酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)與光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝病毒的臨床對(duì)比研究

孫兵，何麗娜

中國(guó)人民解放軍63680 部隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)病理科，江蘇江陰 214431

乙肝病毒全稱(chēng)為乙型肝炎病毒，是一種DNA 病毒，為引起乙型肝炎的病原體[1]，據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示[2]，2018 年我國(guó)乙肝表面抗原陽(yáng)性率高達(dá)6.10%，目前已成為了全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。隨著乙肝病毒的蔓延個(gè)復(fù)制，患者急性、慢性肝炎會(huì)逐漸發(fā)展為肝組織硬化、肝癌、肝功能衰竭等，給患者的身體健康以及生命安全造成了嚴(yán)重威脅[3]。 目前臨床對(duì)乙肝病毒的主要預(yù)防手段為病毒感染監(jiān)測(cè)，酶聯(lián)免疫吸附法是常用的檢測(cè)方法，具有快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，但卻只能反映乙肝病毒定性結(jié)果[4]。 光激化學(xué)發(fā)光法是一種新型的檢測(cè)方法，具有多種優(yōu)勢(shì)[5]，該研究就選取該院2018 年12月—2019 年12 月收治的100 例乙肝病毒攜帶者，分組探討兩種檢測(cè)法檢測(cè)檢測(cè)乙肝病毒的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的100 例乙肝病毒攜帶者，均經(jīng)臨床確診，根據(jù)不同檢測(cè)分為兩組，對(duì)照組（n=50）接受酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，其中男28 例、女22 例；年齡17～68 歲，平均（44.25±3.57）歲。觀察組（n=50）接受光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，其中男26 例、女24 例；年齡17～71 歲，平均（44.27±3.52）歲。 兩組乙肝病毒攜帶者一般資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。以上病例均經(jīng)患者知情同意，醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合乙肝診斷標(biāo)準(zhǔn)；②同意參與該研究；③年齡16～72 歲。 排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有精神疾病者；②患有嚴(yán)重心腦血管疾病者；③不配合該研究者。

1.2 方法

兩組乙肝病毒攜帶者均按照常規(guī)方式獲取標(biāo)本，檢測(cè)患者乙肝病毒標(biāo)記物（乙肝核心抗體、乙肝e 抗原、乙肝e 抗體、乙肝表面抗體、乙肝表面抗原），對(duì)照組接受酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，儀器和試劑：全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀（型號(hào)：ST-360，吸光度：0～4.000 Abs）；全自動(dòng)洗板機(jī)（型號(hào)：ST-96W，洗液通道：≥3 個(gè)）；乙肝兩對(duì)半抗體酶聯(lián)免疫試劑 （貨號(hào)：S10910148， 規(guī)格：96 T）；手動(dòng)加樣，嚴(yán)格根據(jù)儀器、試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，結(jié)果陽(yáng)性、陰性經(jīng)酶標(biāo)分析儀結(jié)果判斷。 觀察組接受光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，儀器和試劑：自動(dòng)光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀（規(guī)格：Lica500）及配套乙肝兩對(duì)半抗體酶聯(lián)免疫試劑，全自動(dòng)加樣，嚴(yán)格根據(jù)儀器、試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，若出現(xiàn)單獨(dú)一項(xiàng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性或雙陽(yáng)性，則進(jìn)行雙孔復(fù)查，結(jié)果陽(yáng)性則為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)比兩種檢測(cè)方法的乙肝病毒標(biāo)記物陽(yáng)性概率和檢測(cè)靈敏度。 （1）乙肝病毒標(biāo)記物陽(yáng)性概率判定標(biāo)準(zhǔn)：①酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)：以臨界OD 值與OD 值得比值為標(biāo)準(zhǔn)， 若乙肝e 抗體與乙肝核心抗體的比值＜1.00，則表示陽(yáng)性，反之為陰性；若乙肝表面抗體、乙肝表面抗原和乙肝e 抗原的比值＞1.00， 則表示陽(yáng)性，反之為陰性[6]。 ②光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)：采用定量法判定，若乙肝表面抗體＞10.00 IU/mL，乙肝表面抗原＞0.05 IU/mL，則表示陽(yáng)性，反之為陰性；以相對(duì)光強(qiáng)度（RLU）值和臨界RLU 值比值為標(biāo)準(zhǔn)，若乙肝e抗體比值＜1.00，則表示陽(yáng)性，反之為陰性；若乙肝核心抗體、乙肝e 抗原比值＞1.00，則表示陽(yáng)性，反之為陰性[7]。 （2）檢測(cè)靈敏度：以2.00 IU/mL 乙肝表面抗原參比血清，收集兩倍陰性血清稀釋后分別用光激化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，查看兩種檢測(cè)方法的最低濃度，濃度越低表示靈敏度越高[8]。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法的乙肝病毒標(biāo)記物陽(yáng)性概率對(duì)比

觀察組乙肝核心抗體、乙肝e 抗原、乙肝e 抗體、乙肝表面抗體、乙肝表面抗原陽(yáng)性率分別為70.00%、42.00%、44.00%、24.00%、64.00%， 對(duì)照組分別為66.00%、42.00%、30.00%、12.00%、50.00%。 兩組乙肝病毒攜帶者的乙肝病毒標(biāo)記物中乙肝核心抗體、乙肝e 抗原陽(yáng)性概率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；觀察組乙肝病毒標(biāo)記物中乙肝e 抗體、乙肝表面抗體、乙肝表面抗原陽(yáng)性概率明顯高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表1。

表1 兩種檢測(cè)方法的乙肝病毒標(biāo)記物陽(yáng)性概率對(duì)比[n（%）]

2.2 兩種檢測(cè)方法的靈敏度對(duì)比

光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)最低濃度為0.05 IU/mL；酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)最低濃度為0.14 IU/mL；0.05 IU/mL＜0.14 IU/mL，說(shuō)明光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)靈敏度更高。

3 討論

研究顯示[9]，我國(guó)乙型肝炎病毒攜帶率達(dá)15%，且感染率逐年上升，給人們的身體健康乃至社會(huì)的安定均造成了嚴(yán)重的影響，因此及早預(yù)防、判斷、治療乙肝具有重要意義。檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)記物是我國(guó)早期預(yù)防和治療乙肝患者的重要判斷依據(jù)，酶聯(lián)免疫吸附法是臨床應(yīng)用十分廣泛的檢測(cè)方式， 具有操作簡(jiǎn)便、快捷且結(jié)果準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)[10]，可通過(guò)將已知抗原或抗體附于固相載體表面，觀察抗原抗體的反應(yīng)狀態(tài)，但該檢測(cè)方式僅能對(duì)乙肝病毒進(jìn)行定性反映，不能動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其變化，所以檢測(cè)靈敏度較低[11]。

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，新一代標(biāo)記免疫測(cè)定方法-光激化學(xué)發(fā)光法被應(yīng)用于臨床， 雖然其起步較晚，但經(jīng)過(guò)十幾年的發(fā)展，目前已被廣泛運(yùn)用于臨床，具有易操作、高精確度、高靈敏度、重復(fù)檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，其以懸浮性光激作為載體，相比傳統(tǒng)的酶標(biāo)板，樣品反應(yīng)表面積更大，再加上磁場(chǎng)作用能更加快速和靈活的檢測(cè)乙肝病毒的動(dòng)態(tài)變化，有效彌補(bǔ)了酶聯(lián)免疫吸附法的缺點(diǎn)[12]。

觀察組乙肝核心抗體、乙肝e 抗原、乙肝e 抗體、乙肝表面抗體、乙肝表面抗原陽(yáng)性率分別為70.00%、42.00%、44.00%、24.00%、64.00%， 對(duì) 照 組 分別 為66.00%、42.00%、30.00%、12.00%、50.00%。 兩組乙肝病毒攜帶者的乙肝病毒標(biāo)記物中乙肝核心抗體、乙肝e 抗原陽(yáng)性概率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；觀察組乙肝病毒標(biāo)記物中乙肝e 抗體、 乙肝表面抗體、乙肝表面抗原陽(yáng)性概率明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。觀察組乙肝病毒標(biāo)記物中乙肝e 抗體、 乙肝表面抗體、乙肝表面抗原陽(yáng)性概率明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)準(zhǔn)確度更高。 學(xué)者劉靜等[13]探討了乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)采用化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法的效果比照， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光法HBeAb、HBeAg、HBcAb、HBsAb、HBsAg 檢 出 率 分為45.16%、29.57%、48.39%、54.84%、25.81%, 明 顯 高 于 酶 聯(lián) 免 疫 法 的32.26%、20.43%、35.48%、35.48%、17.20%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與該研究結(jié)果一致。

結(jié)果顯示， 光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)最低濃度為0.05IU/mL； 酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)最低濃度為0.14 IU/mL；0.05 IU/mL＜0.14 IU/mL，光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)最低濃度低于酶聯(lián)免疫吸附法，說(shuō)明前者檢測(cè)靈敏度更高。 學(xué)者張怡莎[14]探討了化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法在乙肝兩對(duì)半檢測(cè)中的應(yīng)用效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種檢驗(yàn)方案的多數(shù)血清學(xué)標(biāo)志物模式檢驗(yàn)結(jié)果基本一致,但化學(xué)發(fā)光法在抗HbsAg、抗HbeAg 檢驗(yàn)陽(yáng)性率上為100.0%,要顯著高于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的71.4%，與該研究結(jié)果一致。

綜上所述，兩種檢測(cè)方法均具有一定價(jià)值，但光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)準(zhǔn)確度和靈敏度更高，有利于動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)乙型肝炎。