雙特異性磷酸酶14在胃癌中的表達情況及其臨床意義

程修強 吳 景 何 杰

我國胃癌的年發病率為29.31/10萬，僅次于肺癌[1-2]。雙特異性磷酸酶（Dual Specificity Phosphatase 14, DUSP14）是一組與人類疾病相關的異質性酶，屬于I類基于半胱氨酸的蛋白酪氨酸磷酸酶 （PTP）基因超家族[3]。有研究表明DUSP家族廣泛參與肺癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌等多種腫瘤的發生、發展、耐藥等生物學過程[4-6]。本項研究通過檢測DUSP14在胃癌中的表達模式，結合胃癌患者的臨床病理參數和預后信息，揭示了DUSP14在胃癌進展和預后中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究的組織芯片購自上海芯超生物技術有限公司。組織芯片中包含75例胃癌和癌旁組織，以及與組織相對應的患者臨床病理信息和隨訪預后信息。根據第八版國際抗癌聯盟的TNM分期標準確定腫瘤臨床分期，其中28例Ⅰ～Ⅱ期，47例Ⅲ～Ⅳ期。75例研究對象均為原發性胃癌患者且手術前、后均未接受過放療和/或化療。

1.2 免疫組化方法和評分 將組織芯片放入63 ℃烘箱中烘烤1 h，經二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水后用檸檬酸緩沖液進行抗原修復。通過內源性過氧化物酶阻斷劑阻斷后以PBS緩沖液洗三次。在切片上加入DUSP14抗體（貨號：ab110938，1：300）室溫孵育1 h。PBS緩沖液洗三次后在切片上滴加通用型二抗，室溫孵育15 min后以PBS緩沖液洗三次。最后用50 uL DAB滴于標本上室溫顯色3～5 min，同時用顯微鏡觀察即時顯色情況。顯色完成后經蘇木精復染、梯度酒精脫水后完成封片。根據組織細胞染色比例和染色強度對每個視野進行評分，由目前公認的染色方法進行評分，染色比例評分標準為：0分（≤1%）、1分（2%～25%）、2分（26%～50%）、3分（51%～75%）和4分（≥76%）；染色強度評分標準為：0分（無染色）、1分（弱）、2分（中等）和3分（強）。最終染色得分=細胞染色比例×染色強度，0～3分為低表達，4～12分為高表達。所有免疫組化結果分別由兩位病理科專家獨立評估完成。

1.3 統計學方法 使用SPSS 21.0統計軟件分析數據，計量資料采用t檢驗，計數資料采用卡方檢驗。COX回歸模型用于確定預后的影響因素，Kaplan-Meier用于生存分析曲線分析。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 DUSP14在胃癌組織中表達模式 DUSP14表達主要定位于細胞核和胞漿。75例胃癌和癌旁組織的組織芯片中，DUSP14在胃癌組織中53例高表達，22例低表達，而癌旁組織表達量少（圖1）。

圖1 組織芯片檢測DUSP14在胃癌和癌旁組織中的表達情況（左：4×10，右：10×20）

2.2 DUSP14表達與胃癌患者的臨床病理參數 結合對胃癌中DUSP14的表達模式與胃癌患者臨床病理參數分析發現：DUSP14高表達組患者的腫瘤低分化、淋巴結N2和N3分期、TNM分期III期和IV期的構成比均顯著高于低表達組，差異有統計學意義。此外，DUSP14高表達而與兩組患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位和T分期差異無統計學意義（見表1）。

表1 DUSP14在胃癌中的表達與胃癌患者臨床病理參數的關系

2.3 DUSP14表達與胃癌患者預后的關系 根據組織芯片中DUSP14表達情況及對應患者的預后信息，通過Kaplan-Meier生存曲線進一步評估其與胃癌患者預后的關系。如圖2所示，DUSP14高表達患者的總生存時間明顯低于低表達患者（Log Rank=10.60，P＜0.05）。進一步通過單因素和多因素COX回歸分析了解患者臨床病理參數對預后的價值，單因素分析結果表明：腫瘤低未分化、TNM分期Ⅲ期和Ⅳ期以及DUSP14高表達的患者預后較差；多因素分析結果表明DUSP14高表達是胃癌患者預后差的獨立危險因素（見表2）。

圖2 DUSP14表達情況與胃癌患者術后總生存率關系

表2 胃癌患者臨床病理參數與總生存時間的單因素和多因素分析

3 討 論

胃癌是一種發病率高、死亡率高的消化道惡性腫瘤。近年來，由于早期篩查技術的發展和人們對健康的重視，全球早期胃癌的診斷率有所提高。但由于早期胃癌的癥狀不典型，很多患者發現時已處于中晚期，預后較差。因此，篩選有效、敏感的分子標志物對胃癌的早期診斷和預后的改善具有重要意義。

DUSP家族具有使蛋白質的絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸殘基去磷酸化，以及從其他非蛋白質底物（包括信號脂質）中清除磷酸鹽的能力，可調控多種磷酸化相關的細胞信號。DUSPs 調節包括免疫、神經生物學和代謝穩態在內的多種基本生理過程，同時其還參與腫瘤發生發展、耐藥和代謝紊亂等多種病理過程[3]。DUSP14是非典型DUSP家族中的一員，參與去磷酸化細胞外信號轉導激酶（ERKs）、c-Jun氨基末端激酶（JNKs）和p38激酶的調節。目前有研究表明，DUSP14在胰腺癌中高表達，并能促進胰腺癌的發生發展和導致不良預后[5]。還有學者的研究報道表明，DUSP14與乳腺癌的侵襲轉移[4]和黑色素瘤的發病風險[7]相關。但目前為止，DUSP14在胃癌中的表達及具體意義并未明確。

本研究基于TCGA和GSE芯片數據和前期篩選得出DUSP14在胃癌中高表達并會導致預后不良，然后我們通過實驗首先得到DUSP14在胃癌中高表達，驗證了上述結果。其次，我們進一步分析了該部分胃癌患者的臨床病理參數，結果表明，DUSP14的高表達與腫瘤低未分化、淋巴結N2和N3分期、TNM分期Ⅲ期和Ⅳ期密切相關。這表明，DUSP14對胃癌的淋巴結轉移等有著明顯的促進作用。最后，我們通過隨訪資料的分析表明，DUSP14確實是胃癌患者的獨立預后影響因素。目前關于DUSP14在腫瘤發生發展機制方面的研究較少。Wei等的研究表明，DUSP14在胰腺癌中高表達，且通過上皮間質轉化促進了胰腺癌侵襲轉移的表型變化[5]。

此外，關于DUSP家族其他基因在消化道腫瘤的研究報道中，有研究結果[8]表明在胃癌中MIR-122-5P通過下調DUSP4表達，抑制了胃癌細胞的侵襲、遷移和轉移能力。在結腸癌中，DUSP4的高表達可能通過刺激促生長基因如Myc和細胞周期蛋白D1導致腫瘤增殖能力增加。DUSP10作為ERK的支架蛋白通過阻止磷酸化ERK的核積累，從而抑制ERK依賴性轉錄和促進結腸癌的進展[9]。而DUSP14在促進胃癌進展中的機制有待我們進一步深入研究。

綜上所述，DUSP14在胃癌的發生發展中起著一定的促進作用，我們推測DUSP14可作為胃癌的新型診斷和預后的標記物。但本研究仍有待進一步的多中心大樣本研究來驗證。