乳腺間質CD34和平滑肌肌動蛋白免疫組化檢測在乳腺癌診斷中的應用

劉 麗 白春俠 曹美榮

（營口市中心醫院，遼寧 營口 115000）

乳腺疾病分為乳腺炎癥、乳腺病變、乳腺癌等，需要將惡性腫瘤、良性腫瘤、乳腺病變等進行區分，但是在診斷過程中由于患者病情復雜，導致原位癌、浸潤性癌、腫瘤間質重塑等鑒別工作難以開展[1]。蛋白免疫組化診斷是臨床常見的診斷方法，通過分析病灶組織中蛋白免疫指標陽性情況，分析其病灶性質，有利于后續治療。CD34、平滑肌肌動蛋白是臨床常見的免疫組化指標，研究顯示，在乳腺癌疾病呈顯著表達，具有較高的診斷價值[2]。本文主要針對乳腺間質CD34和平滑肌肌動蛋白免疫組化檢測乳腺癌價值進行分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2018年5月至2019年5月，對我院收治的150例乳腺疾病患者進行回顧性對比分析，排除精神異常、患有重大疾病、診斷前服用或采取其他輔助治療的患者。根據患者病變情況將其分為觀察組與對比組。觀察組是乳腺癌患者，共90例；對照組是乳腺良性病變患者，共60例。其中，觀察組年齡34～59歲，平均年齡為（41.25±4.21）歲；病程1～9年，平均病程為（4.34±1.23）年；絕經患者39例，未絕經患者51例；病理類型：51例浸潤性導管癌，25例浸潤性小葉癌，13例單純導管癌，其他1例。對照組年齡35～58歲，平均年齡為（40.85±4.35）歲；病程1～9年，平均病程為（4.39±1.11）年；絕經患者21例，未絕經患者39例；病理類型：24例硬化性乳腺病變、36例纖維腺瘤。在一般資料比較方面，兩組差異不大（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 試劑與設備 采用的試劑為丹科醫療器械技術服務（上海）有限公司生產的乳腺間質CD34測定試劑盒和平滑肌肌動蛋白試劑盒。主要采用的設備為酶標儀和血液分析儀，酶標儀的型號為美國Awareness Stat Fax-210酶標儀，血液分析儀的生產廠家和型號為Sysmex公司SF-3000自動血液分析儀。

1.2.2 方法 本文150例乳腺疾病患者采用乳腺間質CD34和平滑肌肌動蛋白免疫組化進行檢測。①制作樣本：觀察患者病變組織，測量患者病變組織、腫瘤、癌癥物病變大小、周圍病變情況，描述病變組織、腫物性狀，采用細胞活檢方式將病變組織、腫物多切面切開，若病變組織、腫物距切緣較遠，取具有代表性的切緣進行細胞活檢，采用濃度為4%中性甲醛對組織進行固定，制片方法為常規石蠟制片法，對樣本進行HE染色，并將樣本保存備用。②免疫組化檢測：對所有樣本進行免疫組化染色，采用過氧化酶SP檢測法，藥劑為過氧化酶采用鏈霉素抗生物素蛋白，同時將樣本進行脫蠟、水化處理，采用濃度為10%過氧化氫阻斷過氧化酶活性，在無菌環境下嚴格按照試劑盒的適用說明進行操作，乳腺間質CD34按1∶80比例配比，平滑肌肌動蛋白按1∶50配比，每張切片上滴加配比后的乳腺間質CD34和平滑肌肌動蛋白，室溫下培育2 h。滴加酶生物素，觀察DAB顯示情況，并采用蘇木青對樣本染色，最后封片對比染色情況。

1.3 評定標準 對乳腺間質CD34和平滑肌肌動蛋白免疫組化檢測結果進行判定，對比兩組患者乳腺間質CD34和平滑肌肌動蛋白的染色結果。將不著色細胞定義為陰性，用（-）表示；陽性細胞位于乳腺間質內部，呈黃棕色，形狀為長梭形。陽性細胞數小于25%為弱陽性，用（+）表示，陽性細胞25%～50%為陽性，用（++）表示，陽性細胞大于50%為強陽性，用（+++）表示。選取乳腺間質呈現清晰黃棕色顆粒部分，采用40倍低倍顯微鏡觀察乳腺間質中陽性細胞最密集區域，換用100以上高倍鏡對該區域進行放大，由兩名以上醫師分別進行計數，計算陽性細胞占總癌癥細胞百分數，并觀察細胞染色情況與形態。其中，差率10%以內可采用，反之重新檢測。陽性率=（強陽性例數+陽性例數）/總例數×100.00%。

1.4 統計學方法 本研究有關數據采用SPSS22.0統計學軟件進行處理，計數資料用[n（%）]表示，組間結果比較行χ2檢測，應用logistic回歸分析CD34、平滑肌肌動蛋白與患者疾病發展相關性分析。P＜0.05表明差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者CD34、平滑肌肌動蛋白陽性診出率比較 觀察組患者CD34、平滑肌肌動蛋白陽性診出率均高于對照組，數據差異顯著（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者CD34、平滑肌肌動蛋白陽性診出率比較[n（%）]

2.2 CD34與患者疾病發展相關性分析 logistic回歸分析顯示，CD34與患者TNM分期、淋巴結轉移、超聲BI-RADS分級呈正相關關系（P＜0.05）。見表2。

表2 CD34與患者疾病發展相關性分析

2.3 平滑肌肌動蛋白與患者疾病發展相關性分析 logistic回歸分析顯示，平滑肌肌動蛋白與患者TNM分期、淋巴結轉移、超聲BI-RADS分級呈正相關關系（P＜0.05）。見表3。

表3 平滑肌肌動蛋白與患者疾病發展相關性分析

3 討論

乳腺疾病是女性常見疾病，乳腺癌是女性最常見的浸潤性癌癥，致死率僅次于肺癌。若治療不及時，乳腺癌細胞隨血液、淋巴液擴散，轉移到患者全身，嚴重危及女性患者生命安全[3]。

CD34是一種高度糖基化的穿膜糖蛋白，具有選擇性，表達在人類及其他哺乳動物造血干細胞、內皮細胞、乳腺未分化間葉細胞表面，CD34分子表達隨著細胞成熟逐漸削弱[4]。根據孔丹青等[5]研究結果表明，CD34分子在介導細胞間黏附作用中具有重要作用，能有效參與人體、動物造血干細胞運輸，參與炎性反應。肌動蛋白屬于球狀多功能蛋白質，存在于真核細胞中。平滑肌動蛋白中的細絲是組成肌細胞收縮裝置的一部分，以游離單體形式存在，具有移動和收縮功能，屬于細胞功能中必不可少的一部分[6]。根據張亮等[7]研究結果表明，腫瘤間質在腫瘤、癌癥疾病演變過程中起著重要作用，腫瘤、癌癥實質細胞與未分化間葉細胞相互作用，促進良性腫瘤疾病向惡性腫瘤、癌癥發展。因此，乳腺癌間質發生改變可能與腫瘤間質的演變有關，腫瘤間質在演變過程中CD34失去表達，轉化為平滑肌動蛋白出現表達[8-9]。裴蓓等[10]認為該過程和表達體現了患有乳腺癌患者的原位癌細胞向浸潤性癌轉移過程,間質纖維細胞獲得平滑肌肌動蛋白，失去乳腺間質CD34纖維細胞，可能是癌細胞向間質細胞浸潤的標志或者先兆，或者該癌癥本身就是一種早期的浸潤癌，只是該細胞陽性表現為弱陽性或者假陽性，常規染色技術不能對其進行分辨。本次研究結果顯示，觀察組患者CD34指標、平滑肌肌動蛋白指標陽性診出率明顯高于對照組，且CD34、平滑肌肌動蛋白陽性表達與患者TNM分期、淋巴結轉移、超聲BI-RADS分級呈正相關關系（P＜0.05），說明分析乳腺間質CD34、平滑肌肌動蛋白陽性表達情況，能夠輔助診斷患者乳腺癌疾病，為主治醫師提供科學的診斷依據。

綜上所述，免疫組化法檢測乳腺癌組織中乳腺間質CD34、平滑肌肌動蛋白表達情況具有重要意義，能夠有效提高乳腺癌患者和乳腺良性病變患者診斷效率和陽性檢出率。因此，該檢測法在臨床醫學中具有推廣意義。