噬細胞局部浸潤而產生不良細胞因子，能夠加速基質降解酶分解進而促進腫瘤的侵襲轉移。而淋巴結轉移伴隨著腫瘤癌性淋巴管的形成，因此導致了宮頸組織的惡性轉化。宮頸癌分期進展是宮頸癌患者治療失敗、復發與死亡的主要原因，其分期越高表明腫瘤相關巨噬細胞表達越強，而腫瘤相關巨噬細胞能夠促進巨噬細胞的增加，進而引起宮頸組織惡性病變，最終形成宮頸癌癥。

綜上所述，巨噬細胞的表達與患者淋巴結轉移及FIGO分期密切相關，其高表達能夠促進宮頸組織hr-HPV感染，與宮頸組織惡性變的程度成正相關。