免疫表型分析及分子遺傳學在急性APL診斷中的應用價值

王萌

(駐馬店市中心醫院 血液內科，河南 駐馬店 463000)

急性早幼粒細胞白血病(APL)為急性髓細胞白血病的特殊類型，是造血系統惡性疾病。流行病學數據顯示急性APL 發病率占髓細胞白血病的10%，多發于中青年群體，該病進展迅速且早期死亡率高，所引發的嚴重出血及彌散性血管內凝血是導致患者死亡率的主要原因[1]。加強對該病的快速診斷，是降低早期死亡率及改善患者預后的關鍵。同其他類型的髓細胞白血病相比，急性APL 具有獨特的免疫表型特點，借助于流式細胞術為基礎的免疫表型分析技術可準確反映急性APL 細胞形態學特點，但并不能進行急性APL 的準確分型，多需借助分子生物學及遺傳學結果進一步明確診斷[2]。本文就此探討免疫表型分析及分子遺傳學在急性APL 診斷中的應用價值，總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取駐馬店市中心醫院2015年7月至2019年10月收治的急性APL 患者61 例，依照細胞形態學分型劃分為M3a 型( 粗顆粒性)31 例，男17 例，女14 例，年齡19 ～42 歲，平均年齡(34.28±2.51)歲；M3b 型(細顆粒型)30 例，男16 例，女14 例，年齡20 ～43 歲，平均年齡(34.35±2.54) 歲；兩中亞型的急性APL 患者性別、年齡等一般資料比較無顯著差異(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準通過。

納入標準：所有患者均符合《血液病診斷及療效標準》中的相關診斷標準；經免疫表型分析及分子遺傳學診斷為急性APL；患者及家屬均知情并同意加入本次研究。

排除標準：出診時伴有顱內出血或昏迷、抽出、顱神經癱患者；合并其它惡性腫瘤疾病者；長QT 綜合征病史者。

1.2 方法

1.2.1 免疫表型分析

無菌抽取新鮮骨髓，肝素抗凝處理，所用儀器為美國Coulter 公司生產的Epics XL 型流式細胞分析儀，免疫分析試劑盒購置于Immunotech 公司，進行CD45、CD33、CD9、CD13、CD117、CD11、CD15 單克隆抗體檢測，細胞膜群表面抗原≥20%、胞內抗原＞10%則判定為陽性。

1.2.2 分子遺傳學檢測

取肝素抗凝骨髓加入PRMI1640 培養基培養24 h后，加入20% 小牛血清，收獲前加入秋水酰胺最終濃度0.04 μg/mL 終止分裂。收獲細胞后存儲于-20℃低溫保存，于37℃、50% 飽和濕度下滴片，借助熒光原位雜交技術分析測定。

1.3 觀察指標

統計61 例不同亞型的急性APL 患者Hb、RBC、BPC、WBC 血常規檢查結果；記錄61 例患者CD45、CD33、CD9、CD13、CD117、CD11、CD15 單克隆抗體陽性檢測結果及染色體核型異常檢測結果。

1.4 統計學處理

采用SPSS 23.0 處理，±s表示變量數據，t檢驗；%表示無序分類數據，χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩種亞型的急性APL 患者血常規檢查結果比較

61 例急性APL 患者依照細胞形態學分型劃分為M3a型( 粗顆粒性)31 例，M3b 型( 細顆粒型)30 例，兩種亞型患者Hb、RBC、BPC、WBC 檢查結果對比，差異顯著(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組亞型的急性APL患者血常規檢查結果比較(s x± )

2.2 61 例急性APL 患者免疫表型表達情況

61 例急性APL 患者免疫分型表達中，以CD45 抗原陽性檢出率最高，達91.80%(56/61)，其次分別為CD33、CD9、CD13、CD117、CD11、CD15， 其 中CD117、CD11、CD15，抗原陽性檢出率均不足50%。見表2。

表2 61例急性APL患者免疫表型表達情況

2.3 61 例患者分子遺傳學診斷結果

對61 例患者均進行FISH 檢測，結果顯示54 例急性APL 患者特征性染色體核型異常，核型完全正常者7例，異常檢出率88.52%(54/61)。54 例異常核型中，41例表現為單純型t(15；17)(q22；q21)100% 易位，13例表現復雜型染色體核型異常。見表3。

表3 61例患者分子遺傳學診斷結果

3 討 論

急性APL 的發生同造血干細胞異常增殖有關，白細胞系造血干細胞突變后導致增殖及分化失控，異常原始細胞及幼稚細胞于造血組織中大量積累并釋放，浸潤相關組織及器官后導致造血功能抑制[3]。急性APL 是髓細胞白血病的特殊亞型，特征表現以骨髓中多顆粒早幼粒細胞為主，亦是兇險性最高的白血病亞型。患者癥狀表現以出血、發熱、關節疼痛及感染為主，且多數患者伴有肝脾器官浸潤[4]。

臨床研究表明免疫分型同急性APL 患者療效及預后存在一定關聯性，基于此可借助免疫表型分析進行急性APL 的快速診斷[5]。借助于流式細胞測定法開展急性APL 診斷具有操作簡單、所需標本數量少的優點，可快速獲取檢測結果，客觀提示髓細胞白血病的起源及分化發育情況，且對抗原表達紊亂情況的檢測，對急性APL患者的療效及預后判定亦具有同樣價值[6]。

分子遺傳學是對初診急性APL 患者進一步明確診斷的重要方法，借助于染色體核型檢測可對傳統核型分析進行重要補充[7]。基于對染色體核型異常情況的檢測，雖可對初診患者進一步明確診斷提供分子遺傳學診斷依據參考，特異性的染色體t(15；17)(q22；q21) 易位，是目前臨床用于急性APL 細胞遺傳學診斷的標志，但受到細胞培養、染色體制備等多因素影響，僅約70%～90%的APL 患者可檢查出t(15；17)(q22；q21) 易位[8]。鑒于其可能發生的染色體移位斷裂點變異情況，可能導致檢測結果出現假陽性，故本次在分子遺傳學檢測中借助FISH 檢測提升檢測結果準確性。本次對61 例急性APL患者的分子遺傳學檢測結果顯示，54 例(88.52%)患者表現為特征性染色體核型異常，41 例為t(15；17)(q22；q21)單純型易位，其余患者為復雜型染色體核型異常。

綜上所述，免疫表型分析、分子遺傳學檢測在急性APL 診斷中均具重要價值，免疫表型分析可作為急性APL患者的快速診斷方法，條件允許下進行分子遺傳學檢測并借助染色體核型分析結果可進一步明確診斷結果，提升急性APL 患者早期診斷準確率，便于指導開展臨床治療工作。