貴州不同品種豬精液品質檢測結果分析

陳大芳，李 平，唐明宗，申金容，張云淞，曾 金

（貴州省種畜禽種質測定中心，貴州 貴陽 550018）

在養豬生產過程中，公豬精液品質的優劣是人工授精技術的關鍵，影響到母豬的受胎率和產仔數，直接關系到豬場的經濟效益[1]。進行精液品質的檢測，可為精液稀釋、保存和利用提供依據，準確判定精液的品質優劣，也是檢驗公豬生殖器官機能、公豬飼養管理、采精操作技術等效果的衡量，對養豬生產具有重要意義。本試驗擬從影響受精力相關程度較大的指標如精子密度、稀釋后精子活力、每劑量直線前進運動精子數、精子畸形率等進行不同品種的豬精液品質檢測結果比較，擬為判定不同品種豬的精液質量提供一定數據參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

種公豬精液來源于貴州省境內的1個種公豬站及9個種豬生產企業，共采集10批次47頭精液樣品（原精液及常溫精液）做為試驗對象，各豬場的稀釋液均為購買不同品牌長效稀釋劑進行配制，品種為引進品種（大白、長白、杜洛克）及地方品種（柯樂豬）。分別采集大白豬15頭、長白豬15頭、杜洛克豬12頭、柯樂豬5頭等共4個品種精液進行檢測。

1.2 試驗時間及地點

2020年5—9月，貴州省種畜禽種質測定中心承接部檢種畜禽質量安全監督檢查工作任務，針對貴州境內省9個地州市部分種公豬站及種豬生產企業生產的種公豬精液進行抽檢，共抽檢了10批次，每次抽檢1個豬場，每個豬場抽檢3～5頭種公豬原精液及常溫精液樣品，裝入16～18 ℃恒溫保存箱，嚴格按照運輸要求，帶回貴州省種畜禽種質測定中心精液檢測室進行檢測。

1.3 檢測設備

精子質量分析系統（AndroVision Minitube/德國）、精子密度儀（SDM6-Minitube/德國）、正直顯微鏡（CX41-奧林巴斯/日本）、恒溫保存箱、恒溫預熱板、血球計數板、載玻片、蓋玻片、移液槍、比色杯等。

1.4 檢測方法

按照國家標準GB/T 25172—2010《豬常溫精液生產與保存技術規范》[2]和GB 23238—2009《種豬常溫精液》[3]中的方法進行檢測。

1.5 數據統計與分析

數據統計采用Excel表格處理，分析采用SPSS軟件，檢測數據以平均值±標準差表示。

2 檢測指標

2.1 精子密度

采用精子密度儀（米尼圖Minitube SDM6）直接檢測。1）每周使用前進入實用程序中先進行“暗度較正”，再用一個容量為4 mL的比色皿加入4 mL 0.9%氯化鈉溶液做“零度較正”，取出較正空白比色皿。2）另取空比色皿一個，用移液器加入3.5 mL 0.9%氯化鈉溶液，再加入70 μL的原精精液樣本，順勢沖吸槍頭幾次徹底排空槍頭中的精液。3）在觸摸屏上選擇測量模式設置儀器參數，輸入樣品的ID號、精液量、精液活力進行自動分析，按確認“模式”輸出結果并記錄。

2.2 精子活力

取兩個劑量的常溫精液輕輕搖動均勻，分別用移液器吸取精液約25 μL置于載玻片上并加蓋玻片，在37 ℃條件下，用顯微鏡（200～400倍）觀察精子活力。每個樣片觀察3個視野，并觀察不同液層內的精子運動狀態，進行全面評定。

計算公式如下：

式中：M為活力；n1為第一視野活力；n2為第二視野活力；n3為第三視野活力。

2.3 每劑量直線前進運動精子數

用移液槍吸取50 μL樣品，使用3.0%氯化鈉（NaCl）溶液0.95 mL與其混勻。將備好的血球計數板用蓋玻片將計數室蓋好，用移液槍吸取稀釋精液打入蓋玻片邊緣，使精液自行流入到計數室中，均勻充滿，不允許有氣泡或厚度過大，在400倍顯微鏡下觀察計數。

（1）每劑量中精子數=5個中方格精子數×100萬×劑量值。

（2）每劑量中直線前進運動的精子數計算：

式中：C為每劑量中前進運動精子數，單位為個；s為每劑量中精子數，單位為個；m為活力，單位%。

2.4 精子畸形率

采用伊紅或姬姆薩染色法。1）抹片：用移液器吸取1滴解凍后精液滴于載玻片一端，用另一張載玻片的一邊與樣品呈35°夾角，將精液樣品均勻地涂抹于載玻片上，然后自然風干約5 min，每個樣品制備2～3個抹片；2）固定：在風干的抹片上滴1.0～2.0 mL中性福爾馬林固定液，固定15 min后用清水緩緩沖去固定液，然后自然風干或吹干；3）染色：將固定好后的抹片反扣在帶有平槽的有機玻璃槽面上，將染液滴于槽和抹片之間，讓其充滿平槽并使抹片接觸染液，染色1.5 h后用清水緩緩沖去染液，晾干待檢；4）鏡檢：將制備好的抹片在顯微鏡（400～600倍）下觀察，每個抹片觀察200個以上的精子（分左、右兩個區），取兩片的平均值，兩片畸形率的差值不得大于6。

精子畸形率的計算：

式中：A為精子畸形率，單位%；A1為畸形精子數，單位為個；S為精子總數，單位為個。

3 結果與分析

3.1 精子密度比較分析

按照GB/T 25172—2010《豬常溫精液生產與保存技術規范》[1]要求，分別對大白、長白、杜洛克、柯樂豬種豬的原精液進行檢測，檢測頭份及結果見表1。由表1可知，精子密度順序為杜洛克＞長白＞大白＞柯樂豬。杜洛克較高，長白、大白差異不大，柯樂豬略低于其他3個品種。

表1 精子密度檢測結果

3.2 7 h精子活力、72 h精子活力比較分析

采樣時記錄好每頭豬采精時間，按G B 23238—2009《種豬常溫精液》[2]要求，將采集的大白、長白、杜洛克、柯樂豬原精液稀釋成常溫精液放置于16～18 ℃恒溫保存箱保存，分別于保存后7 h、72 h后進行活力檢測，各品種的豬精子活力有一定差異但差異不大。檢測頭份及結果見表2。由表2可知，1）7 h精子活力：順序為柯樂豬＞長白＞大白＞杜洛克；2）72 h精子活力：順序為柯樂豬＞長白＞大白＞杜洛克。結果表明保存72 h后的精子活力與7 h精子活力成正相關，降低幅度為長白降低18.3個百分點、大白降低18.8個百分點、柯樂豬降低18.9個百分點、杜洛克降低21.9個百分點，72 h精子平均活力≥60%，但此時各品種的標準差偏大，表明各品種精液品質因保存時間的增長活力差異明顯。

表2 7 h精子活力、72 h精子活力檢測結果

3.3 每劑量直線前進運動精子數比較分析

按GB 23238—2009《種豬常溫精液》[2]要求，分別對大白、長白、杜洛克、柯樂豬種豬的常溫精液進行檢測，檢測頭份及結果見表3。由表3可知，每劑量中直線前進運動精子數為杜洛克＞大白＞柯樂豬＞長白，本項指標的檢測結果沒有可比性，因此項指標的檢測與稀釋比例及精子活力有密切關系，密度大則直線前進運動精子數高。

表3 每劑量直線前進運動精子數檢測結果

3.4 精子畸形率比較分析

分別對大白、長白、杜洛克、柯樂豬種豬的常溫精液進行檢測，檢測頭份及結果見表4。由表4可知，精子畸形率為大白＞杜洛克＞長白＞柯樂豬，引進品種豬大白、長白、杜洛克精子畸形率無明顯差異，地方品種柯樂豬的畸形率明顯低于引進品種大白、長白、杜洛克豬。

表4 精子畸形率檢測結果

4 討論

本試驗采用在貴州省境內飼養的大白、長白、杜洛克、柯樂豬4個品種豬，分別對精子密度、精子活力、每劑量直線前進運動精子數、精子畸形率等指標進行檢測結果對比。結果表明，1）精子密度：引進品種大白、長白、杜洛克豬差異不大，地方品種柯樂豬略低于大白、長白、杜洛克引進品種，這可能與引進品種來源于養殖業發達國家，與他們重視育種工作長期選育有關。2）精子活力：大白、長白、杜洛克、柯樂豬4個品種的差異不大，保存3 d后能達到輸配要求活力≥60%。地方品種柯樂豬精子活力優于引進品種大白、長白、杜洛克。不同品種公豬的精子活力會因品種、年齡、季節、營養水平、飼養管理等因素有所差異，并且這種差異是客觀存在的[4]。3）每劑量直線前進運動精子數：此項指標的檢測結果與原精液的稀釋比例及精子活力有密切關系，本項檢測結果沒有可比性，稀釋比例越小則密度大，直線前進運動的精子數則高。4）精子畸形率：大白＞杜洛克＞長白＞柯樂豬，引進品種豬大白、長白、杜洛克精子畸形率無明顯差異，地方品種柯樂豬的畸形率明顯低于大白、長白、杜洛克引進品種。本次研究中地方品種的畸形率明顯低于引進品種，建議發揮地方品種柯樂豬畸形率低的優勢，加強本地品種豬優勢性狀的選育工作，培育自有品牌。

影響精液品質的因素很多，如種公豬的營養狀況、身體是否有疾病、是否注射疫苗等這些因素都會影響到原精液的品質；而采精技術、精液處理、稀釋液、保存溫度、實驗室環境及技術人員操作水平等將會影響到所制作的常溫精液的質量[5]。不論是在國內還是在國外，不同品種豬的精液品質在某些方面存在著客觀上的差異是必然的，因為各地動物的營養、生理、環境等方面不可能完全相同，對動物的生精機能產生的影響就自然不會完全一致[6]。本試驗以貴州省境內飼養的引進品種和地方品種進行研究，由于樣本來源于不同的豬場，各豬場的飼養管理水平不同，同時因樣本量不大，此研究為專業技術人員在檢測精液品質質量時提供參考。