FMS樣酪氨酸激酶3配體在急性髓系白血病患者血清中的表達及其臨床意義

宋輝，于藝冰，郭媛媛

(秦皇島市第一醫院 血液內科，河北 秦皇島 066000)

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是成年人中最常見的血液系統惡性腫瘤，預后較差，患者5年生存率較低，耐藥和復發是患者死亡的主要原因[1]。雖然國內外關于AML的研究已有很多，但是其發病機制仍尚未明確。早期對AML預后進行評估是臨床和基礎研究的重點。FMS樣酪氨酸激酶3(Fms- like tyrosine kinase 3，Flt3)也被稱為胎肝激酶2，具有促進造血干細胞增殖的作用。Flt3基因異常表達(突變、缺失或者過表達)均可能出現在AML中。既往研究[2- 3]顯示，Flt3內部串聯重復突變預示AML患者預后不良。

FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3 ligand，Flt3L)對維持機體造血有重要作用[4]。Flt3L是一種造血細胞生長因子，可以促進造血干細胞和造血祖細胞的增生、分化及動員，并且能促進淋巴細胞的增生[5- 6]。當造血微環境受損時，Flt3L表達水平明顯降低[7]。外周血Flt3L在范科尼貧血、再生障礙性貧血和雜合子GATA2突變引起的疾病中表達水平異常[7]。AML患者外周血Flt3L水平的變化及其意義既往少有報道。與健康人比較，AML患者入院時外周血Flt3L水平明顯較低；AML誘導治療后的1～15 d，患者外周血中Flt3L表達水平逐漸升高，最后逐漸下降；Flt3L對AML的早期診斷有一定價值[8]。但是該研究未分析Flt3L與AML病情發展和預后的關系。本研究旨在分析血清Flt3L表達水平與AML患者疾病進展和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：(1)診斷及疾病分期均符合2017年美國國家綜合癌癥網絡制定的AML診治指南[9]；(2)年齡≥18歲；(3)臨床資料完整。排除標準：(1)合并其他血液系統疾??；(2)合并腫瘤；(3)肝腎等重要臟器功能不全；(4)失訪。選取2017年10月至2019年1月本院收治的符合上述條件的200例AML患者為研究對象。其中男104例，女96例；年齡19～60歲，平均(47.12±10.09)歲；FAB分型為M0 26例，M1 28例，M2 39例，M3 34例，M4 24例，M5 49例。 將200例患者分為初治組(n=124)、緩解組(n=39)和復發組(n=37)。3組基本資料差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。所有患者的治療均參考2017年美國國家綜合癌癥網絡制定的AML診治指南[9]。本研究經過本院倫理委員會批準。

表1 3組患者一般資料比較

1.2 血清Flt3L檢測方法

入組時采集所有AML患者晨起空腹肘靜脈血5 ml，置于EDTA抗凝管中以2 500 r·min-1離心15 min，收集上層血清。用酶聯免疫吸附試驗檢測血清中Flt3L濃度，試劑盒購于北京百奧萊博科技有限公司，貨號：ZN2182。檢測時嚴格按照試劑盒說明書操作。檢測所用Spectra Max190酶標儀為美國MD公司生產，檢測時波長設置為450 nm。

1.3 預后評價

出院后以門診或電話方式對124例初治AML患者進行隨訪，每月隨訪1次，持續隨訪1年。記錄AML患者的死亡情況。

1.4 統計學處理

采用SPSS 19.0統計軟件進行統計學分析。初治組、緩解組和復發組3組資料的比較用單因素方差分析(兩兩比較用LSD-t檢驗)或卡方檢驗；存活組和死亡組資料的比較用獨立樣本t檢驗；不同FAB分型患者Flt3L質量濃度比較用單因素方差分析；AML患者預后的影響因素用Cox多因素分析；采用受試者工作特征(ROC)曲線分析Flt3L預測AML患者預后的價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 3組血清Flt3L表達水平比較

3組血清Flt3L表達水平的差異有統計學意義(F=16.872，P<0.001)。初治組血清Flt3L質量濃度為(83.09±12.09)pg·ml-1，復發組為(91.76±20.23)pg·ml-1，均低于緩解組的(133.08±30.24)pg·ml-1(均P<0.001)，初治組與復發組血清Flt3L質量濃度的差異有統計學意義(P<0.001)。

2.2 生存組和死亡組血清Flt3L表達水平比較

存活組血清Flt3L質量濃度為(88.07±11.82)pg·ml-1，高于死亡組的(78.07±10.09)pg·ml-1，但差異無統計學意義(t=1.372，P>0.05)。

2.3 血清Flt3L與AML患者臨床特征的關系

血清Flt3L與性別、年齡、基礎疾病及FAB分型無關(P>0.05)，見表2。

2.4 影響AML患者死亡的多因素分析

以隨訪1年內AML患者是否存活作為應變量，以年齡、性別、FAB分型、糖尿病、高血壓、慢性腎臟病和血清Flt3L為自變量，建立Cox回歸模型進行多因素分析，結果顯示，血清Flt3L是影響AML患者死亡的獨立因素(P<0.05)，見表3。

2.5 血清Flt3L預測AML患者預后的價值

血清Flt3L預測AML患者1年內死亡的ROC曲線下面積(AUC)為0.823(P=0.031)。當血清Flt3L截斷值為75.08 pg·ml-1時，約登指數最大(0.625)，此時血清Flt3L預測AML患者死亡預后的價值最高，靈敏度為84.15%，特異度為79.83%。

3 討 論

AML的發病機制目前尚未完全明確，可能與電離輻射、化學物質、細胞毒物、病毒感染和遺傳等有關[10]。臨床上的常規化療方案對AML的治療效果不甚理想，核型異常、基因突變和某些特定基因的異常表達是影響化療效果及預后的重要因素[11]。尋找潛在的AML生物學標志物對疾病的早期診治及預后判斷有重要意義。血清學檢測具有方便、快捷、穩定性高等特點。血清學AML標志物是近年來研究的熱點。

AML患者中Flt3基因突變較為常見，Flt3基因突變與AML的預后有關。提取骨髓中DNA檢測Flt3基因突變對疾病預后的早期評估有一定價值[12- 14]。Flt3選擇性抑制劑如CEP- 701、CT53518、AC220和PKC412對AML有一定治療作用[15- 16]。Flt3L是Flt3的配體，在機體造血中發揮重要作用，被認為是一種造血細胞因子。正常情況下，Flt3L主要由骨髓基質干細胞分泌，在祖細胞、干細胞、樹突細胞和NK細胞增殖的過程中發揮一定作用[17]。Flt3L在血液疾病、風濕性疾病、免疫性疾病、缺血再灌注損傷和肺部疾病中的作用日益受到重視[6,18- 20]?，F已證實，Flt3L可以發揮造血、抗腫瘤和免疫佐劑等作用[18- 19,21]。

表2 124例初治AML患者Flt3L質量濃度與臨床特征的關系

以往報道[22]顯示，與健康人比較，AML患者血清Flt3L水平明顯降低。外周血Flt3L有助于評價化療后AML的病情緩解，在化療第1個和第2個療程后Flt3L水平逐漸升高[8]。本研究也顯示，初治組和復發組血清Flt3L質量濃度均低于緩解組，提示Flt3L可能有助于AML的病情評估。本研究采用酶聯免疫吸附實驗檢測血清Flt3L水平，操作簡便，成本較低，因此可能適合于AML患者的動態監測。Peterlin等[8]檢測了化療誘導前后血漿Flt3L水平，發現誘導后Flt3L水平逐漸升高患者的總體生存率和無復發生存率明顯較高。本研究對124例初治AML患者進行為期1年隨訪，存活組血清Flt3L質量濃度高于死亡組，但差異無統計學意義，考慮這與死亡組樣本量小有關。以隨訪1年內AML患者是否存活作為應變量，年齡、性別、FAB分型、糖尿病、高血壓、慢性腎臟病和血清Flt3L為自變量，建立Cox回歸模型進行多因素分析結果顯示，血清Flt3L是影響AML患者死亡的獨立因素。另外，血清Flt3L預測AML患者1年內死亡的AUC為0.823，靈敏度為84.15%，特異度為79.83%。

表3 影響AML患者死亡的Cox多因素分析

綜上所述，血清Flt3L對AML患者病情及預后早期評價有一定價值。未來需要開展細胞或動物學研究，深入探討Flt3L在AML中的生物學機制。此外，Flt3基因突變與AML的臨床特征及預后密切相關[23- 24]，Flt3基因突變后Flt3L表達水平有何變化，有何臨床意義，需要進一步分析。